免疫性血小板减少性紫癜患者单个核细胞中microRNA-30a表达增高及其意义

目的 探讨microRNA-30a是否参与了免疫性血小板减少性紫癜（ITP）的发病机制.方法 采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）技术检测38例ITP患者及35例健康者外周血单个核细胞（PBMC）中microRNA-30a和Lyn mRNA的相对表达量,并进行统计分析.结果 ITP患者外周血PBMC中microRNA-30a表达较健康对照组明显增高（P〈0.01）,且与血小板计数呈负相关（r2=0.42,P〈0.05）;ITP患者外周血PBMC中Lyn mRNA表达较健康对照组明显降低（P〈0.01）,且与microRNA-30a呈负相关（r2=0.33,P〈0.01）.结论 microRNA-30a可能通过Lyn参与了ITP的发病机制.     

原发性胆汁性肝硬化与HLA-DRB1等位基因的相关分析

目的:探讨原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者人群与人类白细胞抗原(HLA)-DRB1等位基因的相关性,评估易感基因与一些临床及实验室特征的相互关系.方法:利用序列特异性引物PCR(SSP-PCR)对65例确诊为PBC的患者和431例健康人进行HLA-DRB1等位基因以及有关基因亚型分析.结果:PBC患者DRB1*07的频率为29.2%,与正常人的13.9%相比存在显著性差异(Pc＜0.05,相对危险度OR为2.55,95%CI:1.4～4.6),所有DRB1*07阳性患者经亚型分析均为DRB1*0701;其余DRB1的等位基因频率与正常人比较无显著性差异.DRB1*0701阳性患者群体与阴性患者在一些临床、实验室指标上无显著差异.结论:中国人群PBC与HLA-DRB1*0701基因相关,与南美、北美、北欧甚至日本等其他国家PBC患者的易感基因明显不同,为进一步作针对PBC患者的免疫治疗提供线索.     

穿孔素、颗粒酶、颗粒溶素在银屑病患者中的表达及临床意义

目的探讨穿孔素(PF)、颗粒酶B(GrB)、颗粒溶素(GNLY)在银屑病患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义。方法收集30例银屑病患者和30例健康体检者全血,分离出单个核细胞,采用荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测PF、GrB和GNLY的mRNA的表达,并采用免疫印迹法检测GrB、GNLY及PF的蛋白表达,双抗体夹心ELISA方法检测患者及体检者血清中IL-4、IL-6、TNF-α及IFN-γ的水平。并分析PF、GrB和GNLY的蛋白表达水平与IL-4、IL-6、TNF-α及IFN-γ的相关性。结果银屑病患者与健康体检者比较后,患者PBMC中GNLY、PF蛋白含量和mRNA均明显降低(P<0.01),而GrB无显著变化(P>0.05);IL-4水平显著下降(P<0.05),IL-6、TNF-α和IFN-γ显著升高(P<0.05)。PF和GNLY的蛋白表达水平与IL-6、TNF-α和IFN-γ成负相关,而与IL-4的水平成正相关,与GrB不相关。结论银屑病患者PF和GNLY的蛋白及mRNA表达与IL-4、IL-6、TNF-α和IFN-γ的变化具有一定的相关性,其可能在银屑病的发病过程中起一定的作用。     

原发性胆汁性肝硬化患者检测可溶性肿瘤坏死因子sTRAIL的意义

目的探讨PBC患者中的肿瘤坏死因子sTRAIL的表达情况。方法采用双抗体夹心法来检测60例PBC患者血清中的sTRAIL,并以60例自身免疫病患者(40例系统性红斑狼疮患者,8例类风湿性关节炎,12例强直性脊柱炎)、60例健康体检者为对照组。检测ALP、GGT、IgM与sTRAIL的相关性。结果 PBC患者血清中的sTRAIL的浓度显著低于健康体检者(P<0.05),并根据临床不同分期检测后发现,PBC患者血清中sTRAILⅢ期、Ⅳ期低于Ⅰ期、Ⅱ期结果(P<0.05),表明血清中sTRAIL在PBC患者中的检测有一定的显著意义,并与病情程度存在一定的相关性。并且sTRAIL与ALP、GGT、IgM均呈负相关(r=-0.4335,P<0.01、r=-0.6502,P<0.01、r=-0.5610,P<0.01)。结论 PBC患者血清中的sTRAIL浓度变化与原发性胆汁性肝硬化的病程呈一定的相关性,对于临床观察病情的发展,指导临床医生的诊断提供一些辅助的参考。     

C反应蛋白测定两种检测系统间结果的比较

目的 对两种不同检测系统测定C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)的结果进行比对和偏倚分析,以评价不同检测系统CRP测定结果的可比性。方法 参照美国临床实验室标准研究所(CLSI)EP9-A2文件要求,收集长海医院急诊患者乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K₂)抗凝血50例,同时使用全自动免疫分析仪(Beckman Immage 800)和免疫荧光分析仪(i-CHROMA^TM Reader)检测待测样本中的CRP浓度,评价两种方法检测结果的相关性。结果 使用血浆标本时,两方法相关性良好,回归方程为Y=1.076 5X-3.031 5,R²=0.986。全血测定的回归方程为Y=0.882 6X-1.180 8,R²=0.931 1。对于红细胞压积(HCT)较低的标本(<30.45%)使用纠正公式:全血CRP(纠正后)=全血CRP结果(纠正前)/(1-HCT)。Y(纠正后)=1.006 8X-3.612 2,R²=0.950 9。结论 两种检测系统血浆CRP的测定结果具有可比性,适合临床应用。遇HCT较低的标本时,通过校正公式校正,可提高全血结果的可比性。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中Tim-1表达增高及其意义

目的 检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血Tim-1,IFN-γ和IL-4的表达水平,分析其相关性,初步探讨Tim-1在PBC诊治中的临床意义。方法 收集2013年6月～2015年11月来长海医院就诊的32例PBC患者和32例同期就诊的健康成人的外周血,分离外周血单个核细胞(PBMC),反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)法检测PBMC中Tim-1 mRNA,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血浆中Tim-1蛋白表达量,对Tim-1和IFN-γ,IL-4之间的关系进行Pearson相关性分析。结果患者组和对照组Tim-1 mRNA分别为0.63±0.40和0.36±0.32,差异具有统计学意义(t=3.005,P=0.003,P<0.01)。患者组与对照组Tim-1蛋白表达水平分别为62.72±38.60和35.66±30.55 pg/ml(t=3.11,P=0.002 8),IFN-γ表达水平分别为200.81±18.06和79.23±20.02 pg/ml(t=25.51,P<0.000 1),IL-4表达水平分别为99.22±14.67和30.18±20.56 pg/ml,差异均具有统计学意义(t=15.46,P<0.000 1)。Pearson相关分析结果提示Tim-1与IFN-γ呈负相关(r=-0.552,P=0.001 1),与IL-4呈正相关(r=0.652,P<0.000 1)。结论Tim-1可能参与了PBC的发病机制,是该病潜在的标志物和治疗靶点。     

隐球菌性脑炎患者颗粒酶B、颗粒溶素、穿孔素的表达及临床意义

目的研究颗粒酶B（grmazymeB,GrB）、颗粒溶素（granulysin,GNLY）及穿孔素（pefforin,又称pore-formingpro—tein,PFP）三种免疫效应分子在隐球菌性脑膜炎（cryptococcalmeningitis）外周血单个核细胞中的表达及其临床意义。方法首先用密度梯度离心法分离得到25例隐球菌性脑膜炎患者和30例健康人外周血单个核细胞（peripheral blood monotmclearcells,PBMC）,其次用免疫印迹（western blot）的方法检测其中的GrB、GNLY、及PFP的蛋白含量,用实时荧光定量（RVQ）-PCR方法测定其中GrB、GNLY、及PFP的mRNA含量。并分析隐球菌性脑膜炎患者蛋白含量与一些免疫指标的相关性。结果与健康对照组比较,隐球菌性脑膜炎患者PBMC中GNLY、PFP蛋白含量和mRNA均明显降低,而GrB无明显变化。隐球菌性脑膜炎患者中GNLY蛋白表达水平与血清IgG、IFN-γ水平成正相关（r=0．477,P〈0．05;r=0．534,P〈0．05）,与IL-10水平成负相关（r=-0．505,P〈0．05）。结论GNLY、PFP）可能参与隐球菌性脑膜炎的疾病进程,这为探讨隐球菌性脑膜炎的病情监控和有效治疗提供了新的线索。     

Caspase在原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞的表达及其临床意义

目的检测caspase8和caspase3在原发性胆汁性肝硬化(PBC,primary biliary cirrhosis)患者外周血单个核细胞中的表达,探讨其与PBC疾病进展的相关性。方法采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法,检测30例PBC和30例正常对照者的外周血单个核细胞(PBMCs)中caspase8和caspase3的基因和蛋白表达。结果PBC患者PBMCs中的caspase8和caspase3的mRNA和蛋白的表达明显低于健康对照组(P<0.05)。结论PBC患者caspase8,3的表达与疾病的发生发展存在一定的相关性,可以为PBC的诊断和预防提供新线索。     

自身抗原Ro60kD重组融合蛋白的纯化和鉴定

将表达Ro60kD GST融合蛋白的重组体导入大肠杆菌JM109 中表达重组抗原, 经GST亲和层析柱纯化后用标准抗Ro血清鉴定, 经免疫印迹法证实, 纯化重组蛋白具有Ro 抗原性, 该抗原可用于临床检测及研究抗原表位与疾病的相关性     

自身免疫病患者可抽提核抗体谱与体液免疫的关系

探讨可抽提核抗原抗体谱的临床意义及与其他免疫指标的关系。方法对１５６份自身免疫患者血清样本,采用免疫印迹法检测抗ＥＮＡ抗体,经免疫浊度法检测Ｉｇ和补体。结果（１）抗ＥＮＡ抗体在自身免疫病有较高的检出率,其中抗平滑肌体、抗Ｕ１核糖核蛋白抗体的阳性率在系统性红斑狼疮中分别为３６．３％、２８．８％;