截断逆挽方对慢加急性肝衰竭大鼠肝细胞进入S期关键蛋白的影响

目的:观察截断逆挽方对慢加急性肝衰竭(ACLF)大鼠肝脏细胞进入S期关键蛋白的影响。方法:将150只Wistar大鼠随机分成3组,正常组(NC)、模型组(MC)及截断逆挽方组(JD)。采用人血清白蛋白联合D-氨基半乳糖和脂多糖急性攻击制作ACLF模型。JD组大鼠在急性攻击24 h后连续灌胃,在第5、10、15天平行取材。运用HE染色法观察大鼠肝脏组织结构,Western blot法检测转录因子E2F1的表达量,RT-PCR检测CyclinA、E和Cdc25 mRNA表达量。结果:与模型组相比,JD组大鼠E2F1的表达量明显增高,并在第10天时差异最为显著(P<0.05),CyclinA、E、Cdc25表达量均有不同程度升高;与正常组相比,JD组大鼠10 d、15 d时CyclinA mRNA表达量差异显著,JD组大鼠在10 d、15 d时Cdc25和CyclinE mRNA表达量均差异显著(P<0.05)。结论:截断逆挽方可以通过调节E2F1介导的细胞再生信号通路上的关键蛋白E2F1、CyclinA、CyclinE、Cdc25的表达,从而促使细胞进入S期,加快DNA复制进程,提高肝细胞的增殖率,发挥治疗ACLF的作用。     

截断逆挽方对慢加急性肝衰竭模型大鼠肝细胞增殖途径的影响

目的:观察"截断逆挽方"对慢加急性肝衰竭(Acute-on-Chronic Liver Failure,ACLF)大鼠肝组织中周期蛋白D1(Cyclin D1)、周期蛋白A(Cyclin A)、周期蛋白依赖激酶4(CDK4)、转录因子DP1表达的影响。探讨该方预防性干预ACLF大鼠肝细胞增殖途径的作用机制。方法:SPF级Wistar雄性大鼠150只,随机分为正常对照组、模型组和截断逆挽方组,给予人血清白蛋白免疫诱导大鼠形成肝硬化模型,再联合D-氨基半乳糖(D-Gal N)与脂多糖(LPS)急性攻击,建立ACLF大鼠模型。截断逆挽方组在急性攻击前给予截断逆挽方连续灌胃3天。各组大鼠分别在急性攻击后4、8、12 h取材。蛋白质印迹法(Western Blot)检测DP1蛋白表达量,实时荧光定量qRT(Quantitative Real-Time,qRT)PCR法检测肝组织中CyclinD1、CyclinA、CDK4 mRNA的含量。结果:与正常组相比,模型4 h组CyclinD1、CyclinA、CDK4及DP1表达量升高(P0.05);8 h、12 h随着时间的推移表达量逐渐降低。与对应时间点模型组相比,截断逆挽方4 h组CyclinD1、CyclinA、CDK4及DP1表达量无明显差异,8h CyclinD1、CyclinA、CDK4及DP1表达量有升高趋势,12 h组CyclinD1、CyclinA、CDK4及DP1表达量较模型组明显升高(P0.01)。结论:截断逆挽方可能通过调节E2F1信号通路中CyclinD1、CyclinA、CDK4及DP1的表达量,促进了肝细胞的代偿性增殖,从而改善肝细胞的大面积坏死,抑制肝衰竭的发展。     

糖肾宁对糖尿病肾病小鼠肾小管损伤及铁蛋白自噬介导的铁死亡的影响

目的 研究糖肾宁(TSN)对糖尿病肾病(DKD)小鼠肾小管损伤及铁蛋白自噬介导的铁死亡的影响。方法 采用高脂饲料诱导KK-Ay小鼠建立DKD模型，与正常组相比24小时尿微量白蛋白排泄率(UAER)明显升高(P<0.05)且随机血糖≥16.7 mmol·L^-1视为模型建立成功。模型建立成功后，将KK-Ay小鼠随机分为模型组和糖肾宁组，连续给药10周。实验期间，动态监测血糖和UAER;给药10周后，检测血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平；取肾组织进行HE、PAS和普鲁士蓝病理染色，电镜观察肾小管线粒体的超微结构，Western blot检测肾组织中LC3、P62、FTH1、NCOA4、KIM-1的蛋白表达水平，并检测MDA和Fe²⁺含量。结果 与正常组相比，模型组小鼠血糖、UAER、Scr、 BUN明显升高(P<0.05),与模型组相比，糖肾宁组小鼠血糖没有明显变化(P>0.05),UAER、Scr、 BUN明显降低(P<0.05);与正常组相比，模型组小鼠LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、FTH1、KIM-1蛋白表达水平明显升高...     

菖蒲郁金汤化裁方对慢加急性肝衰竭大鼠血脑屏障通透性及脑组织IL-6、IL-1β含量的影响

目的观察菖蒲郁金汤化裁方对慢加急性肝衰竭(ACLF)大鼠脑组织IL-6、IL-1β及血脑屏障通透性的影响。方法 30只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和菖蒲郁金汤化裁方给药组,采用人血清白蛋白免疫诱导大鼠肝纤维化模型,再予D-Gal N/LPS联合腹腔注射急性攻击,建立ACLF大鼠模型。肝纤维化模型造模完成后,给药组在急性攻击前予菖蒲郁金汤化裁方灌胃5天,正常组、模型组均予0.9%氯化钠注射液灌胃5天,各组均在急性攻击8 h后麻醉处死。HE染色、电镜观察各组大鼠肝、脑组织病理变化,ELISA法观察各组大鼠脑组织白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)含量,Western Blot检测紧密连接蛋白(ZO-1)、P-糖蛋白(P-gp)、窖蛋白(Caveolin-1)的表达含量。结果与模型组相比,菖蒲郁金汤化裁方给药可降低ACLF大鼠神经元损伤、减轻脑血管水肿,减少脑组织内IL-6、IL-1β表达含量(P0.05,P0.01),降低ZO-1、P-gp、Caveolin-1蛋白表达(P0.05)。结论菖蒲郁金汤化裁方具有保护神经元、减少脑微血管水肿的作用,其作用机制可能通过开放血脑屏障,增加药物在脑内浓度,而发挥抗炎作用。     

截断逆挽方对慢加急性肝衰竭大鼠cyclin D-E2F1信号通路及转录因子活化的机制研究

目的探寻"截断逆挽方"对cyclin D-E2F1信号通路上相关转录因子的作用及该通路对慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)模型大鼠的作用机制。方法将105只Wistar大鼠随机分为正常组5只(生理盐水注射)、造模组100只予人血清白蛋白诱导肝纤维化联合D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-GalN)/脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)急性攻击,建立ACLF成模大鼠30只。将成模大鼠随机分为模型5、10、15天组(24小时后予生理盐水连续灌胃)和截断逆挽方5、10、15天组(24小时后予截断逆挽方连续灌胃),每组5只。检测各组大鼠血浆凝血酶原活动度(prothrombinase activity,PTA)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)水平,用HE染色观察肝脏病理学变化,用蛋白免疫印迹法检测转录因子DP1蛋白表达,用Real-time PCR检测cyclin D1、cyclin D2、cyclin D3、细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase4,CDK4)及细胞周期蛋白依赖性激酶6(cyclin-dependent kinase6,CDK6) mRNA的表达。结果与正常组相较,模型组大鼠血浆PTA水平显著降低,ALT、AST、TBIL水平明显升高;与同一时间模型组相较截断逆挽方10天、15天组血浆PTA明显升高,ALT、AST有所降低,cyclin D1、cyclin D2、cyclin D3、CDK4、CDK6 mRNA、DP1蛋白表达均有不同程度的上调(P<0.05)。结论截断逆挽方减轻ACLF模型大鼠肝损伤,恢复肝脏功能的作用机制可能与其上调了cyclin D-E2F1信号通路上肝细胞再生相关转录因子介导的肝细胞增殖有关。     

截断逆挽方对慢加急性肝衰竭大鼠E2F1信号通路的调节机制

目的观察"截断逆挽方"对慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)大鼠肝细胞周期转录因子E2F1、调控因子Cdc25表达量及其对肝细胞超微结构的影响,探讨该方通过调节肝细胞再生,预防慢加急性肝衰竭的作用机制。方法 SPF级Wistar雄性大鼠150只,随机分为正常组、模型组和截断逆挽方组,模型组与中药组给予人血清白蛋白尾静脉注射8周免疫诱导大鼠形成肝硬化模型,再联合D-氨基半乳糖(D-GalN)与脂多糖急性攻击,构建ACLF大鼠模型。截断逆挽方组在急性攻击前给予截断逆挽方连续灌胃3天。各组大鼠在急性攻击后4、8、12小时平行取材。蛋白质印迹法(Western Blot)检测E2F1蛋白表达量,实时荧光定量qRT(quantitative real-time,qRT)PCR法检测肝组织中Cdc25的表达。结果与正常组相比,模型4小时组E2F1和Cdc25表达量升高(P0.05);8、12小时随着时间的推移表达量逐渐降低。与对应时间点模型组相比,截断逆挽方4小时、8小时E2F1和Cdc25表达量有升高趋势,12小时组E2F1和Cdc25表达量较模型组明显升高(P0.01)。电镜观察肝组织超微结构显示:模型组肝细胞超微结构损伤严重,并随时间的推移逐渐加重,各对应时间点截断逆挽方组细胞结构损伤较模型组轻。结论截断逆挽方通过调节转录因子E2F1及细胞调控因子Cdc25的表达量,促进了肝细胞的代偿性增殖,从而改善肝细胞的大面积坏死,抑制肝衰竭的发展。     

截断逆挽方对慢加急性肝衰竭大鼠血清和肝组织白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α及肝细胞超微结构的影响

目的观察截断逆挽方对慢加急性肝衰竭(ACLF)大鼠血清和肝组织白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及肝细胞超微结构的影响,探讨其部分作用机制。方法采用人血清白蛋白免疫诱导肝纤维化联合D-氨基半乳糖/脂多糖急性攻击建立ACLF大鼠模型。将SPF级Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组和截断逆挽方组(中药组),中药组在急性攻击24 h后给予截断逆挽方连续灌胃,5、10、15 d后平行取材。透射电镜观察肝细胞超微结构变化,ELISA检测血清及肝组织IL-6、TNF-α含量。结果与正常组比较,模型组各时间点大鼠血清及肝组织IL-6、TNF-α含量增加;与模型组比较,中药组血清及肝组织IL-6、TNF-α呈下降趋势,15 d改善最明显。透射电镜观察模型组大鼠肝细胞超微结构损伤程度随时间延长逐渐加重,各对应时间点中药组损伤程度明显减轻。结论截断逆挽方能有效降低大鼠血清及肝组织IL-6、TNF-α水平,减轻肝细胞损伤,对肝细胞结构和功能有一定的保护作用。