丙型肝炎病毒H株包膜蛋白在昆虫细胞中的表达及意义

目的　获得丙型肝炎病毒 (HCV) H株包膜糖蛋白的重组杆状病毒 ,在昆虫细胞中稳定表达包膜糖蛋白 E1和 E2 ,并初步应用于丙型肝炎患者血清抗体的检测。方法　用 PCR方法自 HCV H株扩增出包膜蛋白 E基因 ,构建重组杆状病毒 ,并在昆虫细胞中稳定表达包膜糖蛋白 E1和 E2。免疫荧光及 Western blot方法鉴定表达产物。用表达的 E1和 E2蛋白与 35例丙型肝炎患者血清反应。结果　昆虫细胞中表达的 E蛋白呈现 3种分子大小 ,E1的相对分子量为 2 1× 10 3和 33× 10 3 ,E2的相对分子量为 6 0× 10 3。在 35份感染者血清中 ,有 4例 E1抗体阳性 ,其中 1例检出 E2抗体。在 9例 PCR检测 HCV RNA阳性而抗 HCV检测阴性的血清中 ,有 3例血清与表达的 E蛋白反应。结论　 HCV E蛋白基因可在昆虫细胞中稳定表达 ,表达的 E1和 E2蛋白可用于 HCV患者的血清学诊断     

HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶活性测定系统的研究进展

NS3/4A丝氨酸蛋白酶是理想的抗HCV靶位之一.缺乏有效的细胞培养系统和小动物模型是抗HCV药物筛选和评价的瓶颈,基于酶建立的测定系统常被用作筛选和鉴定抗HCV药物.关于NS3/4A丝氨酸蛋白酶活性的测定系统已经有很多报道,本文从细胞内测定和体外测定系统两方面综述如下.     

肾综合征出血热内分泌组织中的病毒抗原、病变及其关系

作者应用免疫细胞化学法研究了HFRS尸检内分泌及其有关组织中病毒抗原的分布,病毒抗原阳性细胞与病变的关系,病变的类型及病毒感染对胰腺内胰岛素表达的影响,所用的一抗有抗肾综合征出血热(HFRS)病毒糖蛋白(G_2),核蛋白(NP)及血凝素(HA)抗原的单克隆抗体(15种)和多克隆抗体(PAb)以及抗胰岛素(INS)单克隆抗体。结果显示,内分泌组织中有两种染色形态的病毒抗原,一种是胞浆弥漫染色的抗原,为G_2,NP或HA阳性,阳性细胞弥漫分布,另一种是以病毒包涵体(IB)形式出现的颗粒性抗原,MAbs染色多为实性,PAb染色多为空泡状。在9例胰腺组织中,有4例几乎在所有腺上皮细胞和少数胰岛细胞均为IB阳性,但PAb染色可在胰岛细胞中显示出空泡状IB。在其它内分泌组织中,IB只在少数细胞中出现。抗原阳性细胞很少出现坏死,但在脑垂体及肾上腺灶性或片状凝固性坏死区域也有弥漫性抗原阳性及IB存在。胰腺组织的胰岛素染色显示,除1例胰岛INS强阳性,其余8例均有明显的INS染色减弱及阳性细胞减少的表现。结果提示,内分泌组织中有两种病变,即以IB为特征的病毒直接感染引起的细胞病变,是病毒的弱致病变作用,该病变可能对细胞的内分泌功能产生影响;另一种病变是组织的灶性或大片性同步性凝固性坏死,是继发于病毒感染后的出血和休克,该病变会     

Pathological changes and viral antigen distribution in the lymphatic tissue of Patients with epidemic hemorrhagic fever

Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ａｎｄ　ｖｉｒａｌ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｙｍｐｈａｔｉｃ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　Ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｅｐｉｄｅｍｉｃ　ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ　ｆｅｖｅｒＬｉｕＹａｎ...     

突变型天花粉蛋白TCSYFF81-83ACS的生物活性及免疫原性分析

目的:构建一种突变型天花粉蛋白(trichosanthin,TCS),并对其生物活性和免疫原性进行分析。方法:选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(YFF81-83)进行定点突变,并将所构建的突变体(TCSYFF81-83ACS)在大肠杆菌中进行表达及纯化。随后与野生型TCS(wTCS)比较,分析其DNA酶活性、致核糖体失活活性、免疫原性和急性毒性。结果:初步检测显示,所构建的突变型TCS活性与wTCS活性几乎相当,而其免疫原性有所降低。结论:通过该方法改造TCS是可行的,有可能为抗HIV治疗提供一种高效、低毒、廉价的药物。     

乳铁蛋白(Lf)抗病毒感染研究进展

乳铁蛋白(lactoferrin,Lf)是转铁蛋白家族中的一种铁结合糖蛋白,在动物和人体内分布较广.它不仅能促进对铁的吸收、调节胚胎发育和细胞繁殖,而且在免疫调节和防御细菌、真菌和病毒中发挥重要作用.现就Lf抗病毒的研究作一综述.     

抗汉坦病毒单克隆抗体F（ab‘）2的制备及其纯度和活性鉴定

利用木瓜蛋白酶分别制备了抗汉坦病毒鼠源性单克隆抗体（ｍＡｂ）３Ｇ１和３Ｄ８Ｆ（ａｂ′）２片段。通过ＷａｔｅｒＤＥＡＥ４０ＨＲ阴离子交换色谱柱纯化后，非还原型ＳＤＳＰＡＧＥ呈现单一条带，相对分子质量（Ｍｒ）约１０００００。两种Ｆ（ａｂ′）２片段均具有良好的血凝抑制活性、病毒中和活性及对汉坦病毒感染乳鼠的保护作用     

杂交瘤细胞系复苏方法的探讨

淋巴细胞杂交瘤技术开展以来,人们获得越来越多的分泌不同特性单克隆抗体的杂交瘤细胞系,一般冻存于液氮罐中,当在复苏时,常常遭遇失败,直接影响后续工作。究其原因,如冻存细胞数量少,生长状态不良、细胞污染或补充液氮不及时等;此外,复苏时培养基条件的改变(换用另一批号小牛血清)及复苏方法不得当等也是原因。本     

结核分枝杆菌Ag85B基因疫苗免疫保护作用的初步研究

目的:研究编码结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的基因疫苗pTB30m和pTB30s对免疫动物的保护作用。方法:以基因疫苗pTB30m和pTB30s肌注免疫BALB/c小鼠。免疫完成6 wk后,用5×105 CFU的MTB H37Rv毒株经小鼠尾静脉攻击感染。同时用尼龙毛柱分离基因免疫BALB/c小鼠的T细胞,并以5×106 T细胞/只小鼠过继免疫正常BALB/c小鼠,立即用105 CFU的MTB毒株经小鼠尾静脉攻击感染。4 wk后分别计数脾脏中的细菌负荷。结果:与生理盐水对照组相比较,pTB30m及pTB30s质粒免疫组BALB/c小鼠脾脏中的细菌负荷均减少,分别为0.645(log10 CFU,P<0.01)和0.839(log10CFU,P<0.001);而空质粒对照组小鼠脾脏中的细菌负荷减少较少。经质粒pTB30m和pTB30s免疫的BALB/c小鼠的T细胞,过继免疫的正常BALB/c小鼠,对攻击感染的MTB H37Rv毒株在脾脏中的增殖具有部分抑制作用。结论:pTB30s免疫的BALB/c小鼠,对MTB H37 Rv毒株攻击的保护作用优于pTB30m质粒免疫,有望进一步用于结核病的防治研究。     

单克隆抗体治疗肾综合征出血热患者的初步观察

选择具有高中和活性和血凝抑制活性，且对肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）感染乳鼠具有良好保护作用的抗－ＨＦＲＳＶＭｃＡｂ腹水，经辛酸－硫酸铵沉淀法纯化成ＩｇＧ。在纯度鉴定、免疫学活性测定及各种安全性试验合格的基础上，首次试用于３例ＨＦＲＳ患者的治疗。结果表明，使用安全，疗效良好。随访观察１１个月，无异常反应。