掺镁微弧氧化钛表面促进大鼠BMSCs成骨分化的研究

目的:探讨掺镁微弧氧化钛表面对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化活性的影响.方法:以含钙、磷电解液微弧氧化处理钛表面(MAO)为对照组,通过在电解液中加入不同浓度镁构建低镁(Mg-1)和高镁(Mg-2)含量微弧氧化处理钛表面;采用场发射扫描电子显微镜(SEM)观察表面相貌结构,X射线光电子能谱仪(EDS)分析材料表面化学元素,MTT法检测钛表面大鼠BMSCs细胞代谢活性,细胞骨架染色观察钛表面细胞生长情况,碱性磷酸酶(ALP)染色/半定量分析细胞ALP蛋白的表达,实时定量RT-PCR检测Alp、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(Ocn)、骨形态发生蛋白2(Bmp2)、骨涎蛋白(Bsp)、骨桥蛋白(Opn)等成骨分化基因的表达,免疫荧光检测OCN蛋白的表达.结果:BMSCs在MAO、Mg-1、Mg-2三组钛表面生长状态均良好,Mg-2组BMSCs增殖代谢活性最佳(P<0.05);与MAO组相比,Mg-1组和Mg-2组提高了材料表面细胞成骨分化相关基因和ALP、OCN蛋白的表达,其中Mg-1组促进Runx2、Alp基因和ALP蛋白表达的作用更佳,Mg-2组上调Ocn、Bmp2、Bsp、Opn基因和OCN蛋白表达更明显(P<0.05).结论:镁离子掺入微弧氧化钛表面具有良好生物学相容性,可促进大鼠BMSCs增殖活性,显著提高钛表面的成骨分化性能,具有潜在的促骨结合作用.     

淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ对骨髓基质细胞增殖及成骨能力的影响

目的:探讨补肾药有效成分淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ对实验犬骨髓基质细胞(BMSCs)增殖及其成骨能力的影响。方法:抽取犬BMSCs,诱导培养、传至第三代时于培养液中添加淫羊藿苷或黄芪苷Ⅰ使两种药物的终浓度为50 ng/m l。设BMP-2阳性对照和空白对照组,分别于第1至第8天每天测细胞的MTT值,绘制BMSCs生长曲线、观察其增殖情况;于第1、3、6、10、14天检测BMSCs的ALP和OD值,绘制该OD值变化曲线判断ALP的活性。结果:淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ预处理后BMSCs的MTT值从第1天至第7天均高于空白对照组;BMSCs分泌ALP的OD值也均高于空白对照组,二者差异有显著性(P<0.05)。结论:淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ能促进BMSCs增殖、促进BMSCs合成ALP从而增强其成骨能力。     

牙周组织力学加载模型的研究进展

牙周组织具有机械力学响应性,可感受咀嚼力和正畸力在内的各种力学刺激并迅速产生反应,常作为力学加载对象在各种体内外模型相关的研究中广泛应用。本文回顾了近年来文献中对牙周组织的各种体内外力学加载方法(包括静态重力法、离心法、振动法、周期性张力法、流体剪应力法),对不同动物种属、加力方式及参数选择等进行梳理和总结,以期为研究牙周组织的力学响应机制以及开发、论证新的临床治疗技术提供参考。     

Nell-1基因修饰骨髓基质细胞复合β-磷酸三钙提升兔上颌窦底的实验研究

目的：评价Nel样I型分子（Nell-1）基因修饰骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,bMSCs）复合β-磷酸三钙提升兔上颌窦底的效果。方法：抽取兔骨髓进行bMSCs培养,体外采用腺病毒载体携带Nell-1基因（AdNell-1）及绿色荧光蛋白EGFP基因（AdEGFP）转染bMSCs,GFP表达检测转染效率、Nell-1免疫细胞化学检测目的基因的表达。碱性磷酸酶（ALP）染色、半定量检测及钙结节茜素红染色检测细胞成骨分化。将基因修饰bMSCs与β-磷酸三钙颗粒复合用于兔上颌窦底提升,分别在术后2周和8周取材,HE染色,测量成骨面积,并采用SPSS11.0软件包对2组间数据进行t检验。结果：AdEGFP基因修饰组GFP表达效率可达60%～80%,Nell-1细胞化学染色显示,AdNell-1基因修饰组呈阳性表达。AdNell-1基因修饰组ALP染色及钙结节茜素红染色均高于AdEGFP基因修饰组,ALP半定量检测具有统计学差异（P〈0.05）。体内实验研究中,AdNell-1基因修饰组新骨形成面积在8周时显著高于AdEGFP基因修饰组（P〈0.05）。结论：采用AdNell-1基因转染兔bMSCs可促进其成骨分化,体内可促进上颌窦底提升的效果。     

hBMP—4瞬时转染对家兔骨髓基质干细胞生物学行为的影响

目的：应用兔骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells，MSCs）作为基因治疗的靶细胞，体外转染人骨形成蛋白4(human bone morphogentic protein-4，hBMP-4)基因，观察瞬时转染对兔MSCs生物学行为的影响。方法：贴壁法培养兔MSCs，分别在体外转染pEGFP-hBMP-4和pEGFP基因并留置空白对照。检测转染效率及目的基因的转录和表达，观察细胞形态及生长情况，检测碱性磷酸酶、钙结节及骨钙素等成骨细胞表型。结果：基因转染效率达到20％-30％，RT-PCR显示MSCs本身有目的基因的少量转录，转染pEGFP-hBMP-4后转录增强。目的基因转染后细胞形态略有变化，生长曲线与对照组相似，碱性磷酸酶阳性染色面积增加（P=0.0016），钙结节增多（P=0.0001），骨钙素表达增强（P=0.03）。结论：优化的条件下取得了较高的转染效率，hBMP-4基因转染可以增强目的基因的转录，加速MSCs向成骨细胞表型转化。HBMP-4转染的MSCs可望成为组织工程化骨理想的种子细胞。     

血管瘤发病机制的研究进展

幼年性血管瘤(infantial hemangiomas)是婴幼儿最常见的良性肿瘤，发病率高，危害性大。由于其确切病因不明，目前缺乏有效的治疗手段。随着分子生物学的发展，人们对血管瘤发病机制的研究取得了一定的进展，许多新的血管瘤分子标志相继被发现。可溶性细胞因子、基因突变、内皮祖细胞、细胞凋亡等在血管瘤发病中的作用已被众多学者所证实。本文对血管瘤发病机制的研究进展进行综述。     

兔骨髓基质细胞的体外成骨定向诱导培养

目的:体外分离培养兔骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs),并向成骨定向诱导培养,为骨组织工程提供适宜的种子细胞。方法:抽取新西兰白兔的骨髓,体外分离纯化得到BMSCs,并利用条件培养液将其向成骨定向诱导培养、扩增。采用倒置相差显微镜观察细胞增殖分化情况;使用碱性磷酸酶(ALP)和VonKossa染色的方法,鉴定其成骨性能;用MTT法描绘标准细胞浓度-OD值曲线。结果:BMSCs在培养皿中贴壁生长、增殖;经ALP和VonKossa染色证实其有成骨潜能;标准BMSCs细胞浓度-OD值曲线显示细胞浓度和OD值呈线性正相关。结论:可以通过在体外分离纯化骨髓并诱导培养,获得足够数量、有成骨潜能的BMSCs作为骨组织工程的种子细胞。     

复合BMP-2/bFGF的多孔磷酸钙修复种植体周围骨缺损的实验研究

目的:研究多孔磷酸钙人工骨(porous calcium phosphate cement,CPC)与重组人骨形成蛋-2(recombinant humanbone morphogenetic protein 2,rhBMP-2)/碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)复合构建的组织工程骨修复种植体周围骨缺损的成骨效果.方法:拔除4只beagle犬的双侧下颌第2、3、4前磨牙和第1磨牙后3个月,培养犬的骨髓基质细胞(bone marrow stromai cells,BMSCs),以6×105/ml浓度接种于多孔CPC上;于犬双侧下颌骨拔牙处建立量化的6个骨缺损区(直径7.0mm、深4.0mm),同期植入3.75mm×10mm的Br?nemark种植体,种植体周围骨缺损区分别植入①CPC+BMSCs;②cPc+BMSCs+BMP-2;③CPC+BMSCs+bFGF;④CPC+BMSCs+BMP-2+bFGF;⑤CPC;以空缺作为对照组,在处死前作四环素和钙绿素双次标记,于术后12周取材,进行大体观察和硬组织切片观察.结果:BMSCs/CPC/BMP-2/bFGF复合物组成骨最活跃,缺损区种植体已与骨形成良好的骨结合,骨矿化沉积率高于其它组.结论:BMP-2/bFGF修复骨缺损的成骨作用明显优于单一因子;多孔CPC具有良好的骨引导作用,是一种较理想的临床骨修复材料.     

聚合物介导质粒DNA转运系统在骨组织工程中的应用

基因治疗技术应用于骨组织工程,可以进一步促进成骨。聚合物介导的质粒DNA转运系统通过保护DNA免受降解并维持DNA在效应浓度,延长其内吞的机会,从而提高基因转染效率。目前用于骨组织工程研究的聚合物介导的质粒DNA转运系统主要有质粒DNA与胶原蛋白复合转运系统、质粒DNA与聚乙二醇一透明质酸水凝胶复合转运系统、质粒DNA与脂质体复合转运系统、质粒DNA与阳离子聚合物复合转运系统等。本文对近年来聚合物介导的质粒DNA复合转运系统在骨组织工程中的应用进展做一综述。