NKG2D配体在中晚期食管癌患者术后NK细胞免疫治疗中的作用

  目的  探讨NKG2D配体MHC-I类相关分子A（MHC class I-related molecules A,MICA）在中晚期食管癌患者术后化疗联合NK细胞免疫治疗中的作用。   方法  福建省肿瘤医院90例中晚期食管癌患者手术后,分为单纯化疗组40例、化疗联合NK细胞治疗MCIA阴性组（简称MICA-组）25例及化疗联合NK细胞治疗MICA阳性组（简称MICA+组）25例,比较其疗效。   结果  与单纯化疗组及MICA-组相比,MICA+组CD3+、CD4+T细胞阳性率、NK细胞阳性率及CD4+/CD8+比率明显高于治疗前[（64.2±6.4）% vs（51.3±5.6）%,（39.8±8.2）% vs（29.5±3.2）%,（25.3±2.1）% vs（16.4±4.3）%,（1.4±0.5）vs（1.1±0.7）;均P < 0.05],T-reg细胞明显低于治疗前[（6.3±4.5）% vs（17.3±2.4）%,P < 0.05]。3组疾病控制率及有效率无明显差异（P>0.05）。MICA+组KPS评分治疗后明显提高,MICA+组能明显改善化疗引起的白细胞减少、外周神经毒性症状,MICA+组疾病进展时间（time to progression,TTP）及总体生存时间（overall survival,OS）均明显延长（均P < 0.05）。但单纯化疗组及MICA-组之间差异无统计学意义（P>0.05）。   结论  食管癌组织MICA表达阳性的中晚期患者进行化疗联合自体NK细胞能有效能有效提高免疫力,改善患者生活质量,并能延长生存期,且回输安全、不良反应小。      

IL-12诱导肝癌微环境中NK细胞活化发挥抗肿瘤作用

目的:探讨IL-12通过诱导肝癌微环境中NK细胞活化诱导抗肿瘤的效果。方法:NOD/SCID小鼠皮下注射肝癌HepG2细胞,成瘤后腹腔注射人外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL),建立HCC-huPBL荷瘤小鼠模型。将荷瘤小鼠随机分为IL-12组和PBS对照组,瘤内注射IL-12后,观测荷瘤小鼠瘤体积、体重、一般状况的变化,IL-12瘤内注射后第30天ELISA法检测荷瘤小鼠肝癌组织微环境中IL-12、INF-γ含量以及小鼠外周血中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate amin-otransferase,AST)及谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)的含量,免疫组化法检测IL-12治疗后肝癌微环境中NK细胞活化性受体NKG2D、NKp44、NKp30、NKp46,以及抑制性受体KIR2DL3/CD158b、NKG2A/CD159a的表达。结果:第12、18、24、30天IL-12组荷瘤小鼠瘤体积均小于PBS组[(594.47±205.51)vs(832.10±187.49)mm3,(963.61±427.95)vs(1 350.87±468.23)mm3,(1 285.02±368.56)vs(1 975.49±655.54)mm3,(1 903.64±471.34)vs(2 568.77±784.68)mm3,均P<0.05]。IL-12组小鼠肝癌组织中IL-12与INF-γ的表达水平均明显高于PBS组[(2.96±1.02)vs(1.35±0.75)pg/ml,(12.26±4.11)vs(7.81±3.46)pg/ml,均P<0.05]。IL-12组与PBS组相比,血清ALT水平第7天显著升高[(73.85±10.71)vs(41.73±13.13)U/L;P<0.05],第14天达到高峰。IL-12组治疗后肝癌组织中NK细胞活化性受体NKG2D、NKp44、NKp30的表达较PBS组高(P<0.05),NKp46的表达未见明显升高;而NK细胞抑制性受体CD158b和CD159a表达较PBS组低(P<0.05)。结论:肝癌模型小鼠瘤体内IL-12注射可上调瘤组织内NK细胞活化性受体、IL-12、IFN-γ的表达,下调抑制性受体的表达,从而抑制小鼠模型中肿瘤的生长。     

HCC患者VEGF水平检测的临床应用

目的研究血管内皮细胞生长因子（VEGF）水平与原发性肝细胞癌（HCC）和病毒性肝炎的相关性。方法选用酶联免疫吸附定量法检测30例原发性肝癌患者和32例病毒性肝炎患者血清的VEGF水平。结果HCC组血清VEGF表达水平（193．9±104．1）ng／L分别与急性肝炎组（148．5±70．6）ng/L和慢性肝炎组（136．1±40．1）以及对照组（132．4±47．8）比较,均有显著性差异（P〈0．01）。发现肝肿瘤〉5cm的患者血清VEGF水平比其直径〈Sere直径的患者显著增高,提示血清VEGF水平随肿瘤大小而增加。结论检测原发性肝癌和不同肝炎患者血清的VEGF水平对判断肝病的恶性程度及肿瘤大小有临床意义。     

Survivin HLA—A2^＋高亲和性CTL表位的预测及鉴定

目的:采用生物信息方法预测和鉴定survivin抗原HLA-A2+限制性CTL表位,为探索基于survivin的肿瘤免疫治疗奠定基础.方法:采用超基序法和量化基序法对靶抗原survivin HLA-A2+限制性 CTL表位进行预测;选取得分>10的表位肽为候选对象,并进行人工合成.采用T2细胞,以HLA-A2结合实验和流式细胞术(FITC染色)检测候选CTL表位肽的结合亲和力[以荧光系数(fluorescence index,FI)表示];以HLA-A2解离实验和流式细胞术检测其结合稳定性[以复合物解离50%的时间DC50(dissociation complex 50%)表示].结果:预测到的候选survivin CTL表位肽分别是:20STFKNWPFL28 (SV20-28)、23KNWPFLEGC31 (SV23-31)、96LTLGEFLKL104 (SV96-104)、6LPPAWQPFL14 (SV6-14)、33CTPERMAEA41 (SV33-41)、46CPTENEPDL54 (SV46-54)、130KVRRAIEQL138 (SV130-138)、37RMAEAGFIH45 (SV37-45)、88SVKKQFEEL96 (SV88-96).亲和力分析显示:SV20-28 、SV96-104、SV130-138、SV23-31的FI分别为8.61、6.88、5.89、3.81;SV33-41、SV6-14、 SV46-54、 SV37-45 、SV88-96的FI分别为0.31、-0.29、-0.4、-0.16和-0.03;稳定性分析结果DC50为:SV20-28、SV96-104、SV130-138 ＞8 h;SV23-31 为4～6 h;SV6-14、SV33-41、SV88-96为2～4 h;SV46-54、 SV37-45为0～2 h.结果提示,SV20-28 、 SV96-104、SV130-138为高亲和力表位肽,SV23-31为中等亲和力表位肽,SV33-41、SV6-14、 SV46-54、 SV37-45 、SV88-96为低亲和力表位肽.结论:超基序法、量化基序法可快速有效地预测抗原表位,SV20-28 、SV96-104、SV130-138有可能是survivin HLA-A2+ CTL表位,可用于后续研究.     

脐带血原始造血细胞的分析

虽然,有关人类造血干细胞的鉴定,目前还未找到直接鉴定的方法,但仍可从其表面的分子标记、集落形成情况等推断造血干细胞的存在。ＣＤ３４抗原表达于人类的造血祖细胞表面包括造血干细胞,因而是目前普遍用于估算造血干细胞含量的指标。然而骨髓大部分ＣＤ３４＋细胞除造血干祖细胞外,也可能是骨髓的基质细胞群,因此,人们借助于其它相关或特异性抗原的表达,联合ＣＤ３４的表达来确定ＣＤ３４＋组分中造血干细胞的含量。我们以脐血为研究对象,探讨了其间ＣＤ３４＋细胞上相关抗原的表达,以期对脐血中造血干祖细胞群做一较为全面的分…     

表观遗传修饰介导抑制SOSTDC1表达促进宫颈癌细胞的恶性生物学行为

目的：探究含硬化蛋白域蛋白1（SOSTDC1）对宫颈癌细胞恶性生物学行为的调控及其分子机制。方法：收集2020年8 月至2022 年5 月间在福建省肿瘤医院活检或手术切除的53 例宫颈癌组织和相应的癌旁组织标本,免疫组化法检测SOSTDC1 蛋白在宫颈癌组织及相应癌旁组织中的表达,qPCR 法检测正常宫颈细胞、宫颈癌细胞中SOSTDC1 mRNA 表达;将SOSTDC1 过表达慢病毒（OE-sostdc1）和对照空病毒（NC）感染宫颈癌细胞SiHa 及CaSki,将其分为SiHa-OE-sostdc1、SiHa-NC、CaSki-OE-sostdc1、CaSki-NC 组,采用WST-1法、细胞集落形成实验、Transwell 实验和WB法检测转染各组SiHa 及CaSki 细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力和BMP、Wnt/β-catenin 信号途径相关蛋白及上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白的表达。用DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂2''-脱氧胞苷（5''-Aza-CdR）处理宫颈癌细胞后采用qPCR和WB法检测SOSTDC1 mRNA及蛋白的表达变化,用甲基化特异性PCR（MSP）检测5 例配对宫颈癌组织与癌旁组织中SOSTDC1 基因启动子区甲基化水平,同时qPCR 检测其SOSTDC1 mRNA水平。结果：与癌旁组织比较,SOSTDC1蛋白在宫颈癌组织中呈低表达（P<0.01）,且与淋巴结转移与FIGO分期有关联（均P<0.05）;与正常宫颈HUCEC细胞比较,SOSTDC1 mRNA 在宫颈癌C33A、HeLa、SiHa、CaSki 细胞中均呈低表达（均P<0.01）。过表达SOSTDC1显著抑制SiHa 及CaSki 细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.05）。WB法结果检测显示,过表达SOSTDC1 显著抑制 SiHa 及 CaSki 细胞中磷酸化 Smad、Dvl2/3、β -catenin、VIM、N-cadherin、Snail 蛋白的表达（均P<0.05）,5''-Aza-CdR 处理后的SiHa 及CaSki 细胞中SOSTDC1 mRNA和蛋白水平均显著增加（均P<0.05）,MSP检测结果显示,相较于癌旁组织,宫颈癌组织中SOSTDC1基因启动子区呈高度甲基化,且SOSTDC1 mRNA水平降低（P<0.01）。结论：SOSTDC1在宫颈癌组织中呈低表达且与肿瘤的恶性进展关联,其表达下调与其基因启动子区高度甲基化有关,过表达SOSTDC1 可能通过阻断BMP及Wnt/β-catenin信号通路从而抑制SiHa、CaSki细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

蛋白指纹图谱在原发性肝癌中医辨证分型应用的初步研究

目的应用表面加强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）检测肝细胞性肝癌患者血清蛋白质指纹图谱,筛选特异性候选标志物。方法应用SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术检测56例肝郁气滞证和55例肝胆湿热证肝癌患者血清,获得弱阳子交换型蛋白质芯片（CM10）蛋白表达图谱,用Marker Wizard软件分析差异蛋白并经数据库搜索初步鉴定。结果应用CM10在肝郁气滞证和肝胆湿热证肝癌血清中检测到在不同质荷比（M/Z）有2个差异蛋白质峰8 576 Da、8 780 Da,其蛋白质含量有显著性差异（P〈0.05）。经蛋白质数据库搜索,与这2种差异蛋白质分子量最接近的蛋白质分别为细胞色素C6和细胞色素C氧化酶合成因子5。结论应用SEIDI-T0F-MS可以筛选不同中医证型肝癌患者血清特异性生物标志物,检测到的2个差异蛋白质可能是鉴别肝郁气滞型与肝胆湿热型的血清生物学指标。     

IL-15对CIK细胞的NKG2D表达及杀伤活性的影响

目的探索IL-15对CIK细胞NKG2D表达及对肿瘤细胞体外杀伤活性的影响。方法以常规培养的CIK细胞(常规组)为对照,流式细胞术(FCM)检测常规培养体系中加入IL-15后CIK细胞(IL-15组)的NKG2D表达情况;MTT法检测IL-15组及封闭NKG2D受体的CIK细胞对MDA-MB-231、SKBr-3等癌细胞的杀伤活性。结果①培养后的各个时段,IL-15组CIK细胞中T淋巴细胞亚群、CD3+CD56+细胞及总CIK细胞群的NKG2D表达水平高于常规组,两组的差异有统计学意义(P<0.05)。②培养14、21d的IL-15组CIK细胞对MDA-MB-231和SKBr-3的杀伤活性明显高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。③NKG2D单抗可以下调CIK细胞对MDA-MB-231细胞的杀伤效应,而对SKBr-3细胞的杀伤没有明显影响。结论 IL-15可以增加CIK细胞NKG2D的表达水平并提高对肿瘤细胞的杀伤活性,NKG2D途径是CIK细胞杀伤肿瘤细胞的重要机制之一。     

应用SELDI-TOF-MS技术分析不同中医证型肝癌血清标志物的研究

目的:应用表面加强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)检测不同中医证型肝癌患者血清蛋白质指纹图谱,筛选特异性相关血清生物学标志物。方法:应用SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术检测5种中医证型(气滞证、脾虚证、湿热证、血瘀证、阴虚证)肝癌患者血清,获得CM10蛋白质芯片蛋白表达图谱,用Marker Wizard软件分析差异蛋白并经数据库搜索初步鉴定。结果:应用弱阳离子交换芯片(CM10)在不同中医证型肝癌血清中检测到在不同质荷比(M/Z)差异蛋白质峰,气滞证组M/Z为4182Da、6589Da及湿热证组M/Z为5710Da的血清蛋白质峰下调,脾虚证组M/Z为5816Da、血瘀证组M/Z为4297Da、阴虚证组M/Z为6992Da的血清蛋白质峰上调,上述蛋白质含量差异均有统计学意义(P0.01)。结论:应用SEIDI-T0F-MS可以筛选不同中医证型肝癌患者血清特异性生物标志物,检测到的差异蛋白质可能是鉴别肝癌不同中医证型的血清生物学指标。