树突状细胞负载肝癌抗原肽疫苗体外诱导特异性免疫学反应的研究

目的：研究树突状细胞(dendritic cell，DC)负载肝癌抗原肽EPVTKAEML体外诱导特异性CTL的能力及其抑癌效果。方法：用顺序特异引物聚合酶链反应技术(PCR—SSP)选择HLA—B7表型供者，从脾组织中分离、培养DC-EPVTKAEML特异性CTL。用^51Cr释放法检测CTL的杀伤活性，并用抗HLA-1分子单抗(mAb)进行杀伤抑制实验。结果：找到4例HLA-B7杂合子供者，用DC负载HLA-B7限制的抗原肽EPVTKAEML可诱导特异性CTL反应，对肝癌细胞HHCC有较强的杀伤作用。结论：DC负载抗原肽EPVTKAEML在体外可诱发较强的特异性免疫反应。     

肝硬变,病毒性肝炎及正常肝组织中间隙连接蛋白Cx32的表达

间隙连接（ｃｏｎｎｅｘｉｎ，Ｃｘ）是细胞间的蛋白通道结构，由相邻胞膜上的连接子（ｃｏｎｎｅｘｏｎ）相互衔接而成。通过Ｃｘ介导的细胞间连接通讯（ｇａｐｊｕｎｃｔｉｏｎｉｎｔｅｒｃｅｌｕｌａｒｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ，ＧＪＩＣ），对细胞的增殖、分化进行...     

高效凝胶色谱一步法制备级纯化单克隆抗体

作者采用ＰｈａｒｍａｃｉａＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ—３００凝胶色谱柱，建立了ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的一步法制各级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水直接上样，用ｐＨ７．４１０ｍｍｏｌ／ＬＰＢＳ洗脱（流速０．５ｍｌ／ｍｉｎ），即得到纯化的ＭｃＡｂ。一次上样量４０～５０ｍｌ腹水，回收率为８５％－９０％．整个纯化周期４ｈ。纯化的ＭｃＡｂ经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ测定，纯度＞９０％，免疫组化ＡＢＣ法测定活性为１：８００００（７．８×１０－１１ｍｏｌ／Ｌ）。该法操作简单、快速，只要有一台核酸／蛋白检测仪，便可进行制备级水平的纯化。     

肝癌特异性超抗原SEA(D227A)基因表达载体的构建与表达

目的：构建受AFP顺式作用元件调控的超抗原表达载体，将SEA(D227A)特异性的表达于AFP阳性肝癌细胞膜表面。方法：PCR扩增AFP基因启动子、增强子、linker—CD80tm和SEA(D227A)。将上述片断插入逆转录病毒载体pLXSN的多克隆位点，构建AFP基因顺式作用元件调控的肝癌特异性减毒超抗原表达载体(pLXSN SEA(D227A)—linker—CD80tm)。通过脂质体介导，以表达载体转染表达或不表达AFP的肿瘤细胞系，用RT—PCR和间接免疫荧光染色，检测SEA的表达。结果：成功地将AFP基因的启动子、增强子、linker—CD80tm和SEA(D227A)克隆到逆转录病毒载体pLXSN的多克隆位点，酶切鉴定和DNA序列分析无误，RT—PCR和间接免疫荧光法检测证实，SEA(D227A)能在AFP阳性的肝癌细胞膜特异性表达。结论：AFP顺式作用元件修饰的超抗原表达载体的构建，为下一步用其强化肝癌的免疫治疗奠定了基础。     

兔抗MAGE-n血清的制备、纯化及鉴定

目的: 制备高效价、特异性的兔抗人MAGE-n血清。方法: 对原核表达的MAGE-n蛋白进行纯化, 与弗氏佐剂混合免疫新西兰兔制备抗血清, 用硫酸铵盐析法及溴化氰活化的Sephrose4B(CNBr-ActivatedSephrose4B)亲和层析柱纯化抗血清, 以双向免疫扩散实验、ELISA、Westernblot和免疫组化对兔抗人MAGE-n血清进行鉴定。结果: 经免疫得到高效价的兔抗人MAGE-n血清, 抗血清能够与MAGE-n特异性结合, 免疫组化结果表明MAGE-n是一种胞质蛋白。结论: 用MAGE-n蛋白与弗氏佐剂混合免疫兔, 制备得到高效价的抗血清, 纯化后的特异性兔抗人MAGE-n血清, 为进一步研究MAGE-n在各种组织中的表达奠定了基础。     

判定肿瘤抗原特异性T细胞反应的新方法

几十年来 ,人们致力于肿瘤疫苗的研究 ,旨在激活患者自身的免疫系统 ,产生持久有效的抗肿瘤免疫。在肿瘤疫苗治疗前后 ,如何准确地定量、定性判定肿瘤抗原特异性Ｔ细胞应答 ,评价疗效 ,是影响抗肿瘤疫苗发展的关键。51 Ｃｒ释放法和有限稀释法 (ｌｉｍｉｔｉｎｇｄｉｌｕｔｉｏｎａｎａｌｙｓｅｓ,ＬＤＡ) ,一直被认为是评价特异性Ｔ细胞反应的金标准 ,但实践证明这两种方法费时、费力且敏感性低。近 5、6年来 ,一些评价Ｔ细胞功能和特异性的新方法逐渐建立起来[1 ,2 ] ,由于这些方法更加敏感 ,提供的信息更有意义。尤为重要的是 ,有的方法…     

冻存细胞计算机管理软件的研制及应用(摘要)

冻存细胞计算机管理软件的研制及应用（摘要）杨连君陈志南隋延仿米力曲萍（第四军医大学病理学教研室，西安７１００３２）我们编制了冻存细胞计算机管理软件—ＣＭ（ＣｅｌＭａｎａｇｅｒ），可对冻存的细胞系或细胞株进行自动管理、查询和统计归类。ＣＭ软件的主控程...     

抗血管内皮细胞单克隆抗体的制备及免疫组化鉴定

本文报道用临床手术切除的肝癌标本制备细胞悬液直接免疫BALB/c小鼠与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,在筛选过程中获得一株抗血管内皮细胞的单克隆抗体。该细胞株稳定地在体外连续培养四个月。抗体能直接用于常规福尔马林固定的石蜡包埋的切片染色,不需胰酶消化。经A.B.C法免疫组化染色证明,对全身各脏器血管内皮细胞定位以及30例各种类型血管瘤的内皮细胞染色均呈阳性反应。对起源于内皮细胞的5例血管内皮细胞肉瘤定位4例阳性,1例为阴性。而对血管外皮细胞肉瘤却大部份呈阴性反应。与内皮细胞以外的组织无交叉反应。提示此抗体能识别的抗原可能是Ⅷ因子相关抗原,它对起源于血管的软组织肿瘤的鉴别诊断及免疫组化定位有一定的应用价值。     

肝癌单克隆抗体HAb_(18)在人体肝癌导向诊断、治疗中的应用

肝癌的导向治疗,自80年代以来发展较快,已成为肝癌综合治疗的手段之一.铁蛋白抗体和甲胎蛋白抗体的标记与治疗显示一定的效果,但作为一种剂型尚有差距.本文报道抗肝癌单抗HAbl8进入I期临床导向诊断、治疗的意义和应用情况。 抗体的纯化与标记,按Goding法,用杂交瘤腹水经Sephacryls-300层析柱纯化为IgG.再用胃蛋白酶(Sigma)切割,分     

Expression of HLA-DR antigen in hepatocellular carcinoma and its up-regulation by interferon

Objective: To observe the expression of human leukocytic antigen DR (HLA-DR) in primary hepatocellular carcinoma (HCC) and its up-regulation by interferon (IFN). Methods: The expression of HLA-DR in 46 specimens of human HCC tissues, 4 human HCC cell lines (SMMC-7721, HCC-9204, BEL-7402 and HHCC) and a human hepatocyte cell line QZG was respectively detected by immunohistochemical ABC staining and flow cytometry. The expression of HLA-DR in the 5 cell lines was detected by ELISA before and after the cells were treated with IFN-γ or IFN-α. Results:Eighteen out of 46 HCC tissues (39.1%) expressed HLA-DR, whereas all the normal liver tissues immediately adjacent to HCC tissues were HLA-DR-negative. No obvious HLA-DR-positive staining was found in all the 5 cell lines. The expression of HLA-DR was up-regulated in all the 5 cell lines after IFN-γ or IFN-α treatment. The up-regulation of HI A-DR in QZG cells was less obvious than that in HCC cell lines. The effect of IFN-γ was more significant than that of IFN-α. Conclusion: HCC tissues can express HLA-DR to some extent, but HCC cell lines do not express detectable HLA-DR. IFN can up-regulate HLA-DR expression in HCC cells.