腹主动脉灌注丙泊酚减轻脊髓缺血-再灌注损伤与抗氧化和减轻钙超载的关系

目的 本研究拟探讨腹主动脉灌注丙泊酚减轻脊髓缺血-再灌注损伤是否与其抗氧化和减轻钙超载相关.方法 新西兰大耳白兔60只,随机均分为生理盐水(NS)组、10%脂肪乳(P0)组、丙泊酚30mg/kg(P30)组、40mg/kg(P40)组、50mg/kg(P50)组和60mg/kg(P60)组.全麻后开腹阻断肾动脉远端腹主动脉及双侧髂总动脉30min,并从阻断即刻开始,经股动脉预置导管向腹主动脉分别灌注生理盐水、10%脂肪乳及不同剂量的丙泊酚溶液至开放停止.再灌注48h,取L5脊髓节段,检测脊髓组织的超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和脊髓前角神经细胞内Ca2 荧光强度.结果 与NS和P0组比较,P30、P40、P50和P60组的SOD活性显著升高(P<0.05),MDA含量和Ca2 荧光强度显著降低(P<0.05).SOD活性:P50组最高(P<0.05),P40、P60组高于P30组(P<0.05).MDA含量:P50组最低(P<0.05),P60组低于P30、P40组(P<0.05).Ca2 荧光强度:P60组低于P50组,P50组低于P30、P40组(P<0.05).结论 丙泊酚可剂量依赖性地保护脊髓组织SOD活性、降低MDA含量和脊髓前角神经细胞内Ca2 荧光强度,提示该保护作用与其抗氧化和减轻神经细胞钙超载有关.     

DADLE对SH-SY5Y细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的：探讨[D-Ala2,D-Leu5] enkephalin（ DADLE）对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y 细胞的缺氧复氧的保 护作用。方法：将体外培养的SH-SY5Y 细胞分别缺氧6 、12、24 h 和48 h,均复氧4 h 后观察细胞形态改变,采用 MTT法检测细胞生存率,评估细胞损伤程度。在此基础上,于缺氧12 h 期间首先给予DADLE 100 pmol/L 作用于 细胞,评价DADLE能否减轻神经细胞缺氧复氧损伤;继而分别用10 pmol/L、100 pmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L 和100 nmol/L 不同浓度的DADLE溶液处理细胞,研究DADLE保护作用是否具有剂量效应关系。结果：SH-SY5Y 细胞缺氧6、12、24 h 或48 h,复氧4 h 后,细胞生存率分别为（68.1±4.3）％、（52.6±2.8）％、（26.7±1.5）％ 或（3.5±1.7）％。SH-SY5Y 细胞缺氧12 h 期间给予DADLE 100 pmol/L 处理可使细胞生存率上升到（58.7±0.46）%。 5 个给药浓度中,10 pmol/L 和100 pmol/L DADLE可使神经细胞生存率上升,而1、10 nmol/L 和100 nmol/L 则变 化不明显。结论：DADLE对SH-SY5Y 的缺氧复氧损伤具有保护作用,且其保护效果呈现出较小剂量优于较大剂量 的量效关系,本实验中最佳保护剂量为10 pmol/L。     

异丙酚对脊髓兴奋性氨基酸含量的影响

目的 观察异丙酚对兔缺血再灌注损伤脊髓的保护作用以及对兴奋性氨基酸(excitatory amino acid,EAA)的影响.方法 健康新西兰大白兔60只,雌雄各半,体重2.0～2.5 kg.采用左肾下腹主动脉阻断法建立脊髓缺血再灌注损伤模型,阻断开始即泵入灌注液6 mL/kg(不足部分均以10%脂肪乳补充),灌注速度12 mL/(kg·h),30 min后停止灌注,开放腹主动脉.根据灌注液的不同,随机分为生理盐水组(A组)、10%脂肪乳组(B组)、30 mg/kg异丙酚组(C组)、40 mg/kg异丙酚组(D组)、50 mg/Kg异丙酚组(E组)及60 mg/kg异丙酚组(F组),每组10只.分别记录麻醉清醒即刻、再灌注后6、24和48 h兔神经行为学评分;于再灌注后48 h取L4～6节段脊髓组织计数脊髓前角正常神经元;采用高效液相色谱法测定脊髓组织中EAA含量.结果 C、D、E、F组各时间点神经行为学评分明显优于A、B组(P＜0.05),E组评分最高(P＜0.05),A、B组间差异无统计学意义(P＞0.05).C、D、E、F组脊髓前角正常神经元明显多于A、B组(P＜0.05),且E组多于C、D、F组(P＜0.05).A、B、C、D、E、F组脊髓组织EAA含量均明显高于正常值,其中A、B组最高(P＜0.05),但A、B组间差异无统计学意义(P＞0.05);E组最低(P＜0.05).谷氨酸、天门冬氨酸含量均与脊髓前角正常神经元计数及再灌注后48 h神经行为学评分成负相关,相关系数分别为-0.613、-0.536、-0.874及0.813(P＜0.01).结论 异丙酚能降低缺血再灌注脊髓组织中EAA含量,减轻脊髓缺血再灌注损伤.     

腹主动脉灌注利多卡因对兔脊髓缺血/再灌注损伤的保护作用

目的 建立兔脊髓缺血/再灌注损伤模型,研究经腹主动脉灌注利多卡因对脊髓缺血/再灌注损伤的作用.方法 新西兰大耳白兔16只,随机分为两组:A组为对照组(8只),B组为利多卡因组(8只).静脉麻醉后气管插管,持续监测平均动脉压、心率、脉搏血氧饱和度及直肠温度.手术暴露腹主动脉和双侧髂总动脉,经股动脉置一细导管至腹主动脉内距左肾动脉1.0 cm处,并于左肾动脉开口远端0.5 cm处阻断腹主动脉,同时阻断左、右侧髂总动脉,阻断即刻开始经导管向阻断的腹主动脉远端以12 mL·kg~(-1)·h~(-1)的速度灌注实验药物.A组灌注常温0.9%氯化钠溶液(12 mL·kg~(-1)·h~(-1)),B组灌注以常温0.9%氯化钠溶液稀释的等容量利多卡因溶液(40 mg/kg),30 min后开放血管.于动物完全清醒即刻及再灌注后6、24、48 h对双后肢神经功能进行评估;再灌注48 h,取脊髓L_3～L_5 3个节段制作石蜡切片,光学显微镜下观察并计数正常的前角运动神经元.结果 清醒即刻及再灌注后6、24、48 h,B组的神经行为学评分均显著高于A组(P值均<0.05);再灌注48 h,A、B两组脊髓前角正常神经元中位数(四分位间距)分别为1(2)、9(6)个,B组显著多于A组(P<0.05).结论 腹主动脉阻断期间动脉内灌注利多卡因可减轻脊髓缺血/再灌注损伤.     

在人体模型上成功进行环甲膜穿刺所需最少训练次数的研究

目的正确而快速的环甲膜穿刺在无法施行人工通气和气管插管的情况下是一项重要的急救措施。然而，许多麻醉医师尚未施行过该项操作。本研究旨在探讨在人体模型上，用40s或更短的时间完成经皮环甲膜穿刺所需的最少训练次数。方法所有志愿者观看示教录像了解操作步骤后，使用备好的经皮环甲膜穿刺扩张急救设备。在人体模型上连续进行10次穿刺，记录每次从皮肤定位至气道通气的时间。如每次操作能在40s或少于405的时间内完成，即为穿刺成功；若连续3次的穿刺时间、穿刺成功率相比没有明显变化，则认为已达到平台水平。结果本实验发现10次操作的环甲膜穿刺时间均有差异（P〈0．001），且第4次操作前的连续3次操作时间亦有差别，在第4次穿刺操作后已达到平台；而其成功率则在第5次操作后不再有明显增加（第4、第5、第6和第7次的成功率分别为94％，96％，96％和96％）。结论利用人体模型进行环甲膜穿刺训练，能够缩短穿刺成功所需时间，提高成功率。至第5次操作时，已有96％的参与者能够在40s或更短时间内完成穿刺。故本研究建议需要在紧急情况下处理困难气道的医务人员。应利用人体模型连接进行5次该项训练，或直至其穿刺时间达到40s或短于40s为止。使探作者熟练掌握谊技术而不至生疏的最佳训练间隔时间，尚需进一步研究。     

建立转基因动物的方法及其进展

本文从显微注射法、逆转录病毒感染法、胚胎干细胞法、精子载体法和体细胞核移植法等5个方面回顾了建立转基因动物的方法,同时综述了其研究进展,并对其前景进行了展望。     

猪全胰十二指肠移植术的麻醉处理与围术期血流动力学及血糖的变化

目的　了解猪全胰十二指肠移植术围术期血流动力学及血糖的变化规律,为临床麻醉提供理论依据。方法　4 0只杂种猪随机分为供、受体两组,以肠内引流加门脉系统回流的术式行全胰十二指肠移植。氯氨酮、阿托品基础麻醉后,硫喷妥钠、琥珀胆碱静脉诱导插管,咪唑安定、芬太尼、哌库溴铵、硫喷妥钠维持麻醉。直视下行右颈总动脉及右颈外静脉置管,连续监测平均动脉压、心率及经皮脉搏氧饱和度。分别测定术前、胰腺切除后5 m in、30 m in、灌注前(新胰血管吻合完成时)、灌注后30 m in及术后第1d、2 d各时点的血糖值。结果　无胰期心率逐渐增快,血压逐渐下降,新胰血管吻合完成时二者与无胰前期相比有统计学差异(P<0 .0 5 ) ,新胰复灌后逐渐趋于正常。血糖浓度自胰腺切除开始较术前明显增加(P<0 .0 5 ) ,新胰灌注开始后逐渐下降,至灌注后30 min仍高于正常水平(P<0 .0 5 ) ,术后2 d基本恢复正常(P>0 .0 5 )。结论　猪全胰十二指肠移植术中无胰期血流动力学波动较其他各期明显,经快速补液维持可维持有效循环血量。血糖水平变化大,围术期应严密监测,必要时使用胰岛素治疗。     

缺血后处理和缺血预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用

缺血预处理及后处理可减轻心肌缺血再灌注损伤，但对脊髓缺血再灌注损伤的作用有待进一步探讨。本研究拟观察缺血预处理、缺血后处理及二者联合应用对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用。     

异丙酚对兔脊髓缺血再灌注时脊髓前角神经细胞凋亡的影响

目的 探讨异丙酚对兔脊髓缺血再灌注时脊髓前角神经细胞凋亡的影响.方法 新西兰大耳白兔60只,月龄4～6月,体重2.0～2.5 kg,随机分为6组(n=10):对照组(C组)、10%脂肪乳组(F组)、异丙酚30 mg/kg(P1)组、异丙酚40 mg/kg(P2)组、异丙酚50 mg/kg(P3)组和异丙酚60 mg/kg(P4)组.P1组、P2组、P3组和P4组异丙酚用10%脂肪乳稀释至6 ml/kg,C组和F组给予等容量生理盐水或脂肪乳.全麻下开腹阻断左肾动脉远端的腹主动脉及双侧髂总动脉30 min进行脊髓缺血,自缺血即刻开始,各组以12 ml·kg-1·h-1的速率经股动脉输注生理盐水(C组)、10%脂肪乳(F组)和不同剂量异丙酚(P1～4组),30 min后停止输注,开放腹主动脉行再灌注.再灌注48 h时,取L4～6脊髓组织,光镜下计数脊髓前角正常运动神经细胞;采用TUNEL法计数脊髓前角总细胞和凋亡细胞,计算细胞凋亡指数;采用免疫组化法测定脊髓前角cagpase-3表达.结果 与C组和F组比较,P1～4组脊髓前角正常运动神经元计数升高,凋亡指数降低,caspase-3表达下调(P<0.05);与P1组比较,P2～4组脊髓前角正常运动神经元计数升高,凋亡指数降低,P3组和P4组cagpase-3表达下调(P<0.05);与P2组比较,P3组脊髓前角正常运动神经元计数升高,P4组降低,P3组和P4组凋亡指数降低,caspase-3表达下调(P<0.05);与P3组比较,P4组脊髓前角正常运动神经元计数降低,凋亡指数升高,cagpage-3表达上调(P<0.05).结论 腹主动脉阻断期间,经腹主动脉输注30～60 mg/kg异丙酚可抑制脊髓前角神经细胞凋亡,从而减轻兔脊髓缺血再灌注损伤,且与剂量有关,其机制与下调脊髓cagpage-3表达有关.