一蜡样芽胞杆菌食物中毒分离株的表型与基因型

目的对2003年发生在云南的一起蜡样芽胞杆菌呕吐型食物中毒案例中的分离株YN0303进行表型和基因型分析研究。方法采用16S r DNA序列分析和16S/23S r DNA ITS特征图谱分析结合形态、生理生化和基因型进行菌种鉴定;PCR检测呕吐毒素和肠毒素合成相关基因,高效液相和质谱联用(HPLC-MS)化学定量分析呕吐毒素合成情况,测试部分生理生化特性和生长温度范围,进行了pan C分型和多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)。结果确认了该菌株确为蜡样芽胞杆菌Bacillus cereus,虽然该食物中毒是典型的呕吐型案例,但是发现该分离株呕吐毒素相关合成基因ces呈阴性,呕吐毒素化学定量分析结果为阴性;其生理生化特性(水杨苷发酵、淀粉水解和溶血特性)与典型呕吐型菌株也不相同。pan C分型并非呕吐型蜡样芽胞杆菌所属的Ⅲ型,而是属于细胞毒性强的IV型,而且其肠毒素基因hbl、nhe和cyt K2也均呈阳性;多位点序列分析显示该菌是一个新型别ST753,是区域性相对独立进化菌株。结论在该呕吐型食物中毒案例中可能有多个蜡样芽胞杆菌参与,该分离株YN0303并非主要致病株—呕吐型菌株,但可能作为细胞毒性强的菌株参与了共感染。     

2013年云南省市售特色食品中细菌性污染情况调查

调查云南省市售特色食品中细菌污染状况。 方法 采用国家标准规定的检测方法,对2013年云南省4个有代表性的州市市售特色食品进行卫生指标菌和常见食源性致病菌检测,并用SPSS 19.0软件对测定结果进行分析。 结果 在10类食品的288份样品中卫生指标菌不合格率为56.50%,食源性致病菌总检出率为12.15%,均为散装产品;沙门菌主要来自凉拌生猪皮和凉拌食品,检出率分别为8.33%和3.13%;金黄色葡萄球菌检出最高的为凉拌生猪皮,为31.25%,其次为乳扇25.00%;蜡样芽胞杆菌在凉拌食品中检出率低(7.81%);志贺菌和致泻大肠埃希菌在散装食品中未检出。全年4个季度沙门菌和金黄色葡萄球菌的检出率差异无统计学意义(P＞0.05)。 结论 云南省市售特色食品,特别是散装样品,细菌性污染严重。考虑到食品的即食性,原料来源不可控,无熟制过程,存在较大食品安全隐患,应进一步加强相关食品的卫生监管。     

椰毒假单胞菌酵米面亚种选择性分离培养基的比较研究

目的比较4种椰毒假单胞酵米面亚种选择性分离培养基(马铃薯葡萄糖琼脂,PDA;改良马铃薯葡萄糖琼脂,mPDA;椰毒假单胞菌酵米面亚种分离琼脂,PCFA;银耳卵黄氯霉素琼脂,TYCA)的分离效果,为修订GB/T4789.29—2003《食品卫生微生物学检验椰毒假单胞菌酵米面亚种检验》提供技术支持。方法接种椰毒假单胞菌酵米面亚种于4种选择性分离培养基,观察各培养基上目标菌菌落形态,计算生长率;接种10种常见致病菌和环境中常见菌于4种选择性分离培养基,进行生长特异性试验;通过直接涂布和增菌划线的加标试验,验证这4种选择性分离培养基对粪便、食品和环境土壤等不同标本/样品中椰毒假单胞菌酵米面亚种的分离检出情况。结果 mPDA和PCFA能够分别抑制8种和6种致病菌的生长,且椰毒假单胞菌酵米面亚种的生长率都高于75%;在mPDA和PCFA上,目标菌与多数杂菌形态有明显区别,而在PDA和TYCA上,形态相近不易区分;在粪便、土壤和食品等不同标本/样品的直接涂布和增菌划线分离的加标试验中,mPDA和PCFA上的检出率均超过80%,明显高于PDA和TYCA。结论 mPDA和PCFA分离效果比原标准的PDA明显提高,建议在标准修订中增加此两种选择性分离培养基。     

唐菖蒲伯克霍尔德氏菌三种鉴定方法的比较

以食品及环境样品中初步分离的13株疑似唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）为研究对象,通过比较生理生化检 测法、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）法和recA序列分析法,得到快速准确鉴定唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的方 法。 结果表明,13株疑似菌株经MALDI-TOF-MS法和recA序列分析法鉴定为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌,而VITEK 2 COMPACT生理生 化法鉴定8株（62%）为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌,其他5株为栖稻假单胞菌（Pseudomonas oryzihabitans）。 在唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的鉴 定方法中,MALDI-TOF-MS法和recA序列分析法鉴定结果一致且准确,而VITEK 2 COMPACT生化检测法存在缺陷。 相比传统生理 生化鉴定方法,MALDI-TOF-MS法和recA序列分析法在唐菖蒲伯克霍尔德氏菌鉴定中更为快速、准确。     

2014~2018年云南省食源性沙门氏菌耐药监测分析

目的 了解云南省2014年?2018年云南省食源性沙门氏菌的耐药情况。方法 采用沙门氏菌诊断血清和革兰阴性需氧菌药敏检测板对2014年?2018年337株食源性沙门氏菌进行了血清分型和药物敏感试验, 对耐药结果进行分析。结果 2014年?2018年食源性沙门氏菌血清型有56种。2018年食源性沙门氏菌对14种抗生素的耐药率(92.9%)最高。2018年食源性沙门氏菌对三类及三类以上抗生素的总耐药率(45.8%)最高。各年沙门氏菌对头孢西丁、头孢噻肟、头孢他啶、阿奇霉素的敏感率均在90%以上; 亚胺培南的敏感率有明显下降趋势。检出多重耐药菌的61.2%(44/72)样品均是肉与肉制品, 其中绝大多数都是生肉制品(81.8%, 36/44)和预制肉制品。结论 2014年?2018年云南省食源性沙门氏菌的耐药性较高, 尤其是2018年。建议相关食品监管部门应加强对畜牧养殖业抗生素的使用, 及宰杀、加工、运输等环节的监督管理。     

克罗诺杆菌的生物膜检测和药敏性分析

目的：了解38 株主要来源于我国婴幼儿食品克罗诺杆菌分离株的生物膜形成能力和药敏性。方法：首先用fusA序列分析,对43 株克罗诺杆菌进行准确鉴定;采用半定量黏附实验（结晶紫染色法）测定分离株的生物膜形成能力,并选用八大类11 种抗生素测定其抗生素敏感性。结果：鉴定出34 株阪崎克罗诺杆菌、7 株丙二酸盐克罗诺杆菌和2 株都柏林克罗诺杆菌。这些克罗诺杆菌分离株均有一定生物膜成膜能力,其中丙二酸盐克罗诺杆菌的成膜能力较强;菌株普遍对四环素和万古霉素耐药性较高,共有14 个耐药谱;四环素的耐药性与生物膜形成能力有显著相关性。结论：实验结果表明克罗诺杆菌的成膜性和耐药性都较强,对相关食品企业的消杀措施和临床治疗提出了挑战。     

2016~2018年市售242件婴幼儿米粉微生物污染情况调查

目的 了解玉溪市售国产婴幼儿营养米粉的卫生状况。方法 采用国家标准方法对242件玉溪市市售的婴幼儿营养米粉进行细菌总数、大肠菌群、肠杆菌科、克罗诺杆菌属及蜡样芽胞杆菌检测分析。结果 本次采集的婴幼儿米粉样品的合格率为74.38%; 大肠菌群指标均未超标; 7件米粉样品细菌总数超标, 占比8.54%; 58件样品检出克罗诺杆菌属, 阳性率为23.97%; 10件样品检出蜡样芽胞杆菌, 阳性检出率为4.13%。一季度生产的样品合格率最低, 产自中国福建、广西、湖南、浙江及美国、西班牙、英国、日本和欧洲其他地区的米粉样品合格率最高, 采自零售店及包装形式为散装的样品合格率最低。结论 2016至2018年玉溪市市售婴幼儿米粉中部分样品细菌总数超标, 存在克罗诺杆菌属污染, 可能会导致婴幼儿感染。     

椰毒假单胞菌酵米面亚种食物中毒的病原分离鉴定

目的通过对食物中毒病原菌的分离鉴定,为查明中毒原因提供科学依据。方法分离鉴定和毒性试验按照国家标准方法 WS/T 12—1996《椰毒假单胞菌酵米面亚种食物中毒诊断标准及处理原则》和GB/T 4789.29—2003《食品卫生微生物学检验椰毒假单胞菌酵米面亚种检验》进行。米酵菌酸检测按照GB/T 11675—2003《银耳卫生标准》执行,采用液相色谱-质谱联用法对样品开展检测。结果经VITEK 2 COMPACT全自动微生物生化鉴定仪和基因指纹鉴定仪进行鉴定,4份样品中3份鉴定结果为唐菖蒲伯克霍尔德菌,小鼠毒性试验阳性。4份样品均检测出米酵菌酸。结论本次食物中毒源于食源性椰毒假单胞菌酵米面亚种污染。