突变型天花粉蛋白TCSYFF81-83ACS的生物活性及免疫原性分析

目的:构建一种突变型天花粉蛋白(trichosanthin,TCS),并对其生物活性和免疫原性进行分析。方法:选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(YFF81-83)进行定点突变,并将所构建的突变体(TCSYFF81-83ACS)在大肠杆菌中进行表达及纯化。随后与野生型TCS(wTCS)比较,分析其DNA酶活性、致核糖体失活活性、免疫原性和急性毒性。结果:初步检测显示,所构建的突变型TCS活性与wTCS活性几乎相当,而其免疫原性有所降低。结论:通过该方法改造TCS是可行的,有可能为抗HIV治疗提供一种高效、低毒、廉价的药物。     

小鼠肺纤维化模型中基质金属蛋白酶-9及其抑制剂表达水平的变化

目的 :研究小鼠博来霉素在肺纤维化模型中肺泡巨噬细胞(AM)分泌的基质金属蛋白酶 9(MMP 9)和基质金属蛋白酶抑制剂 1(TIMP 1)的表达随着时间的变化 ,观察肺纤维化中MMP 9和TIMP 1的表达是否存在失衡。方法 :以博来霉素诱导建立小鼠肺纤维化模型 ,采用HE染色观察肺部胶原沉积状况。选用抗CD6 8mAb ,采用微小免疫磁珠法分离纯化肺泡灌洗液中的AM ,用Hoechst 332 5 8染色AM ,在下光镜高倍视野计数法评估AM的纯度和活性 ,用EIA法检测AM上清液中MMP 9和TIMP 1的表达。结果 :肺组织切片HE染色显示小鼠肺部胶原沉积在 1、3、7、14、2 8d呈逐渐加重趋势。粗分离的AM纯度为 (82 .5± 2 .5 ) %。采用微小免疫磁珠法分离肺泡灌洗液中的AM纯度可达到 (99.3± 0 .7) % (P <0 .0 5 )。纯化后的细胞存活率为 (92 .5± 1.8) % ,与纯化前的 (92 .7± 2 .0 ) % ,相差不大 (P >0 .0 5 )。随着小鼠肺间质纤维化的进展 ,MMP 9的分泌量逐渐减少 ,而TIMP 1的表达量逐渐增加。结论 :在小鼠肺纤维化中AM分泌的MMP 9和TIMP 1之间存在失衡 ,表明基质降解系统受到抑制     

运用学会平台服务科技工作者的实践与思考

为科技工作者服务是学会的主要职责之一。学会可以通过举办学术会议、开展科普活动、提高学术任职、评优推优、设奖报奖、加强组织建设、营造学习范围、坚持民主办会、发挥集体智慧等多种方式服务科技工作者。     

天花粉蛋白突变体的构建及其在原核系统中的表达

目的：构建天花粉蛋白（TCS）突变体,并将其在原核系统内进行表达及纯化。方法：借助计算机预测TCS可能的抗原决定簇（YFF81-83）并设计出适当的突变引物。以栝楼基因组DNA为模板,利用重组PCR技术扩增TCS突变体全长基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后与原核表达载体pRSET-A连接,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序。将所获阳性重组质粒转化感受态E.coli BL21（DE3）,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行Western blot鉴定。最后用Ni-NTA亲和层析柱对所获突变体蛋白进行纯化。结果：成功构建了TCS突变体（TCSYFF81-83ACS）,并获得了突变体蛋白在大肠杆菌内的可溶性高效表达,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,产生出大量均一的TCS突变体蛋白。结论：TCS的定点突变及其在原核系统内的表达,为基因工程方法改造TCS提供了新的途径。     

食品微生物学教学新模式探讨

根据食品微生物学的课程特点，阐述了在教学过程中所采用的“课堂小竞赛”的方法、规则和所需注意的问题。这种教学方法和模式旨在加深学生对所学知识的理解和掌握，拓展学生的知识面，培养学生的创新精神和创新能力。     

医学微生物实验教学改革初探

实验课是医学微生物教学的重要组成部分,能够有效巩固理论课教学成果,培养学生分析问题和解决问题的能力.该文分析了传统实验课教学中存在的一些问题,提出医学微生物实验课的改革方向:重组教学内容、改进教学方法,同时改革考核制度,培养出符合时代要求的创新型人才.     

HIV毒株分离及体外感染实验研究

目的 从艾滋病病毒(HIV)感染者(万某)分离获得HIV毒株，应用此毒株在体外攻击与HIV感染者长期无保护性行为未引发感染者(张某)及健康人的淋巴细胞，检测病毒感染细胞情况，研究抗感染保护的机制。方法 采用RT测定法和P24抗原检测法。将HIV感染者淋巴细胞与健康人淋巴细胞共培养，并将获得的HIV毒株体外攻击张某及健康人的淋巴细胞，分别观察细胞病变并检测P24抗原及逆转录酶的活性。结果 从万某血中分离获得了HIV—1毒株，连续8周显微镜观察，从第2周开始可见HIV特有的细胞病变，逆转录醇的活性检测和P24抗原检测结果从第2周为阳性，说明病毒分离成功。健康人淋巴细胞自HIV—l感染后2周开始，显微镜可观察到HIV—l持有的细胞病变，逆转录酶的活性检测和P24抗原检测结果均为阳性，表明HIV侵入。张某的淋巴细胞在HIV感染后显微镜下观察，始终未见特有的细胞病变，逆转录酶的活性检测和P24抗原检测结果均为阴性，表明HIV病毒未侵入细胞。结论 分离的毒株可以感染健康人淋巴细胞，说明病毒本身无变异；病毒不能侵入张某的淋巴细胞，可能是其淋巴细胞表面HIV—l受体或辅受体的基因或功能发生突变，导致病毒无法侵入机体。     

天花粉蛋白突变体TCSFYY163-165CSA的构建表达与纯化

目的:构建天花粉蛋白(TCS)突变体基因,并在原核系统进行表达及纯化.方法:应用计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇(FYY163 - 165),并进行定点突变.以栝楼基因组DNA为模扳,经PCR扩增突变基因,与pRSET-A表达载体连接,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序.将阳性重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行Western blot法鉴定和Ni-NTA层析纯化.结果:构建了带有TCS突变体基因(TCSFYY163- 165CSA)的重组表达质粒,使目的蛋白在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化后,得到均一的TCS突变体蛋白.结论:成功地构建了TCS突变体基因TCSFYY163 - 165CSA,并获得高效表达,为基因工程方法改造TCS提供了新的途径.     

4例HIV-1耐药感染者的发现及其耐药毒株的分离与检测

目的研究从笔者发现的4例HIV-1耐药感染者分离获得的HIV-1毒株是否为耐药毒株。方法用RT-PCR法连续检测13例HIV-1感染者在接受抗病毒治疗过程中血浆病毒载量的变化情况;用HIV-1感染者淋巴细胞与健康人淋巴细胞共培养的方法从13例HIV-1感染者分离获得HIV-1毒株;从4例耐药感染者分离获得4株HIV-1毒株,在其培养液中加入逆转录酶抑制剂,检测毒株逆转录酶活性。结果13例接受抗病毒治疗的HIV-1感染者中的9例从治疗开始第1个月到第15个月中,病毒载量明显下降,感染者对于治疗药物敏感;其余4例从治疗开始第1个月到第10个月,病毒载量明显下降,从第11个月到第13个月病毒载量维持在此水平,但从第14个月到第19个月,病毒载量明显上升,持续在此水平并有上升趋势,确认为耐药感染者。病毒分离培养发现13例血样从第2周开始均出现HIV特有的细胞病变,逆转录酶的活性检测和P24抗原检测结果为阳性,成功分离获得HIV-1毒株13株。4例耐药HIV-1感染者分离获得的4株HIV-1毒株体外培养中加入逆转录酶抑制剂,发现HIV-1感染特有细胞病变持续存在,逆转录酶的活性检测和P24抗原检测结果也始终为阳性,说明此4株HIV-1毒株为耐药毒株。结论从耐药HIV感染者成功分离获得耐药HIV毒株,流行病学检测发现4例HIV-1感染者来自同一地区,有耐药毒株传播的可能。