基于UPLC-Triple-TOF-MS/MS结合SWATH技术对不同泌乳期人乳脂质变化分析

为深入了解婴儿时期人乳中复杂的脂质含量的动态变化,采用超高效液相色谱-三重四极杆串联飞行时间质谱及具有高采集命中率的顺序窗口采集所有理论质谱模式（sequential window acquisition of all theoretical mass spectra,SWATH）对不同泌乳阶段人乳中的脂质进行鉴定及相对定量分析。结果显示,在3 个泌乳阶段的人乳中共检测到229 种脂质。根据“脂质代谢途径研究计划”中的分类,共检测到五大类物质：甘油酯类（glycerolipid,GL）主要包括24 种甘油二酯和28 种甘油三酯;甘油磷脂类（glycerophospholipid,GP）主要包括33 种磷脂酰乙醇胺、21 种磷脂酰胆碱、8 种磷脂酰丝氨酸、13 种磷脂酰甘油、10 种磷脂酸和7 种磷脂酰肌醇;鞘脂类（sphingolipid,SP）化合物共22 种;甾醇脂类（sterol lipid,ST）化合物共10 种;脂肪酸类及其衍生物（fatty acids,FAs）共4 种。随着泌乳期的延长,GL、SP的相对含量逐渐增加,而GP、ST、FAs的相对含量逐渐下降。本研究实现了人乳中脂质的全面定性与相对定量分析,方法灵敏度高、精密度及稳定性良好,同时搭配SWATH采集模式,为科学模拟各阶段人乳及开发不同段龄婴幼儿奶粉的研发提供一定参考依据。     

干酪乳杆菌胞外多糖诱导小鼠骨髓来源树突细胞成熟以及分泌IL-6、TGF-β和IL-23

为研究干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）胞外多糖（exopolysaccharide,EPS）促进体外培养的小鼠未成熟骨髓来源树突细胞（bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs）成熟的作用,分析不同剂量的EPS对BMDCs分泌细胞因子白细胞介素（interleukin,IL）-6、转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）和IL-23的影响,并检测EPS对BMDCs抗原提呈能力的影响。首先从干酪乳杆菌中分离纯化出EPS,并检测EPS的纯度;把从BALB/c小鼠体内分离出的骨髓细胞分化为BMDCs,未成熟BMDCs分别与磷酸盐缓冲液、不同剂量EPS和脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）体外培养,采用流式细胞法检测了BMDCs成熟表面标记物MHC II和CD86的表达,酶联免疫吸附检测（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法分析了IL-6、TGF-β和IL-23的表达量,CCK-8法检测了BMDCs与小鼠脾淋巴细胞的混合培养体系中淋巴细胞的增殖率。结果表明：分离出EPS的纯度约为95%;EPS能够上调BMDCs表面MHC II和CD86的表达量;EPS可以显著促进BMDCs分泌IL-6、TGF-β和IL-23（P＜0.05）,但促进水平低于LPS;EPS可以明显促进BMDCs刺激异基因淋巴细胞的增殖。综上所述,在体外实验中,干酪乳杆菌EPS能够促进BALB/c小鼠BMDCs的成熟,诱导BMDCs分泌与辅助性T17细胞分化和增殖相关的细胞因子IL-6、TGF-β和IL-23,并且可以增强BMDCs的抗原提呈能力。     

光照调整对于牛乳中褪黑素质量浓度的影响及其检测

通过调整奶牛的光照周期使牛乳中富含褪黑素成分,并通过液相色谱技术对于富含褪黑素的原料乳进行检测,结果发现褪黑素质量浓度有显著提高。色谱条件:色谱柱Zorbax eclipse XDB C18柱;流动相为甲醇∶水=60∶40,流速为1 mL/min,荧光检测器Ex=286 nm,Em=345 nm。     

基于UPLC-Triple-TOF MS/MS对巴氏杀菌乳中磷脂成分的分析

基于超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间高分辨质谱（ultra-high performance liquid chromatography-triple quadrupole-time of flight tandem mass spectrometry,UPLC-Triple-TOF MS/MS）法对巴氏杀菌乳中的磷脂成分进行分析鉴定。采用色谱柱ACQUITY UPLC? BEH C18（2.1 mm×100 mm,1.7 μm）,以流动相A水-甲醇-乙腈（1∶1∶1,V/V）和流动相B异丙醇-乙腈（1∶1,V/V）进行梯度洗脱,在电喷雾电离正模式下采集数据。依据高分辨质谱提供的保留时间、准分子离子、二级碎片等脂质分析数据,并结合标准品碎裂方式等信息,共鉴定出磷脂分子68 种。其中,磷脂酰胆碱22 种,占比7.98%;磷脂酰乙醇胺17 种,占比56.60%;磷脂酰丝氨酸10 种,占比1.70%;磷脂酰肌醇7 种,占比1.33%;鞘磷脂12 种,占比32.39%。本研究采用灵敏度高、精密度及稳定性良好的UPLC-Triple-TOF MS/MS方法实现了对牛乳中磷脂的全面定性与定量分析。此方法检测出的牛乳磷脂信息完整、磷脂种类多于其他检测技术,可为牛乳的磷脂研究提供数据基础。     

奶山羊乳腺中胰岛素样生长因子及其受体的表达与作用

为研究胰岛素样生长因子及胰岛素样生长因子受体在奶山羊乳腺组织青春期、妊娠期、泌乳期及退化期表达的差异及变化,探索其在奶山羊乳腺发育过程中的作用,根据奶山羊乳腺发育特点及生长阶段不同分为青春期、妊娠期、泌乳期及退化期,采用激光共聚焦显微镜检测胰岛素样生长因子在奶山羊乳腺各生长阶段的表达及定位,通过定量分析来比较胰岛素样生长因子在奶山羊乳腺各生长阶段表达的差异,描述其在奶山羊乳腺发育过程中的作用.结果显示:胰岛素样生长因子及胰岛素样生长因子受体在奶山羊乳腺法如各时期均有表达,表达水平与乳腺发育密切相关.     

东北自然发酵酸菜细菌多样性及其与生物胺的关系

酸菜是我国东北地区独具特色的传统发酵食品。酸菜发酵过程中复杂的微生物代谢过程会产生潜在的危害物——生物胺。以东北不同地区自然发酵酸菜为对象,研究酸菜细菌多样性及其与生物胺的关系。研究表明,6个地区的酸菜样品总酸、亚硝酸盐、食盐、还原糖、游离氨基酸、生物胺含量,菌落总数及乳酸菌总数存在显著差异,其中菌落总数、乳酸菌总数及生物胺含量分别为5.11~5.81lg(CFU/g)、4.09~5.12lg(CFU/g)、59.22~131.34mg/kg。采用高通量测序分析技术对东北自然发酵酸菜样品中细菌群落结构组成进行对比分析。结果表明,酸菜样品中的优势细菌属主要包括乳杆菌属和节杆菌属。Spearman相关性分析表明,在相对丰度排名前10位的细菌属中,不溶螺杆菌属与尸胺含量呈显著正相关(P<0.05),与组胺含量呈极显著负相关(P<0.01);弓形杆菌属与精胺含量呈显著负相关(P<0.05);丛毛单胞菌属与亚精胺含量呈显著正相关(P<0.05);小球菌属与酪胺含量呈极显著正相关(P<0.01);不溶螺杆菌属和节杆菌属与酪胺含量呈显著负相关(P<0.05);普雷沃氏菌属与精胺含量呈极显著负相关(P<0.01)。因此,在后续研究中可以通过分离纯化与生物胺呈负相关的菌株作为功能性发酵剂,抑制发酵蔬菜中生物胺的产生及积累。研究旨在为了解生物胺形成规律及机制,有效控制酸菜生物胺生成,提升自然发酵酸菜品质及安全性提供理论依据。     

牛初乳中抗高血压因子对成年大鼠心肌细胞电压依懒性钙通道的影响

目的:通过观察牛初乳中抗高血压因子(AFBC)对氯化钾诱发成年大鼠心肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响,探究可能抑制大鼠心肌收缩的作用机制。方法:应用钙荧光指示剂Fura-2/AM负载急性分离的大鼠心肌细胞。结果:AFBC(0.5mg/mL)对静息状态下心肌细胞内Ca2+浓度无明显影响,可明显抑制高钾(50 mmol/L)引起的心肌细胞内Ca2+浓度的升高。结论:AFBC可阻断成年大鼠的心肌细胞电压依赖性钙通道。     

基于UPLC-QE-MS探究褐变反应对酸乳中代谢物的影响

采用超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱质谱非靶向代谢组学的方法,探究普通酸乳与褐色酸乳代谢物的差异,并从代谢物的角度评估2种酸乳的不同.在正负离子模式下采集2种酸乳的代谢物信息并结合多元统计分析方法对2种酸乳的代谢物进行筛选,共得到117种差异性代谢物.与普通酸乳相比,褐色酸乳中有106种代谢物的相对含量上调,11种代...     

多种绿色DNA嵌入染料实时荧光PCR检测猪DNA效果比较

实时荧光定量PCR是食品科学领域一种高效、灵敏的研究技术,荧光染料的种类和浓度会对实时PCR反应产生一定影响。以8种绿色荧光DNA嵌入染料SYTO 11~14,SYTO 16,SYTO 21,SYTO 24~25为研究对象,体系选择荧光染料浓度分别为10,5,2,1,0.5μmol/L,以从猪肉中提取的基因组DNA为模板进行扩增,产物长度149 bp。通过分析Ct值和熔解曲线,评价染料浓度对扩增效果的影响,初步筛选出最适染料及相应浓度:SYTO 11(5μmol/L,2μmol/L),SYTO 13(10μmol/L,5μmol/L),SYTO 16(10μmol/L,5μmol/L),SYTO 21(1μmol/L)和SYTO 24(0.5μmol/L)。根据筛选结果自配反应预混液,以2种商业实时荧光PCR预混液为参照,通过模板10倍梯度稀释绘制标准曲线,计算扩增效率,R2均大于0.99,线性范围均在40 ng~0.04 pg之间,其中染料SYTO 13(10μmol/L)和SYTO 16(10μmol/L,5μmol/L)扩增效率分别为99.35%,100.50%和99.71%,接近商业试剂盒2(BYRT染色,扩增效率99.61%),高于商业试剂盒1(Evagreen染色,扩增效率97.80%),具有实际应用价值。     

乳中褪黑激素及褪黑激素乳品研究进展

介绍了褪黑激素的合成与分泌过程,乳中褪黑激素水平不同时间的变化以及引起这些变化的影响因素.并对国内外富含褪黑激素乳制品的研究进行了简要介绍.