PRL-2基因转染对肝细胞基质金属蛋白酶及其抑制剂表达的影响

目的:研究PRL-2基因增强肿瘤细胞侵袭及转移能力的机制。 方法:采用脂质体转染的方法将PRL-2基因表达质粒转染至正常永生化肝细胞系CL1中，G418筛选阳性克隆。应用明胶酶谱法检测转染肝细胞分泌MMPs 酶谱变化，Western blotting 及RT-PCR检测转染肝细胞MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的变化。以PRL-2磷酸酯酶特异性抑制剂处理转染细胞，观察抑制PRL-2活性对上述指标的影响。 结果:经过 8周G418筛选及RT-PCR和Western blotting鉴定,获得稳定表达PRL-2的细胞亚系PRL-2-CL1。转染后的CL1细胞分泌MMP－9 、活性型MMP－9 和MMP－2 ,均显著高于转染前CL1细胞的MMPs 分泌(P<0.01);使用特异性抑制剂后， MMP－9 、活性型MMP－9 和MMP－2活性显著降低(P<0.01)。Western blotting及RT-PCR检测显示PRL-2-CL1细胞MMP2、MMP9蛋白及mRNA含量均较转染前显著升高(P<0.05)，TIMP-2则显著降低(P<0.05)；使用抑制剂后，可以逆转上述变化。 结论:PRL-2在永生化肝细胞中获得稳定、高效表达，PRL-2基因增强肝细胞侵袭及转移能力与其提高细胞MMP2、MMP9表达，降低TIMP-2有关。     

保心胶囊对大鼠急性心肌缺血及血液流变性的影响

目的：观察四逆汤制剂－－保心胶囊抗心肌缺血的药理效应。方法;运用垂体后叶素造大鼠急性心肌缺血模型,运用皮下注射大剂量肾上腺素加冰水冷溶造大鼠瘀血模型,观察保心胶囊对大鼠急性心岂血模型心电图Ｔ波和瘀血模型血液流变性等指标的影响。结果：保心胶囊低、高２个剂一与模型组相比,可显著改善缺血心电图Ｔ波和低切变率的全血粘度（Ｐ〈０．０５）。结论：保心胶囊可有效降低血液粘度,改善冠脉循环,保护因心肌。     

保心胶囊对大鼠垂体后叶素性急性心肌缺血心电图及阴寒致瘀血液流变性的影响

目的　观察四逆汤制剂———保心胶囊抗心肌缺血的药理效应。方法　运用垂体后叶素制造大鼠急性心肌缺血模型 ,运用皮下注射大剂量肾上腺素加冰水冷浴制造大鼠瘀血模型 ,观察保心胶囊对大鼠急性心肌缺血模型心电图ST段和瘀血模型血液流变性等指标的影响。结果　保心胶囊低、高二个剂量组与模型组相比 ,可显著改善缺血心电图ST段和低切变率的全血粘度 (P <0 .0 5)。结论　保心胶囊可有效降低血液粘度 ,改善冠脉循环 ,保护缺血心肌     

Clinical Study on The rapeutic Mechanism of Sini Decoction (四逆汤) in Treating Post-Percutane ous Transluminal Coronary Angioplasty Ische mia-Reperfusion In jury in Terms of Syndrome Typing of TCM

Ｔｈｅ40ｃａｓｅｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｈｅＳＮＤｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ,20ｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ.Ｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆ12ｍａｌｅｓａｎｄ8ｆｅｍａｌｅｓ,ａｇｅｄ54-63ｙｅａｒｓ,58.7±3.8ｙｅａｒｓｉｎａｖｅｒａｇｅ,ｗｉｔｈｔｈｅｉｒｃｏｕｒｓｅｏｆｄｉｓｅａｓｅａｓ11ｍｏｎｔｈｓ-9ｙｅａｒｓ,5.5ｙｅａｒｓｉｎａｖｅｒａｇｅ,ａｎｄ10ａｍｏｎｇｔｈｅｍｂｅｌｏｎｇｉｎｇｔｏＤＳａｎｄ10ｔｏＥＳ.ＴｈｅＳＮＤｇｒｏｕｐｃ…     

四逆汤对动脉粥样硬化家兔脂代谢及血管内皮功能的影响

目的观察四逆汤预防性用药对家兔实验性动脉粥样硬化（ＡＳ）脂代谢及血管内皮功能的影响,探讨四逆汤的抗ＡＳ作用及可能机制。方法运用图象分析法测定主动脉内膜脂质斑块面积百分比。脂代谢各指标分别运用酶动力学法、一步法、公式计算法、免疫透射比浊法等方法测定。血清一氧化氮（ＮＯ）及血浆内皮素（ＥＴ）分别用酶法及放射免疫法检测。结果四逆汤可明显缩小主动脉内膜脂质斑块面积,降低血清总胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白－胆固醇、载脂蛋白Ｂ及血浆ＥＴ浓度,提高血清ＮＯ及载脂蛋白Ａ含量,四逆汤高剂量组效果为佳,呈一定的量效依赖关系。结论四逆汤具有较好的抗ＡＳ作用,其作用机制与调节脂代谢、保护血管内皮细胞功能等有关。     

吲达帕胺、硫氮酮对缺血/再灌注心肌的保护作用

目的　采用离体大鼠心脏灌注模型 ,探讨吲达帕胺 (Indapamide)、硫氮酮 (Diltiazem)在心肌缺血 /再灌注过程中对心肌的保护作用。方法　SD大鼠 45只 ,随机分为吲达帕胺组、硫氮酮组、对照组 (灌注液中不含药物 )。比较三组动物在心肌缺血 30min及再灌注 30min后心电图、心肌酶 (CK、LDH) ,同时监测心功能指标的变化。结果　①对照组在心肌缺血 /再灌注后CK、LDH含量较缺血前明显升高 (P<0 0 5 )。吲达帕胺组、硫氮酮组在心肌缺血 /再灌注后心肌CK、LDH含量较对照组明显降低 (P <0 0 1)。②吲达帕胺组、硫氮酮组于再灌注 15、30min两时点 ,冠脉流量、心肌收缩力恢复百分比显著高于对照组 (P <0 0 5 )。结论　吲达帕胺、硫氮酮对缺血 /再灌注的心肌具有保护作用     

四逆汤对多器官功能障碍综合征大鼠炎症介质和氧化应激的影响

目的 建立大鼠多器官功能障碍综合征(MODS)模型,观察四逆汤(SND)对MODS大鼠炎症介质和氧化应激的影响.探讨SND对MODS器官损伤的保护作用.方法 通过可逆性失血性休克以及静脉注射脂多糖两次打击以建立大鼠MODS模型,将大鼠随机分为空白对照组、MODS模型组和SND治疗组.采用常规病理检查,快速抽取主动脉血作血气分析和心、肝、肾功能有关酶学指标的检测,测定血清SOD、NO含量,以及ELISA法测定血清TNF-α和IL-6的含量.结果 病理检查显示模型组大鼠造模1 d后各重要脏器都有全身炎症反应综合征表现,3 d后更明显,而SND治疗组病变明显减轻;心、肝、肾功能生化指标在模型组明显升高(P<0.01),而治疗组较模型组有显著改善(P<0.05或P<0.01);与空白对照组比较,模型组大鼠血清SOD水平显著下降而NO水平显著升高,而治疗组除灌胃1 d后血清NO水平仍显著高于空白对照组(P<0.05)外,血清SOD和NO水平与对照组相比无显著差异;模型组和治疗组大鼠血清TNF-α和IL-6含量与空白对照组比较显著升高(P<0.05或P<0.01),且治疗组大鼠治疗3 d后血清TNF-α含量显著低于相应时间的模型组(P<0.05),治疗组大鼠治疗1 d后血清IL-6含量亦显著低于模型组(P<0.05).结论 四逆汤能有效防治MODS的发生和发展,其机制可能与其下调过度的炎症反应、提高机体的抗氧化能力以及减轻自由基损伤有关.     

通心络对同型半胱氨酸损伤的内皮细胞的基因表达谱的影响

目的: 探讨通心络对同型半胱氨酸(Hcy)损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的基因表达谱的影响。方法: 原代培养的HUVECs,随机分为对照组、Hcy组和通心络组,提取总RNA并纯化,反转录合成荧光分子(Cy3/Cy5)标记的cDNA探针,采用高通量Affymetric人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片(含47 000个基因或基因片段)杂交,杂交信号经扫描和数字化处理,通过生物信息学数据分析推测通心络对同型半胱氨酸损伤的HUVECs细胞功能的影响以及可能的信号通路。结果: 与对照组相比,Hcy组有4 343个基因表达上调,316个基因表达下调;与Hcy组相比,通心络组有3 409个基因表达上调,121个基因表达下调。这些共同的差异基因生物功能涉及转录因子调控、激酶、细胞骨架与蛋白合成、转运功能、细胞因子、细胞-细胞受体相互作用和细胞黏附因子等。参与的信号通路主要是与血管新生、凋亡、氧化应激、凝血纤溶和炎症等相关的信号通路,如mTOR信号通路、MAPK信号通路和Toll样受体信号通路。结论: 通心络能导致同型半胱氨酸损伤内皮细胞基因表达谱的改变,这些基因改变可能参与了细胞凋亡、氧化应激和凝血纤溶等过程。     

STAT3在附子多糖后处理保护缺氧/复氧乳鼠心肌细胞机制中的作用

目的以信号转导子与转录激活子3(STAT3)为切入点,探讨附子多糖后处理对乳鼠缺氧/复氧后心肌细胞的保护机制。方法建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、附子多糖组、STAT3特异性的阻断剂Stattic加附子多糖组、Stattic组。流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,Western blot法分析磷酸化-STAT3(P-STAT3)、细胞色素C(CytC)和Caspase-3的表达,荧光定量PCR检测Bcl-xl mRNA及Bcl-xs mRNA的表达量。结果与缺氧/复氧组相比较,附子多糖后处理可以促进P-STAT3的表达,上调Bcl-xl基因表达而下调Bcl-xs基因表达,阻碍CytC自线粒体的释放及Caspase-3的表达,抑制心肌细胞凋亡发生。而Stattic可以逆转附子多糖后处理对心肌细胞的保护效应及P-STAT3的表达增加。结论附子多糖后处理对缺氧/复氧心肌细胞的保护效应与其激活STAT3、促进抑凋亡蛋白Bcl-xl表达、保护线粒体、阻断细胞凋亡的线粒体通路有关。     

附子多糖对胰岛素抵抗脂肪细胞模型GLUT4蛋白表达和转位的影响

目的研究附子多糖对胰岛素抵抗脂肪细胞模型葡萄糖转运4(GLUT4)蛋白表达和转位的影响。方法将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞,用高糖和高胰岛素联合诱导培养脂肪细胞,造成胰岛素抵抗脂肪细胞模型,实验设对照(CON)组、模型(MOD)组、附子多糖(FPS)组、罗格列酮(ROS)组,干预培养24 h,收集细胞,提取全细胞蛋白及细胞外膜蛋白,SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳后,通过Western blot方法检测各组全细胞蛋白及细胞外膜蛋白中GLUT4的含量。结果各组对GLUT4表达差异无统计学意义(P0.05)。模型组转位显著降低,仅为正常脂肪细胞的30.4%,以模型组转位量为基值,各组分别与之相比计算GLUT4蛋白的相对定量,附子多糖组、罗格列酮组分别使GLUT4蛋白转位增加164%、301%,与模型组比较差异有统计学意义(P0.01),附子多糖组显著低于罗格列酮组(P0.01)。结论附子多糖对胰岛素抵抗脂肪细胞模型全细胞GLUT4蛋白表达无影响,但可促进其转位,其促进胰岛素抵抗脂肪细胞对葡萄糖的摄取可能与这一机理有关。