慢性自发性荨麻疹患者血清25(OH)D和IL-25水平检测

目的：检测慢性自发性荨麻疹( CSU)患者血清中25(OH) D和IL-25的水平。方法：电化学发光方法和ELISA分别检测40例CSU患者及30例健康对照血清中的25(OH)D和IL-25水平。结果：CSU组血清25(OH) D水平为(19.48±7.41) ng/ mL低于对照组的(23.23±6.43) ng/mL，（P<0.05）。CSU组血清IL-25水平 为(124.59±19.32) pg/ mL高于对照组的(107.33±14.57) pg/ mL,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：血清25(OH)D和IL-25水平可能与CSU发病相关。     

京尼平苷对大鼠软骨细胞增殖的影响

背景：京尼平苷能够促进韧带成纤维细胞的增殖和胶原的合成,促进组织的修复和韧带损伤的愈合。目的：观察京尼平苷对大鼠软骨细胞增殖的影响。方法：采用二次酶消化法获得大鼠关节软骨细胞进行传代培养,并取第4代细胞给予0,25,50,100mmol/L京尼平苷干预,利用MTT比色、流式细胞仪检测细胞周期等方法检测药物干预后第4代软骨细胞的增殖情况。结果与结论：体外培养的软骨细胞随着传代次数的增加,细胞形态由原代的多角形逐渐变为长梭形;且随着培养时间的延长及京尼平苷浓度的升高,软骨细胞增殖更为显著（P〈0.01）。     

抗人精胺氧化酶单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备小鼠抗人精胺氧化酶(SMO)单克隆抗体(mAb),并验证其在Western blot,免疫组织化学等方法中的应用价值.方法:用pET-15b/SMO质粒转化BL2 (DE3)后,IPTG诱导表达带6×His标签的SMO重组蛋白并用Ni-NTA树脂亲和层析纯化.用SMO重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞杂交融合,获得能高效合成和分泌抗SMO mAb的杂交瘤细胞株.所得抗体的特异性和效价用ELISA和Western blot法以及免疫组织化学技术检测.结果:成功建立了稳定分泌鼠抗人SMO的mAb杂交瘤细胞株,获得的mAb效价高、特异性强,可用于ELISA,Western blot,免疫组织化学等分析技术.结论:成功制备出高特异性并能用于多种生物分析技术的SMO mAb.     

新多胺类似物四丁基丙二胺对人肝癌HepG2细胞增殖及侵袭迁移的影响

目的研究新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutyl propanediamine,TBP)对人肝癌HepG2细胞增殖及侵袭迁移的影响。方法 MTT比色法分析细胞增殖影响,流式细胞术检测细胞周期改变,Transwell体外迁移/侵袭实验检测迁移侵袭能力的变化,Western Blot用于分析细胞多胺代谢相关蛋白精胺氧化酶(SMO)的表达水平,化学发光法测定SMO活性,反相高效液相色谱法分析TBP对细胞多胺含量的影响。结果 TBP有效抑制HepG2细胞增殖水平,对细胞的侵袭、迁移能力也有明显抑制作用。TBP抑制细胞DNA复制,导致S期细胞比例显著性下降,G0/G1期细胞比例升高。细胞浆中SMO含量明显升高,但其酶活性下降。TBP显著性增加了细胞的腐胺水平,但对精脒和精胺无影响。结论 TBP能够抑制人肝癌HepG2细胞增殖、降低HepG2细胞侵袭和迁移的能力,其机制可能与影响肿瘤细胞DNA合成,改变细胞周期时相分布有关。     

保妇康凝胶治疗宫颈高危型HPV感染

目的：探讨保妇康凝胶治疗宫颈高危型人乳头瘤状病毒（HPV）感染的临床疗效。方法：通过入组跟踪研究方式,将门诊收治109例宫颈HPV高危型感染患者随机分为治疗组（89例）和对照组（20例）,治疗组给予保妇康凝胶按用药说明进行治疗,对照组不用药,只随访观察。3个疗程后行HPV复查,观察转阴率及滴度变化。结果：治疗组58例（65．2％）HPV转阴,无不良反应发生,31例（34．8％）仍有HPV感染,但其中有20例（64．5％）滴度明显下降（大于50％）,对照组中2例（10％）转阴,1例滴度明显下降．两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：保妇康凝胶治疗宫颈高危型HPV感染临床效果显著．     

重组天花粉蛋白高表达对人宫颈癌Caski细胞p73基因甲基化影响的机制研究

目的 探索重组天花粉蛋白(recombinant trichosanthin,rTCS)高表达对人宫颈癌Caski细胞p73基因甲基化影响的机制.方法 RT-PCR、QT-PCR、Western blot检测rTCS高表达后Caski细胞中DNA甲基化转移酶I(DNMT1)的表达变化,甲基化特异性PCR(MSP)法检测p73基因5′端启动子区CpG岛甲基化状态的改变.结果 宫颈癌Caski细胞p73为低表达,其启动子呈部分甲基化状态.高表达rTCS的细胞株其DNMT1mRNA及蛋白水平的表达均降低,其中mRNA水平降低0.56倍(P<0.01),p73基因启动子甲基化程度亦有所降低,p73mRNA水平表达升高.结论 高表达rTCS可能通过抑制DNMT1的表达,致使抑癌基因p73启动子去甲基化而重新表达,最终发挥抑癌基因功能抑制宫颈癌Caski细胞增殖.     

京尼平苷对大鼠软骨细胞增殖的影响

背景：京尼平苷能够促进韧带成纤维细胞的增殖和胶原的合成,促进组织的修复和韧带损伤的愈合。 目的：观察京尼平苷对大鼠软骨细胞增殖的影响。 方法：采用二次酶消化法获得大鼠关节软骨细胞进行传代培养,并取第4代细胞给予0,25,50,100 mmol/L京尼平苷干预,利用MTT比色、流式细胞仪检测细胞周期等方法检测药物干预后第4代软骨细胞的增殖情况。 结果与结论：体外培养的软骨细胞随着传代次数的增加,细胞形态由原代的多角形逐渐变为长梭形;且随着培养时间的延长及京尼平苷浓度的升高,软骨细胞增殖更为显著(P < 0.01)。     

Bcl-2家族在阿司匹林诱导人小细胞肺癌A549细胞凋亡中的作用

摘要 目的: 研究阿司匹林对人小细胞肺癌A549细胞体外增殖抑制作用及凋亡的影响,探究Bcl-2在诱导凋亡机制中的作用。方法:运用体外细胞培养,阿司匹林以不同浓度（1,2.5,5,7.5,10mmol/L）作用于人小细胞肺癌A549细胞。采用噻唑蓝(MTT)法测定阿司匹林对细胞杀伤率;用流式细胞检测法测定细胞周期时相改变及细胞凋亡率;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DNA Ladder 现象;Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2等表达;荧光染色观察细胞线粒体膜电位的改变。结果：阿司匹林对人小细胞肺癌A549细胞有较强的抑制作用,有明显的时间和剂量依赖性;可使A549细胞G0/G1期和G2/M期比例明显下降,S期比例升高;诱导细胞凋亡发生;阿司匹林作用A549细胞后,Bcl-2表达量减少,Bax表达增加,Caspase3活化,线粒体膜电位改变。结论：阿司匹林在体外可有效抑制人小细胞肺癌A549细胞增殖,可能通过影响肿瘤细胞DNA合成,改变细胞周期时相分布、诱导凋亡发挥抑制细胞增殖作用,其凋亡机制与Bcl-2表达减少,线粒体膜跨膜电位下降相关。     

细胞膜上稳定表达融合蛋白CRT/vGPCR A549细胞株的建立

目的 将人钙网蛋白(calreticulin,CRT)基因与病毒G蛋白偶联受体(virus G-protein couple receptor,vGPCR)基因进行基因重组,用此重组基因建立细胞膜上稳定高表达CRT/vGPCR融合蛋白的人肺癌A549细胞株.方法 从pSG5-vGPCR质粒中获得全长vGPCR基因片段并与CRT全长编码序列的3′端连接形成融合基因,然后将融合基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中.用此质粒转染人A549肺癌细胞,通过G418筛选建立稳定转染的A549细胞株,用RT-PCR检测重组融合基因的表达,用细胞免疫荧光分析鉴定融合蛋白的表达及其在细胞膜上的定位.结果 成功获得重组融合质粒pcDNA3.1(+)-CRT/vGPCR,经DNA序列测定证实融合基因两阅读框(ORF)对接无误.将上述质粒转染A549细胞后,建立了稳定转染CRT/vGPCR的A549细胞株,融合基因在A549细胞中表达并定位到细胞膜上.结论 通过与CRT基因融合重组,具有膜定位能力的vGPCR能将CRT蛋白高效包被到肿瘤细胞膜上.