肿瘤特异性凋亡基因诱导人黑色素瘤细胞凋亡机制的研究

目的研究肿瘤特异性凋亡基因(Apoptin gene)在诱导人黑色素瘤细胞A375发生凋亡时,c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在细胞发生凋亡中的作用。方法用含有肿瘤特异性凋亡(Apoptin)基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色素瘤细胞A375;采用流式细胞仪、免疫印迹法(W estern b lot)、台盼蓝染色法及RT-PCR等方法研究其在不同时间条件下对人黑色素瘤细胞A375诱导凋亡的作用。结果Apoptin基因瞬间转染的人黑色素瘤A375细胞出现明显的细胞凋亡,凋亡细胞的数量随Apoptin转染时间延长而增多,磷酸化型JNK蛋白在转染Apoptin 24 h开始表达,48h和72h过表达,而非磷酸化型JNK蛋白表达无明显变化。结论Apoptin基因具有诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡的作用,JNK信号通路的激活可能在Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥作用。     

抗Periostin单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗Periostin单克隆抗体并鉴定其免疫学性能,为后期临床应用奠定基础。方法:表达并纯化Periostin的GST融合蛋白,经过免疫小鼠、细胞融合及亚克隆筛选,制备效价良好的高亲和力单克隆抗体,并用免疫组化实验鉴定其免疫学性能。结果:获得6株杂交瘤细胞株,均能稳定分泌高亲和力抗体,经酶联免疫吸附测定、Western blot和免疫组化实验证实均能特异性识别人的Periostin,显微镜下观察发现Periostin在结直肠癌、乳腺癌等肿瘤患者的组织切片中表达水平显著高于健康人。结论:成功制备了高亲和力、特异性强的抗人Periostin单克隆抗体,为小分子抗体以及抗体人源化制备奠定了基础,进而为治疗人体内组织器官纤维化提供理论依据。     

小鼠IgG2b单克隆抗体Fab、Fc和Fab／c片段的制备和纯化（文摘）

本文报道了用小鼠IgG2b单克隆抗体制备和纯化Fab、Fc和Fab／c片段。由于IgG2b抗体具有对蛋白酶敏感的特性，用胃蛋白酶在酶与抗体之比为1：30，pH4．8的条件下消化抗体．可获得的Fab／c片段产量高达30％。消化液经DEAE—纤维素初步层析，可以含有Fc片段的混合液中分离出Fab片段。     

rhIL-18对核辐射诱导小鼠脾细胞凋亡的抑制机制研究

为了探讨重组人白细胞介素18（rhIL-18）对核辐射所致小鼠脾细胞凋亡的抑制作用机制,对32只C57小鼠分4组进行核辐射损伤,2周后取小鼠脾淋巴细胞体外培养,用细胞凋亡ELISA试剂盒测定胞质中核小体含量,用DNA琼脂糖电泳检测凋亡细胞DNA片段;用原位杂交方法测定脾细胞凋亡相关基因bax与bcl-2的表达,观察rhIL-18对其表达的调节作用。结果表明,与对照组比较,rhIL-18能够明显降低核辐射所致的小鼠脾细胞凋亡;促进bcl-2的表达,下调bax基因的表达。结论：rhIL-18可能通过促进bcl-2的表达、下调bax基因的表达方式抑制核辐射诱导的小鼠脾细胞凋亡。     

适合于人体治疗的人源化单克隆抗体

应用基因工程技术对鼠单克隆抗体进行改造,使其人源化,即将鼠单克隆抗体的CDRs 区插到人抗体V 区框架中。其目的在于降低鼠单克隆抗体对人体的抗原性,以适合于人体治疗。实验证明:这种人源化的单克隆抗体的抗原性大大降低,而其抗体活性仍存在,有的人源化抗体甚至出现了原抗体不曾具有的ADCC 效应,将人源化单克隆抗体用于人体治疗,获得满意的疗效,本文将对此进行综述。     

肿瘤特异性凋亡基因诱导人宫颈癌细胞凋亡作用

目的 研究肿瘤特异性凋亡蛋白基因(apoptin)在诱导人宫颈癌细胞凋亡过程中信号转导机制.方法 用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人宫颈癌细胞(hela);采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测hela细胞的凋亡;以比色法检测胱天蛋白酶-8(caspase-8)和胱天蛋白酶-3(caspase-3)的相对活性.结果 Apoptin基因瞬间转染的hela细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带;流式细胞术检测发现,实验组细胞凋亡率[(40.45±0.76)%]明显高于正常对照组[(3.25±0.16)%]和载体对照组[(3.55±0.12)%](P＜0.01);caspase-3的活性升高,但caspase-8活性无明显变化.结论 Apoptin基因可通过激活caspase-3诱导hela细胞凋亡.     

ELISA间接法检测肾综合征出血热病人抗体的影响因素探讨

以亲和层析提取的肾综合征出血热(HFRS)病毒结构蛋白为特异性抗原．建立了检测HFRS病人血清中特异性抗体的ELISA间接法。在此基础上．用正交设计法及方阵法对影响ELISA接法特异性的主要因素(封闭因素、包被时间、抗原保存时间、血清浓度及抗原浓度)进行探讨。结果表明,封闭因素及抗原保存时间对ELISA反应的特异性没有显性影响；抗原包被时间在24h结果最佳；最适抗原浓度及血清浓度分别为25μg／ml及1:8000。     

SARS病毒E2蛋白保护性抗原片段原核表达载体的构建及表达

为构建SARS病毒E2蛋白保护性抗原片段的原核表达载体，采用人工合成法合成SARS病毒E2蛋白3’端cDNA；用常规分子克隆方法将此cDNA片段克隆入原核表达载体pBV220中，经温度诱导和SDS-PAGE电泳证明外源蛋白表达。结果表明合成的E2蛋白cDNA经序列测定，与报道的SARS病毒相应序列一致，内切酶酶切及PCR均得到456bp的cDNA片段，与实验设计一致，证明此cDNA片段已插入pBV220载体中；SDS-PAGE电泳表明有外源蛋白表达。结论：用本文介绍的方法可成功地合成并克隆SARS病毒E2蛋自原核表达载体，此项研究结果为SARS的诊断和预防奠定了基础。     

肿瘤特异性基因对黑色素瘤细胞凋亡诱导作用

近年来的研究发现．鸡贫血病毒(Chicken anemia virus．CAV)VP3基因编码的一种蛋白质,可能通过独立于p53作用途径，不被Bcl-2抑制的方式，诱导人肿瘤细胞或转化细胞发生凋亡，而对人正常细胞没有毒性作用，故称之为肿瘤特异性凋亡因子（Apoptin）。其独特的诱导凋亡作用，有望成为一种新的有产的抗肿瘤药物。我们在克隆和构建VP3基因真核表达载体的条件下，