Akt抑制剂鱼藤素对膀胱癌T-24细胞化疗敏感性的影响

2010年美国癌症学会公布了美国癌症的最新统计数据,男性膀胧癌的发病率占全身肿瘤的7%,居第四位,死亡率占全身肿瘤的3%,居第九位;女性膀胱癌的发病率占全身肿瘤的2.4%,死亡率占全身肿瘤的1.58%.而在我国,膀胱癌是泌尿外科最常见的肿瘤,占全部恶性肿瘤的3.2%.     

siRNA抑制精胺氧化酶的表达可降低人A549肺癌细胞对多胺类似物CPENSpm的敏感性

目的研究精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)基因表达抑制对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响。方法用siRNA技术获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR法和酶活性分析法用于鉴定SMO基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA降解分析和流式细胞/亚凋亡峰分析检测细胞凋亡状况。结果成功获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株。用SMO-siRNA质粒转染的细胞中,SMO mRNA和酶活性的基础水平分别降低53%和14%。用10μmol·L-1 CPENSpm处理对照细胞24h可使SMO mRNA和酶活性分别升高10倍和20倍,但在SMO-siRNA质粒转染的细胞中,这种药物对SMO的表达诱导被抑制。细胞增殖实验发现,SMO表达抑制的细胞对CPENSpm(0～20μmol·L-1)的药物敏感性低于对照细胞。细胞凋亡分析发现,与对照细胞相比,CPENSpm诱导SMO表达,抑制细胞发生细胞凋亡的能力明显减弱。结论CPENSpm诱导肿瘤细胞内SMO高表达可能是其抗癌药理活性的分子基础之一。     

子宫颈癌相关抑癌基因的研究新进展

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,严重威胁到女性的健康与生命.宫颈癌的发病是一个多基因、多步骤的结果,其中抑癌基因功能的丧失和癌基因的表达是其细胞癌变的分子基础.     

新生儿骨密度及其影响因素分析

本文采用一般基层医疗单位均可能具备的单光子骨密度仪测定了１１０例正常孕母尺桡骨及其新生儿的胫腓骨密度，同时还测定了部分早产儿的骨密度，对母孕期营养供给，补钙，日晒，运动等对其新生儿新生儿骨密度的影响也进行了多因素分析，结果表明早产，双胎儿骨密度值明显低于足月正常新生儿，母孕期未加服钙剂者母亲的尺桡骨骨密度值明显低于服用钙剂者，她们所生新生儿的骨密度亦明显降低，多因素逐步回归分析也发现母孕期的营养供     

β—极低密度脂蛋白

动脉粥样硬化(AS)是威协人类健康和生命的主要疾病之一,AS发病的重要机制之一是血浆脂蛋白的代谢紊乱。近年来的研发现:β-极低密度脂蛋白(β-VLDL)是致AS性的异常血浆脂蛋白,主要出现在遗传性Ⅲ型高脂蛋白血症患者或高脂高胆固醇(ch)膳食后的血浆中。对β-VLDL的性质及其致AS作用的研究,为探讨AS的病因及防治开辟了新途径。一.β-极低密度脂蛋白的理化性质及其代谢     

小鼠钙网蛋白的克隆与原核表达

目的:克隆小鼠钙网蛋白(CRT)并在E.coli中原核表达和纯化.方法:采用RT-PCR法从昆明鼠肝总RNA中克隆小鼠钙CRT cDNA,构建CRT原核表达质粒(pET-15b/CRT)并转化E. coli的Rossetta(DE3)菌株.IPTG诱导后,表达蛋白在变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化,然后透析复性.分别用SDS-PAGE和Westem blot法鉴定CRT的表达和纯化.结果:从昆明鼠肝总RNA中成功克隆获得小鼠CRTcDNA,该cDNA序列被成功克隆入pET-15b原核表达载体.DNA测序表明,重组质粒pET-15b/CRT构建正确.转化pET-15b/CRT的E.coli,Rossetta(DE3)能够诱导性表达重组小鼠CRT蛋白,该蛋白可经Ni-NTA树脂亲和层析高度纯化.结论:成功克隆昆明小鼠CRT cDNA并建立了小鼠CRT原核表达和纯化的实验方法,为后续的CRT蛋白功能研究奠定了基础.     

多胺类似物CHEN，CPEN和BENS对Hela宫颈癌细胞生长的影响*

［摘要］　目的：探讨多胺类似物CHEN，CPEN和BENS对宫颈癌细胞株Hela生长的影响。方法：MTT法检测细胞的生长状况；亚凋亡峰流式细胞分析法及DNA片段化分析法检测细胞凋亡；化学分析法测定精胺氧化酶（SMO）活性。结果：3种多胺类似物均可显著抑制Hela癌细胞增殖，抑制作用随药物浓度加大而增加，其细胞毒性大小依次为CHEN>CPEN>BENS。细胞凋亡分析发现，CHEN，CPEN和BENS可诱导Hela细胞程序性凋亡，导致凋亡峰出现和明显的DNA片段化。用10 μmol•L-1 CHEN，CPEN和BENS处理Hela细胞24 h可显著性抑制精胺氧化酶活性。结论：CHEN，CPEN和BENS通过诱导细胞凋亡而抑制Hela癌细胞生长，其诱导凋亡的作用与精胺氧化酶活性无关。     

花椒体内外抗肿瘤作用及其机制的初步研究

目的 研究花椒挥发油体内外抗小鼠H22肝癌细胞作用及其免疫学机制.方法 花椒挥发油按不同时间(24,48,72h)及不同浓度(0.5～8 ms/ml)分别处理H22细胞,MTS法分析细胞的增殖速度,用流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期.建立H22荷瘤小鼠模型,观察小鼠肿瘤的生长情况,计算肿瘤生长抑制率;ELISA法检测花椒挥发油处理后小鼠血清中IL-2和IL-12的活性.结果 4 mg/ml花椒挥发油处理H22细胞72 h可显著地抑制H22细胞增殖,1 mg/ml花椒挥发油处理H22细胞72 h即可导致亚凋亡峰的出现,且G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,花椒挥发油对小鼠实体瘤生长具有显著抑制作用,但不能提高荷瘤小鼠血清中IL-2和IL-12的水平.结论 花椒挥发油可抑制H22细胞增殖并激发细胞凋亡,但不能通过提高机体的免疫功能发挥抗肿瘤作用.     

脂蛋白脂肪酶遗传缺陷的分子生物学基础

脂蛋白脂肪酶缺陷是基因突变导致酶功能异常所致的遗传性疾病。本文综述了该酶的分子特征，基因构成，基因突变对酶结构与功能的影响等方面的研究进展。     

重组天花粉蛋白的原核表达、纯化及其对 宫颈癌HeLa细胞增殖的影响

 目的克隆天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)的cDNA, 构建原核表达TCS的质粒,从表达菌中分离纯化重组天花粉蛋白（rTCS）后,分析rTCS和nTCS（天然天花粉蛋白）对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。方法RT-PCR技术从新鲜栝楼叶片中扩增TCS cDNA,测序鉴定后克隆入表达载体pET-28a(+) 并转化入BL21(DE3)细胞。IPTG诱导表达后,用金属镍螯合层析法纯化rTCS蛋白, MTT法分别检测rTCS 和nTCS处理24、48和72h对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。结果1. 成功克隆获得TCS的cDNA并构建 pET-28a (+)-TCS原核表达质粒;该cDNA的碱基序列与基因库中注册的序列99.4%同源;2.在BL21(DE3)菌中,IPTG可诱导重组TCS蛋白表达,且表达的TCS主要以包含体的形式存在。在一定的时间范围内（0～8h）;rTCS的表达水平与诱导时间正相关;3.用Ni-NTA树脂亲和层析法,从诱导表达菌中获得了高纯度的重组TCS蛋白;4. MTT法分析表明,rTCS和nTCS均对HeLa宫颈癌细胞的生长具有抑制作用。在0～100μg/ml的浓度范围内,随着药物浓度的增加及作用时间的延长,rTCS和nTCS对HeLa细胞的生长抑制率逐渐增大,且各组之间差异有统计学意义（P﹤0.05）;rTCS的IC₅₀小于nTCS。结论本实验克隆了TCS的cDNA,构建了表达载体pET-28a (+)-TCS,并成功地在E.coli中原核表达和纯化出重组TCS蛋白,发现纯化的rTCS和nTCS对HeLa细胞的生长都有明显抑制作用,并且rTCS的细胞毒性小于nTCS。