哇巴因抑制钠泵β1亚单位和VE-cadherin减弱血管内皮细胞连接功能

目的探讨钠泵抑制剂哇巴因对血管内皮细胞连接的影响及机制。方法以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为靶细胞,Hoechst33342/PI双荧光染色法观察哇巴因作用后细胞凋亡或坏死特征,透射电镜和光镜观察细胞形态结构变化。应用半定量聚合酶链反应检测钠泵α1亚单位、β1亚单位、VE-cadherin和SnailmRNA的表达。结果0.1μmol.L-1哇巴因作用HUVECs24～48h,细胞死亡以凋亡为主,10μmol·L-1哇巴因作用24h,引起细胞坏死;对照组细胞间的细胞连接数量多,结构清晰,而经哇巴因作用后,细胞连接丧失,细胞脱落。哇巴因作用HUVECs后,钠泵α1亚单位和Snail表达上调,β1亚单位和VE-cadherin表达下降,其改变均呈剂量和时间依赖性。结论哇巴因通过下调血管内皮细胞钠泵β1亚单位和VE-cadherin的表达使细胞连接功能减弱。     

土槿甲酸对3种细胞系增殖抑制作用的比较

 目的比较土槿甲酸(PAA)对人胃癌细胞(MGC80-3),人肝癌细胞(SMMC-7721)和人红白血病细胞(K562)的增殖抑制作用,探讨其抗癌作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度PAA对体外培养的MGC80-3细胞,SMMC-7721细胞和K562细胞的细胞毒作用。Hoechst33342/PI荧光双染色方法检测细胞凋亡。琼脂糖凝胶电泳检测K562细胞DNA裂解。结果PAA明显抑制MGC80-3,SMMC-7721和K562细胞系的增殖,其IC₅₀值分别为12.500,3.125,12.500μmol·L^-1。凋亡细胞比例在用药48h分别达83.50%,44.50%和63.20%。琼脂糖凝胶电泳呈典型的"DNA Ladder"。结论PAA能有效抑制MGC80-3,SMMC-7721和K562细胞增殖并诱导凋亡。     

大鼠胚胎脑膜组织细胞分离培养及其生物学特性观察

【目的】分离和培养大鼠胚胎脑膜组织细胞,并观察其生物学特性。【方法】在无菌条件下取妊娠14.5~16.5 d大鼠的胚胎脑膜组织,培养传代,在倒置光显微镜和电镜下对细胞形态变化进行动态观察;流式细胞仪检测细胞周期变化;用四唑盐(MTT)法测定细胞生长活力。在细胞传至第4代时加入10μmol/L 5-aza,并观察其对细胞增殖和行为的影响;免疫细胞化学方法检测Desmin、GFAP的表达。【结果】在透射电镜下观察对照组多数细胞为未分化细胞,而实验组可见有成纤维样细胞和胶质样细胞的形态变化;流式细胞仪分析经5-aza诱导3 d后,处于增殖状态的S期细胞比率为8.1%,较对照组9.7%为低;经MTT法检测表明5-aza明显抑制胚胎脑膜组织细胞的增殖。免疫细胞化学检测结果表明,胚胎脑膜组织细胞经5-aza诱导8 d Desmin和GFAP的表达均较对照组显著增高,阳性率分别达51.2%和52.3%。【结论】5-aza对胚胎脑膜组织细胞生长有明显抑制作用,并诱导其分化成纤维样细胞和胶质样细胞。     

蟾蜍灵的药理活性研究进展

蟾蜍灵(bufalin)属强心甙类物质,来源于中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans Cantor)和黑眶蟾蜍(Bufo melanostictus Schneider)耳后腺及皮肤腺分泌之浆液[1],是中药蟾酥中提取的一种毒性配基,分子式为C24H34O4,相对分子质量为386.5.研究表明,这种成分具有抗癌、强心、毒性、麻醉等作用,它对下丘脑-垂体-睾丸及中枢神经系统功能也有一定影响.现分别综述如下.     

鲨鱼软骨制剂对人不同细胞生长抑制作用及其机制的探讨

目的　研究鲨鱼软骨制剂 (SCP)对人胃癌细胞 (MGC80 3)、红白血病细胞 (K5 6 2 )、人结肠高分化腺癌细胞 (THC 890 8)、人乳腺癌细胞 (MCF 7)和人脐静脉血管内皮细胞 (VEC340 )的生长抑制作用 ,探讨其作用机制。方法　采用盐酸胍抽提 ,丙酮分级沉淀 ,烘干 ,微孔滤膜过滤等步骤从鲨鱼软骨粉中提取鲨鱼软骨制剂 (SCP) ;MTT法检测不同浓度的SCP对体外培养的MGC80 3细胞系、K5 6 2细胞系、THC 890 8细胞系、MCF 7细胞系和VEC340细胞系的生长抑制作用 ;Hoechst33342 /PI荧光双染法检测细胞凋亡。结果　SCP明显抑制MGC80 3、K5 6 2、THC 890 8、MCF 7和VEC340五种细胞系的生长 ,其IC50 值分别为 0 5mg/ml、0 7mg/ml、1mg/ml、1 5mg/ml和 2mg/ml。凋亡细胞比例在用药后 4 8h分别达 79 9%、4 4 6 %、78 9%、6 3 3%和 4 4 8%。结论　SCP能直接抑制不同肿瘤细胞生长 ,又能抑制血管内皮细胞的生长 ,其作用机制与细胞凋亡有关。     

bFGF促进大鼠骨髓间充质干细胞向神经胶质样细胞转分化

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells,rMSCs)在体外诱导为神经源性细胞的可行性,并探讨其作用机制。方法从Wistar大鼠骨髓中获得rMSCs,纯化培养传代后用不同浓度的bFGF诱导,经MTT法检测bFGF对rMSCs生长的影响;用倒置光显微镜、透射电镜、免疫组化和RT-PCR等方法鉴定诱导后细胞行为改变与snail mRNA表达。结果bFGF对rMSCs具有促增殖作用,在倒置光显微镜和透射电镜下可见到有神经胶质样细胞形成,免疫组化证明GFAP的表达较对照组显著增高(P<0.01)。RT-PCR结果表明,诱导组细胞snail mRNA明显表达。结论bFGF促进rMSCs转分化为GFAP阳性的神经胶质样细胞,转录因子Snail可能与转化过程有关。     

PPARγ和RXRα的表达上调增强了对肿瘤细胞生长的抑制作用

目的研究过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPAPγ)和维甲类X受体α(RXRα)在人消化系统肿瘤(胃癌MGC803、结肠癌LOVO、肝癌SMMC7721)细胞中的表达及其对配体作用的反应。方法采用MTT检测细胞生长;半定量RT-PCR法检测PPARγ和RXRαmRNA的表达。结果吡格列酮(PGZ)单独作用及与9-顺式-维甲酸(9-cis-RA)联合作用72 h,对MGC803和SMMC7721产生较强的抑制作用,联合作用组的抑制作用显著强于PGZ单独作用组(P<0.01),但对LOVO的抑制作用不明显。PPARγ和RXRα在MGC803细胞中有较强表达,在SMMC7721和LOVO细胞中表达较弱。PGZ能显著上调MGC803和LOVO细胞中PPARγ的表达,联合作用组PPARγ表达比PGZ单独作用组显著升高(P<0.05);9-cis-RA能显著上调MGC803和LOVO细胞中RXRα的表达,联合作用组RXRα表达与9-cis-RA单独作用组无明显差别。结论在MGC803、LOVO和SMMC7721肿瘤细胞中,MGC803细胞PPARγ和RXRα表达最强,这对配体发挥作用可能是必需的,配体发挥的抑制细胞生长的效应可能与其介导的信号途径有关。     

视黄酸诱导胃腺癌细胞凋亡并上调P21／WAF1基因表达

目的 研究视黄酸（RA）对胃腺癌MGC－803细胞的作用及有关机制。方法 以荧光显微镜、透射电镜和电泳技术检测细胞凋亡,免疫组化检测细胞P21／WAF1蛋白表达。结果 RA处理的MGC－803细胞发生凋亡特征性的改变：细胞皱缩,核染色质凝集,边移,沿核膜内缘分布,呈帽形或半月形,亦可见凋亡小体的产生;基因组DNA沿核小体之间断裂,电泳得到凋亡特征性的DNA梯带;细胞P21／WAF1蛋白表达显著增高。结论 RA诱导胃腺癌MGC－803细胞凋亡与其上调P21／WAF1基因表达有关。     

蟾蜍灵对肝癌细胞SMMC 7721的细胞毒作用及生长相关基因表达的影响

为探讨蟾蜍灵的抗癌作用机理 ,以肝癌SMMC772 1细胞为靶细胞 ,应用噻唑蓝还原法检测细胞毒作用 ,双荧光染色法和DNA电泳技术检测细胞凋亡与坏死 ;免疫组织化学方法检测细胞生长相关基因p2 1waf1/cip1和增殖细胞核抗原 (PCNA)蛋白表达 .结果表明 ,0 .0 1μmol·L- 1及以上浓度蟾蜍灵对SMMC772 1细胞具有显著细胞毒作用 ,形态学和DNA片段化检测证实蟾蜍灵诱导的细胞死亡以凋亡为主 ;p2 1waf1/cip1在蟾蜍灵诱导下表达上调 ,同时PCNA的表达下降 ,两者呈负相关 (P <0 .0 1) .提示蟾蜍灵通过上调p2 1waf1/cip1表达 ,下调PCNA表达 ,从而抑制肝癌细胞生长