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阴离子交换FPLC制备级化单克隆抗体 总被引:2,自引:0,他引:2
作者采用DEAE-40HR阴离子交换柱,在快速蛋白液相色谱系统(FPLC)建立了IgG类单克隆抗体制备级纯化方法。该法是将McAb腹水经50%饱和硫酸铵盐析粗分离后,再用阴离子交换色谱纯化,一次上样量相当于80~100ml腹水,可得纯化McAb500~600mg,得率为6~7mg/ml腹水,回收率为57~67%,一次纯化周期仅南非45min。经SDS-FAGE检测McAb纯度为95%,ABC染色法 相似文献
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作者采用PharmaciaSephacrylS—300凝胶色谱柱,建立了IgG类McAb的一步法制各级纯化方法。该法是将McAb腹水直接上样,用pH7.410mmol/LPBS洗脱(流速0.5ml/min),即得到纯化的McAb。一次上样量40~50ml腹水,回收率为85%-90%.整个纯化周期4h。纯化的McAb经SDS—PAGE测定,纯度>90%,免疫组化ABC法测定活性为1:80000(7.8×10-11mol/L)。该法操作简单、快速,只要有一台核酸/蛋白检测仪,便可进行制备级水平的纯化。 相似文献
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凝胶色谱法半制备级纯化单克隆抗体 总被引:1,自引:0,他引:1
作者采用SePllacylS-200凝胶色谱柱,在快速蛋白液相色谱系统(FPLC)建立了肝癌相关抗原单克隆抗体半制各级纯化方法。该法是将McAb腹水经40%饱和硫酸铵盐析粗分离后,再用凝胶色谱纯化,一次上样量相当于5~10ml腹水,可得纯化McAb30~60mg,得率为6~6.5mg/ml腹水,回收率为63%,一次色谱纯化周期2h,整个分离纬化可在3h内完成。经SDS—PAGE和DEAE离子交换色谱法检测McAb纯度大于80%,ABC染色法测定McAb活性为,1:40000(1.56×10-10mol/L),是一般实验室纯化IgG类McAb的实用方法。 相似文献
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流式细胞术外周血样品间标的方法 总被引:6,自引:3,他引:3
目的 建立一种新的用于流式细胞术 (FCM)外周血样品的间标荧光染色方法 .方法 抗凝全血 1 0 0 μL,加入一抗 5 0μL ,室温下反应 30 min,上 Q- PREP型免疫学样品制备仪 ,溶解红细胞和固定标品 ,加入荧光二抗 5 0 μL ,室温下反应 30 min,再加入 5 0 0 μL 的 PBS制成单细胞悬液 ,上流式细胞仪分析 ,同时与其他 5种常规方法进行比较 .结果 本方法与其他 5种方法的 FCM测定结果基本一致 (P>0 .0 5 ) ,而本方法样品用量少 ,操作简单 ,快速、染色时间仅需 70 m in.结论 我们建立的外周血样品间接荧光染色法 (方法 2 ) ,是外周血 FCM样品染色的理想方法 ,该方法对于 FCM在临床检验和基础研究的应用提供了技术支持 ,具有较强的实用价值 . 相似文献
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测定血清中酪氨酸(Tyrosinc,Tyr)和苯丙氨酸(Phenylalanine,Phe)的含量,对先天性氨基酸代谢缺陷和肝性脑病等疾病的诊断、治疗及研究有一定临床意义。目前国内用氨基酸分析仪测定 相似文献
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目的 cag A+ Hp的感染与胃癌的相关性在亚洲有不同报道 ,本研究应用重组幽门螺杆菌毒素相关抗原 A (Cag A)建立检测血清中抗 Cag A抗体的方法 ,以探讨本地区 cag A+ Hp的感染与胃癌的相关性 .方法 构建表达幽门螺杆菌 Cag A抗原的表达载体 ,工程菌经 IPTG诱导 ,表达的 Cag A包含体经 Ni柱纯化 ,变性、复性、透析并经活性鉴定后 ,抗原被点在硝酸纤维素膜上或用以包被 EL ISA板 ,建立检测正常人及胃癌患者血清抗 Cag A抗体的 DIGFA(斑点金免疫渗滤试验 ,简称滴金法 )和 EL ISA法 .结果 重组克隆 p RSETcag A的工程菌可表达 Mr36 0 0 0的目的蛋白 ,表达形式为包含体 ;Cag A包含体经纯化后 SDS- PAGE显示纯度达 98%以上 ,活性经 EL ISA证实 ;正常人 6 4例及胃癌患者血清 5 0例中 ,cag A+ Hp的感染率分别为 2 9.7%和6 2 .0 % ,胃癌患者 cag A+ Hp的感染率明显高于正常人 (P<0 .0 1) .结论 我们建立的检测血清抗 Cag A抗体的 DIGFA和EL ISA均具有良好的可重复性 ;胃癌患者 cag A+ Hp的感染比例明显高于正常人 ,Cag A阳性幽门螺杆菌的感染与胃癌有关 ,Cag A可作为制备防治 cag A+ Hp感染的疫苗的后备抗原 . Cag A可作为幽门螺杆菌疫苗制备的候选抗原 ,检测患者血清幽门螺杆菌 Cag A抗体 ,有可能为胃癌的发 相似文献