杆状病毒介导的DNA甲基转移酶1 siRNA对人胰腺癌细胞凋亡的影响

目的: 观察杆状病毒介导的DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1, DNMT1) siRNA(小干扰RNA)对人胰腺癌PaTu8988细胞凋亡的影响。方法： 人胰腺癌细胞PaTu8988用6孔板培养并随机分成5组：空白组、阴性组、病毒r-Bac-si-DNMT1-D1组(D1组)、r-Bac-si-DNMT1-D2组(D2组)、r-Bac-si-DNMT1-D3组(D3组)。空白组仅加10%胎牛血清和DMEM培养基培养,阴性组、D1组、D2组、D3组加血清和DMEM培养基培养24 h后,分别加入空白载体r-Bac-CMV-EGFP和重组杆状病毒r-Bac-si-DNMT1-D1、r-Bac-si-DNMT1-D2、r-Bac-si-DNMT1-D3, 150 μL/孔。72 h后收集5组细胞,用流式细胞术测肿瘤细胞凋亡,蛋白质印迹法检测抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达情况。结果：D1组、D2组和D3组的细胞凋亡率明显高于空白组和阴性组(P<0.05)。与空白组和阴性组相比,D1组、D2组和D3组Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05),Bax蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论： 杆状病毒介导的DNMT1 siRNA通过抑制Bcl-2蛋白表达,增加Bax蛋白表达,诱导胰腺癌细胞的凋亡。     

中性粒细胞趋化因子在轻、重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织中的表达变化

目的:探讨中性粒细胞趋化因子(cytokine-induced neutrophil chemoattractant, CINC)在轻症急性胰腺炎(mild acute pancreatitis, MAP)向重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)演变过程中的作用. 方法:分别采用腹腔注射雨蛙肽和胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠建立大鼠轻症、重症急性胰腺炎模型.雄性SD大鼠随机分为雨蛙肽组(18只)、生理盐水组(18只)、牛磺胆酸钠组(24只)和手术对照组(24只),检测各组不同时间点血清淀粉酶并观察胰腺组织病理学改变,用免疫组织化学法和半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测胰腺组织中CINC蛋白和CINC mRNA表达的变化情况. 结果:雨蛙肽组6,12 h胰腺组织中CINC蛋白和CINC mRNA表达明显高于生理盐水组(P<0.05),且表达与胰腺组织的病理积分呈正相关;24 h与生理盐水组比较无明显差异.牛磺胆酸钠组与手术对照组相比,大鼠的血清淀粉酶明显增高、胰腺组织学改变明显;术后1 h胰腺腺泡细胞CINC蛋白和CINC mRNA的表达高于生理盐水组,随着时间的延长表达逐渐增强(P<0.05,P<0.01). 结论:CINC可能在MAP向SAP演变过程中起到重要作用.     

江西省农村学校饮用水卫生现状调查

目的 了解江西省农村学校饮用水的卫生现状.方法 于2009年4-6月,对南昌、安义、瑞金、兴国、资溪、崇仁6个县(市)的60所学校进行饮水安全现状调查,并对其中59所学校的饮用水水样进行检测和评价.结果 江西省农村学校水源类型以地下水为主,占91.67%;供水方式以集中式供水为主,占65.00%.共检测水样59件,合格...     

产ESBLs肠杆菌科细菌中主要菌种的耐药性分析

目的 明确平顶山地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌的表型流行特征以及医院感染的发生率.方法 对81株肠杆菌科细菌采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)规定的标准进行产ESBLs株的确定,并有选择地对大肠埃希茼、肺炎克雷伯菌的产ESBLs株和非产酶株进行耐药性方面的比较.结果 子肠杆菌科细菌中还未发现对亚胺培南耐药的产ESBLs菌株;大肠埃希菌、克雷伯菌的产ESBLs株和非产酶株对大多数抗生素的耐药丰存在差异.结论 治疗肠杆菌科细菌时,碳青霉烯类、含酶抑制荆抗生素及头霉素类可作为临床一线用药.     

DNMTI siRNA 对人胰腺癌 PaTu8988 细胞周期的调控机制研究

目的 研究沉默DNA甲基转移酶1(DNMTI)基因对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖和细胞周期的影响及可能机制.方法 培养的人胰腺癌PaTu8988细胞分为空白对照组、阴性 siRNA(15nmol/L)组、阴性siRNA(30nmol/L)组、DNMT1 siRNA(15nmol/L)组和DNMT1 siRNA(30nmol/L)组.转染48h后,采用real-time PCR和Western blotting 评价沉默效率和细胞周期调控基因p21的表达情况;WST-8法榆测细胞增殖情况;流式细胞技术检测细胞周期变化.结果 转染48h后,15nmol/L和30nmol/L 浓度的DN-MT1 siRNA均明显抑制了DNMT1 mRNA和蛋白的表达DNMT1 siRNA转染后人胰腺癌PaTu8988细胞增殖受抑制,各组细胞增殖抑制率依次为0%±12.0%、13.7%±8.2%、23.4%±7.3%、17.1%±5.8%和36.9%±14.2%,其中DNMT1 siRNA(30nmol/L)组的细胞增殖抑制率明显高于其他各组(P<0.01);DNMT1 siRNA(15nmol/L)组和DNMT1 siRNA(30nmol/L)组的G2/M期细胞百分率均显著低于其他各组,S期细胞百分率明显高于其他各组(P<0.05);DNMT1 sLRNA(30nmol/L)组细胞周期调控基因p21 mRNA相对表达量明显高于其他各组(P<0.01).结论 DNMT1 siRNA能特异性抑制胰腺癌细胞DNMT1的表达,并抑制细胞增殖、促使细胞出现S期阻滞,其机制可能与上调细胞周期凋控基因p21的表达有关.     

1993年～2001年赣榆县AFP病例监测结果分析

赣榆县自建立起脊髓灰质炎 (脊灰 )疫情专报系统以来 ,急性弛缓性麻痹 ( AFP)病例监测工作不断完善 ,各项控制指标逐年提高 ,现将 1 993年～ 2 0 0 1年 AFP监测结果作一分析。1　材料与方法1 .1　资料来源　来自赣榆县脊灰专报系统、AFP病例个案调查及随访资料。1 .2　病例诊断     

肠杆菌科细菌684株超广谱β内酰胺酶检测及药敏结果分析

为了解肠杆菌科细菌产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)的情况 ,作者对 6 84株肠杆菌科细菌产ESBLs情况及其对 12种常见抗生素的耐药性进行分析 ,为临床合理选择抗生素和有效控制产ESBLs肠杆菌科细菌感染提供治疗依据。1　材料与方法1.1　菌株及药敏纸片　 2 0 0 0年 1月至 2 0 0 1年 3月从本院住院及门诊患者痰 (2 6 4例 )、尿 (2 73例 )、伤口分泌物 (85例 )及其他 (6 2例 )送检标本中分离出大肠埃希菌 4 2 8株 ,肺炎克雷伯菌 172株 ,阴沟肠杆菌 84株 ,均用常规方法鉴定。头孢他定、头孢噻肟、头孢他定 /克拉维酸、头孢噻肟 /克拉维酸、亚…     

重症急性胰腺炎继发感染早期肝损伤时髓样细胞表达激发受体-1的诊断价值

目的 探讨髓样细胞表达激发受体-1(TREM-1)在重症急性胰腺炎继发感染(SISAP)早期肝损伤中的诊断价值和作用机制.方法 24只雄性SD大鼠随机分为对照组、重症急性胰腺炎组(SAP组)、SISAP组.通过腹腔注射L-精氨酸、大肠杆菌构建动物模型,造模后24 h测定血淀粉酶活性、谷氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、C反应蛋白(CRP)及TREM-1表达变化;取血清和腹水进行细菌培养,取部分胰腺及肝组织光学显微镜下进行组织病理学评分;实时聚合酶链反应(RT-PCR)和western 印迹检测肝组织中TREM-1 mRNA和蛋白的表达.结果 SAP组和SISAP组胰腺及肝脏病理评分、血清淀粉酶活性、ALT和AST均明显高于对照组(P<0.05),且SISAP组较SAP组增高(P<0.05).SAP组和SISAP组的CRP、TNF-α均明显高于对照组(P<0,05),但两组间差异无统计学意义(P值分别=0.262和0.359).血清和腹水细菌培养阳性率,对照组为0/8,SAP组为1/8,SISAP组为8/8.SAP组肝脏组织TREM-1 mRNA的表达量为2.10±0.33,SISAP组为4.58±1.00,均明显高于对照组(1.00,P<0.05),且SISAP组较SAP组增高(P<0.05).SISAP组TREM-1蛋白处于较高表达水平,表达明显强于对照组和SAP组.结论 TREM-1可能在SISAP引起的早期肝损伤中具有重要作用.

Abstract：

Objective To explore the diagnosis value and the mechanism of triggering receptor expressed on myeloid cells-1 (TREM-1) in early liver damage of severe acute pancreatitis with secondary infection. Methods Twenty-four male SD rats were randomly divided into the control group, the severe acute pancreatitis (SAP) group and the secondary infection of SAP (SISAP) group.The animal model was established by intraperitoneal injection of L- arginine and E. coli. After 24 hours, the serum levels of amylase, glutamate aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), tumor necrosis factor (TNF)-α, C-reactive protein (CRP) and the variation of TREM-1 expression were tested. The blood and peritoneal fluid samples were collected for bacterial culture.Part of the pancreas and liver tissue were taken for histopathological score under microscope. The expression of TREM-1 at mRNA and protein level in liver tissue was detected through Real-time PCR and Western Blot. Results The histological score of pancreas and liver, serum amylase, ALT and AST were significantly higher in the SAP and SISAP groups than those in C group (P<0. 05), and higher in SISAP group than in SAP group (P<0. 05). The CRP and TNF-a expression in SAP and SISAP groups were higher then those in control group, while there was no significant difference between the two groups (P=0. 262 and 0. 359 , respectively). The positive ratio of bacterial culture in blood and peritoneal fluid was 0(0/8), 12. 5% (1/8), and 100% (8/8) in control group, SAP group and SISAP group respectively. The expression of TREM-lmRNA in liver was 2. 10 ± 0. 33 in SAP group and 4. 58+ 1. 00 in SISAP group, which were significantly higher than that in control group (1. 00,P<0. 05) , and the expression of TREM-1 mRNA in SISAP group was higher than that in SAP group (P < 0.05). The expression of TREM-1 at protein level was higher in SISAP group,significantly stronger than that in control and SAP group. Conclusions TREM-1 may play an important role in the early liver damage caused by severe acute pancreatitis.     

小干扰RNA组蛋白去乙酰化酶1对人胰腺癌细胞甲基化的作用研究

基因甲基化是抑癌基因失活的主要机制.胰腺癌中许多抑癌基因因CpG岛异常超甲基化而失活,如人类错配修复基因1(human mutL homolog 1,hMLH 1)、维甲酸受体β基因(retinoic acid receptor,RAR-β)等.组蛋白去乙酰化后的异染色质蛋白1(heterochromatin protein 1,HP1)可募集DNA甲基转移酶,从而使基因启动子CpG岛甲基化[1].甲基化CpG结合蛋白通过与组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)复合体相互作用而实现其抑制作用[2].甲基化抑制基因转录有赖于抑制性染色质环境.HDAC1过表达可导致组蛋白去乙酰化.本研究通过小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术研究HDAC1在胰腺癌中对DNA甲基化的影响.     

食管鳞癌组织中组蛋白去乙酰化酶2的表达及临床意义

目的探讨组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法应用实时荧光定量PCR及Western blot法检测30例配对人食管鳞癌(A组)和癌旁组织(C组)中HDAC2蛋白及其mRNA的表达。免疫组化方法检测90例(B组)食管鳞癌组织中HDAC2的表达水平,分析其与临床和病理特性的相关性。结果 A组HDAC2蛋白及其mRNA表达量均显著高于C组(P<0.01)。免疫组化结果显示,B组HDAC2蛋白表达阳性率为79%(71/90),HDAC2表达强度与TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置、病理学大体分型、浸润深度及分化程度无关(P>0.05)。结论 HDAC2高表达可能是食管鳞癌的特征之一,在一定程度上可以反映肿瘤的恶性程度,可作为判断食管鳞癌患者预后的指标。