丙型肝炎病毒量分析的研究进展

目前，国内大中型医院已普遍开展利用逆转录多聚酶链反应技术诊断丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染，部分医院还开始尝试利用干扰素治疗慢性丙型肝炎（ＨＣ）。但由于缺乏一种检测ＨＣＶ量变化的敏感方法，致使进一步研究ＨＣ发病机理，优化治疗方案，观察和判断疗效等遇到很大困难。为此，本文将介绍国外在ＨＣＶ量分析的方法、应用及意义等方面的进展。     

肝细胞癌患者中p53基因的突变研究

为了解肝细胞癌（ＨＣＣ）中ｐ５３基因的突变情况，收集８６例ＨＣＣ手术切除术标本，采用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ／ＳＳＣＰ），聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ／ＲＦＬＰ）和ＤＮＡ序列分析，研究了ｐ５３基因的突变情况，８６例ＨＣＣ中，ｐ５３基因的突变率为３６％，其中，密码子２４９的突变率为３３．７％，１例ＳＳＣＰ和ＲＦＬＰ均提示密码子２４９存在突变者经ＤＮＡ序列分析显示密码子２４９     

肝细胞癌组织和癌周组织中p53基因密码子249突变的比较研究

目的：本研究通过比较研究ＨＣＣ 癌组织和癌周组织中ｐ５３ 基因密码子２４９ 特征性突变来进一步阐明该基因在ＨＣＣ 发生机制中的意义。方法：收集９ 份癌组织中经单链构型多态性分析研究证实存在密码子２４９ 突变的ＨＣＣ 标本和１１ 例无此突变的ＨＣＣ 标本,采用等位基因特异性ＰＣＲ（ＡＳ－ ＰＣＲ） 方法比较研究癌组织和癌周组织中密码子２４９ 突变情况。结果：２０ 例ＨＣＣ 中,癌周组织中密码子２４９ 特征性突变检出率为７０ ％ 。９ 例ＳＳＣＰ 阳性者的癌周组织中的特征性突变检出率达１００ ％ 。１１ 例阴性患者的癌组织和癌周组织也能检出一定水平的突变。结论：ｐ５３基因密码子２４９ 突变在非癌肝组织中广泛存在。癌组织中密码了２４９ 特征性突变可能发生在肿瘤形成之前。     

血清HA、PC Ⅲ、CIV定量对肝组织纤维化诊断的意义

目的探讨血清纤维化指标透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)定量对肝组织纤维化不同阶段诊断的临床应用价值.方法用放射免疫法(RIA)检测253例慢性肝病患者血清HA、PCⅢ、CⅣ水平,所有患者同时做了肝组织活检.以病理诊断为金标准,采用ROC(Receiver Operating Curve)曲线确立HA、PCⅢ、CⅣ诊断肝纤维化(分期≥S2)和肝硬化(分期S4)的截断值及其诊断的灵敏度(Se)、特异度(Spe)、阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV).结果血清HA、PCⅢ、CⅣ诊断肝纤维化(分期≥S2)的截断值分别为90μg/L、90 μ g/L、75 μ g/L,其诊断的灵敏度分别为80.4%、82.0%、63.1%,特异度分别为70.2%、60.8%、83.8%,阳性预测值(PPV)分别为86.7%、83.5%、90.4%,阴性预测值(NPV)分别为59.8%、58.4%、48.4%.HA、PC Ⅲ、C Ⅳ诊断肝硬化的截断值分别为210μg/L、150 μ g/1.90 μ g/L,其诊断的灵敏度分别为96.2%、76.4%、80.0%.特异度分别为85.3%、68.7%、75.8%,PPV分别为65.4%、40.4%、47.8%,NPV分别为98.8%、91.3%、93.2%.结论测定血清HA、PCⅢ、CⅣ水平可以对肝纤维化不同阶段做出相对准确的诊断.其中以HA对肝硬化诊断的临床应用价值最大.     

串联重复信号放大系统检测HBV DNA与其他方法的比较研究

目的探讨TRSE液相杂交法检测HBVDNA的临床应用价值。方法先用TRSE法、斑点杂交法、定性PCR法及荧光定量TaqmanPCR法分别检测倍比稀释的标准HBVDNA质粒,比较其敏感性;再用355份血清标本对各个方法的敏感性、特异度、结果的符合率等做进一步的比较分析。结果荧光定量PCR法的敏感性最高,达到1.33×104copy/ml;普通PCR法的敏感性为5.15×104copy/ml;TRSE法的敏感性为8.33×104copy/ml较斑点杂交法的6.25×105copy/ml高。在HBsAg+HBeAg阳性组,TRES液相杂交法的阳性率与普通PCR法无差别;在HBsAg(+)/HBeAg(-)组,TRSE液相杂交法只与荧光定量TaqmanPCR法有差别。结论TRSE杂交法能够区分在HBeAg阳性和阴性组HBVDNA复制的差别;它具有敏感性、特异度高,实用性强等特点,是一种较好的HBVDNA检测方法。     

体检发现谷丙转氨酶升高人群中检出TT病毒

目的：了解新型肝炎病毒—ＴＴ病毒在中国的流行情况，探讨其核酸变异性。方法：收集１９例健康体检发现谷丙转氨酶升高者的血清标本，采用ＰＣＲ方法检测ＴＴ病毒的ＤＮＡ。所得ＰＣＲ产物再采用限制性片段长度多态性分析和ＤＮＡ序列分析方法进行验证。最后将测序结果与ＧｅｎＢａｎｋ中的一些分离株进行比较，分析它们的同源性。结果：１９例转氨酶升高者中，２例ＰＣＲ检测呈阳性反应，其产物经限制性片段长度多态性分析证实为特异性产物。ＤＮＡ序列分析显示，２个阳性产物间的核酸同源性为９８７％，与Ｔａｋａｈａｓｈｉ等分离株和Ｏｋａｍｏｔｏ等分离株相比，同源性分别为９８７％和８９２％。两个ＴＴＶＤＮＡ片段中均存在精氨酸取代丝氨酸变异。结论：在中国广东人群中存在ＴＴ病毒感染，其核酸序列与Ｔａｋａｈａｓｈｉ等在日本得到的分离株高度同源。因而，设计ＰＣＲ引物时宜选择Ｔａｋａｈａｓｈｉ等分离株为标准。精氨酸取代丝氨酸变异的意义需进一步研究。     

慢性乙型肝炎患者特异性细胞毒性T淋巴细胞的变化

目的探讨慢性乙型肝炎急性发作及病情严重程度与特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)水平的关系。方法从29例人白细胞抗原(HLA)-A2阳性慢性乙型肝炎急性发作及免疫耐受慢性乙型肝炎患者外周血中分离外周血单个核细胞,用HLA-A2*HBcAg抗原表位肽-五聚体复合体及CD8单克隆抗体染色后,用流式细胞仪检测乙型肝炎病毒(HBV)特异性的CTL细胞。并对6例急性发作患者进行动态检测HBV特异性的CTL、肝功能和病毒载量。结果19例急性发作慢性乙型肝炎患者五聚体阳性细胞占CD8阳性细胞的比例平均为1．4%±0．8%,而10例免疫耐受患者为0．6%±0．4%,两组间比较,t=2．180,P＜0．05,差异有统计学意义。急性发作导致重型肝炎的患者中,乙型肝炎核心抗原特异性CTL细胞阳性率平均为1．3%±1．0%,而非重型肝炎患者为1．4%±0．8%,两组间比较,差异无统计学意义。在12周的随访期内,患者丙氨酸氨基转移酶和病毒载量逐渐下降,但乙型肝炎核心抗原特异性CTL维持在较高的水平(＞0．7%)。结论慢性乙型肝炎患者急性发作与HBV特异性CTL有关,但主要的肝细胞损害可能并非直接由HBV特异性CTL引起的。     

肝细胞癌患者中丙型、乙型肝炎病毒感染与p53基因变化的关系

肝细胞癌患者中丙型、乙型肝炎病毒感染与ｐ５３基因变化的关系彭晓谋，彭文伟，姚集鲁，周元平近来，国外少量报道显示，ＨＣＶ、ＨＢＶ感染有可能通过引起突变或杂合丢失（ＬＯＨ）而灭活ｐ５３基因［１，２］。国内学者对启东和西北地区ＨＣＣ的研究发现，ＨＢＶ感染或...     

肝功能衰竭39例患者的离体肝组织病理特点

目的了解肝功能衰竭患者的肝组织病理特点,并将病理诊断与临床诊断的结果相比较.方法选择排除肝癌的乙型肝炎病毒感染者39例,将其施行肝移植术后留下的离体肝组织行多部位切取组织标本,进行苏木精-伊红染色及网纤染色,分析其病理特点,并将病理诊断与临床诊断进行比较.结果1.39例离体肝组织标本,整个肝脏病变的范围和程度呈现相对均匀分布的特点,但是在同一取材的微观肝组织中,其病变特点可呈现不均一性.2.临床诊断为＂乙肝肝硬化（活动期）＂的4例肝组织病理特点均符合＂活动性肝硬化＂,而35例临床诊断为＂慢性乙型重型肝炎＂的肝组织病理符合＂活动性肝硬化＂者有18例、符合＂慢性重型肝炎＂病理诊断者仅有17例.结论临床诊断为慢性重型肝炎患者在病理学上分为坏死后肝硬化和肝脏大块坏死或亚大块坏死两种类型.