酵母样真菌感染及对氟康唑药敏结果分析

目的 了解酵母菌引起的深部真菌感染菌种分布，用氟康唑对其进行药物敏感监测。方法 选择氯化三苯四氮唑(TTC)培基上不同颜色菌落，用API20AUX做菌种鉴定；用纸片扩散法与微量稀释法测定分离菌对氟康唑的敏感性。结果 295株酵母样真菌中，白色念珠菌179株、热带念珠菌51株、近平滑念珠菌42株，三者占酵母样真菌分离率的92％，药敏结果显示，氟康唑除对3株光滑念珠菌全部耐药外，对其余菌株MIC值均在0．125～4μg／ml之间。结论 目前临床深部真菌感染以白色念珠菌、热带念珠菌和近平滑念珠菌等为主，且对氟康唑有较好的体外抗菌活性。     

胰腺癌细胞中5-脂氧合酶mRNA和蛋白的表达

胰腺癌预后差,早期诊断困难,发病率于近年来逐步上升,且传统治疗效果不理想。因此,深入研究胰腺癌的发病机制对探索更为有效的预防、诊断和治疗方法具有重要意义。近年来研究结果表明,5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)代谢途径与胰腺癌的发生和发展关系密切。为此,我们应用RT-PCR和免疫组织(细胞)化学技术检测胰腺癌细胞株SW1990和Capan2中5-LOX的表达情况。     

圆弧青霉提取物的回复突变性

从河南省林县食管癌高发区采集的500份陈粮中,分离鉴定出19株圆弧青霉,以Raulin—Thom氏液体培养基培养成膜状物和菌液,分别提取两种培养物,对所得各提取物进行细菌回复突变试验。结果2株提取物使TA98、TA100检试菌株呈现诱变阳性,16株提取物使E.coli ND—160产生回复突变阳性(84.21%)。表明圆弧青霉产毒菌株广泛存在,其提取物能使检试菌遗传基因DNA产生碱基对置换和移码突变。     

圆弧青霉提取物诱发小鼠骨髓多染红细胞微核试验

应用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验对食管癌高发区林县粮食中分离的圆弧青霉提取物进行了诱变性研究。结果:菌株7B_3的菌液和菌丝体提取物及菌株120B_1的菌液提取物在剂量为200mg/kg时,其微核率分别为:15.17±0.60‰,13.00±0.58‰和16.00±1.00‰,与溶剂对照(DM-SO,3.50±0.43%)相比有极显著性差异(P<0.01),并呈明显的剂量相关。菌株120B_1的菌丝体提取物在四个剂量组均没有引起微核率的显著增加。结果表明,圆弧青霉两种提取物中均含有诱变物质。     

圆弧青霉提取物诱发人羊膜细胞程序外DNA合成及合成抑制的研究

从食管癌高发区河南省林县的粮食中,分离出5株圆弧青霉(Penicillium cyclopiumWestling)用大米做培养基,25℃培养两周,经氯仿:甲醇等连续提取后,得到棕褐色膏状提取物。用其中的4株,诱发出了人羊膜FL细胞株的程序外DNA合成(Unscheduled DNA Synthesis,UDS)与DNA合成抑制(DNA Synthesis Inhibition,DSI),与溶剂对照比较,具有显著性差异(P<0.05),并在一定程度上存在剂量效应关系;加S_9后,其生物学活性明显降低,推测此提取物中含有能引起人羊膜细胞DNA损伤的直接诱变剂。     

VEGF基因沉默对胰腺癌细胞化疗敏感性和Akt信号通路的影响

目的 观察靶向血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对胰腺癌BxPC3细胞化疗药物敏感性的影响,并探讨其可能机制.方法 将培养后的BxPC3细胞分为单纯BxPC3细胞组、脂质体处理组、错配siRNA转染组和VEGFsiRNA转染组.以5、10、20、100、200 nmol/L的VEGF siRNA转染BxPC3细胞.采用实时定量RT-PCR和ELASA法检测细胞VEGF mRNA和蛋白的表达;MTT法检测吉西他滨对各组细胞生长的影响;蛋白质印迹法检测BxPC3细胞Akt蛋白的磷酸化.结果 VEGF siRNA转染后,BxPC3细胞VEGF mRNA和蛋白呈浓度和时间依赖性明显下调,但对BxPC3细胞的增殖无明显影响.用0.2 μmol/L吉西他滨处理细胞48 h后,BxPC3细胞组、错配siRNA组及5、10、20 nmol/L siRNA组细胞的生长抑制率分别为(16.9±0.3)%、(17.3±0.3)%、(28.8±0.4)%、(52.2±0.3)%、(75.4±0.4)%,抑制率与siRNA浓度相关(r=0.928).同时,siRNA转染后细胞Akt蛋白的磷酸化被明显抑制.结论 VEGF基因在胰腺癌BxPC3细胞耐药中起着重要的作用,其机制可能与Akt蛋白磷酸化有关.     

大鼠髓样细胞表达激发受体-1／人IgG融合蛋白真核表达载体的构建表达与鉴定

目的 构建大鼠髓样细胞表达激发受体-1（TREM-1）/人IgG融合蛋白的真核表达载体,并在家蚕Bm细胞中实现稳定表达。方法 克隆大鼠TREM-1胞外段与人IgGFe段,片段连接后PCR扩增,再与病毒穿梭载体BAC1连接,基因克隆,构建重组质粒。利用杆状病毒表达系统（Bar-to-Bar）筛选重组杆状病毒,在Bm细胞中进行融合表达,并用Western blot法行蛋白鉴定。结果 重组质粒酶切测序正确,确认克隆载体构建成功。Western blot结果说明该蛋白样品可被抗大鼠TREM-1抗体特异性识别,证明该蛋白为TREM-1/IgG融合蛋白。结论 成功构建了大鼠TREM-1/IgG融合蛋白真核表达载体,并在Bm细胞中稳定表达。