磷酸二酯酶5的短发夹RNA对肌细胞纤维化的作用抑制研究

目的通过短发夹RNA(shRNA)延长对磷酸二酯酶5(PDE5)的抑制作用,探索shRNA-PDE5对细胞存活率的影响以及对心肌梗死后心功能及心室重构的作用及其机制。方法(1)细胞实验:分离SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),将Ad-shRNA-PDE5和Ad-Null分别感染体外培养的MSCs,嘌呤霉素筛选稳定表达它们的细胞株,分为shPDE5组和空白对照载体(Ad-Null)组,另设正常组。缺口末端标记法染色检测各组缺氧缺糖(OGD)诱导的稳转MSCs细胞凋亡情况。(2)动物实验:通过结扎左冠状动脉前降支方法建立雄性SD大鼠心肌梗死模型。按照体重将大鼠随机分成6组:假手术组、模型组、对照组、第1转染组、第2转染组和第3转染组,在结扎前降支后,立即在心肌梗死区及周边区4个点各注射经不同处理的MSCs细胞。用蛋白质印迹法检测大鼠心肌中转化生长因子-β(TGF-β)和成纤维细胞生长因子2(FGF2)的蛋白表达水平(光密度值);Masson染色检测心肌梗死区及周边区组织的纤维化情况。结果(1)shPDE5组、Ad-Null组和正常组的凋亡细胞数分别为(6.00±1.00),(14.33±1.52)和(5.33±1.52)个,shPDE5组与Ad-Null组比较,凋亡细胞数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)假手术组、模型组、对照组、第1转染组、第2转染组和第3转染组的FGF2蛋白表达水平分别为0.11±0.02,0.22±0.05,0.27±0.08,0.28±0.04,0.33±0.05和0.50±0.03;这6组的TGF-β蛋白表达水平分别为0.18±0.02,0.91±0.03,0.72±0.01,0.72±0.03,0.48±0.02和0.27±0.09。第2转染组、第3转染组与假手术组、模型组、对照组和第1转染组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组、第1转染组、第2转染组和第3转染组与模型组比较,大鼠梗死周边区心肌组织细胞纤维化程度依次减弱。结论shRNA-PDE5可通过减少细胞凋亡,调节相关因子的表达,抑制心肌细胞纤维化,从而改善心功能。     

人源pEGFP-C1-p38γ真核表达质粒的构建及其功能研究

目的 构建人源pEGFP-C1-p38γ表达质粒,并观察其对乙醇刺激的L0-2肝细胞的增殖和凋亡及炎症因子分泌的影响.方法 在人源L0-2肝细胞中提取RNA并且逆转录为cDNA,同时将引物稀释到10μmol/L,其余作为储液备用.采用PCR技术扩增p38γ并鉴定,使用AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒进行PCR产物的纯化回收,再对PCR产物及载体进行酶切回收,酶切片段连接后,进行连接产物的转化、挑菌、摇菌、质粒小抽.酶切鉴定后,进行测序鉴定.将构建好的质粒转染至乙醇刺激的人源L0-2细胞中,通过MTT实验和流式细胞术检测对其增殖和凋亡的影响,并用Western blot技术检测炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在L0-2肝细胞中的表达.结果 测序显示pEGFP-C1-p38γ真核表达质粒构建成功.同时,MTT实验显示,乙醇刺激L0-2细胞24 h后p38γ过表达组细胞的增殖率为(0.42±0.08)％,低于转染空载体的对照组(0.60±0.03)％;流式细胞术检测结果 显示,p38γ过表达组细胞的凋亡率为(17.46±1.52)％,高于转染空载体质粒的对照组(13.18±1.34)％;Western blot检测显示p38γ过表达组中的IL-6和TNF-α表达较对照组升高.结论 p38γ能够抑制乙醇刺激的L0-2肝细胞的增殖,并促进其凋亡.同时,p38γ能够促进乙醇刺激后的L0-2肝细胞中IL-6和TNF-α的表达.     

2001至2011年中国西部农村地区医院急性心肌梗死患者早期阿司匹林使用趋势

目的 评价2001至2011年中国西部农村地区医院急性心肌梗死(AMI)患者住院早期阿司匹林的使用率、变化趋势及影响因素。 方法 采用两阶段随机抽样设计获取2001、2006、2011年西部农村地区医院AMI患者具有代表性的样本。分析3个研究年份患者水平住院早期阿司匹林加权使用率及变化趋势,以代表西部农村地区医院AMI住院患者的整体情况。分析医院水平阿司匹林使用率时排除入选人数＜5的医院,以期反应医院的整体水平。采用Logistic回归方法分析影响阿司匹林使用的相关因素。 结果 共32家西部农村地区医院的1006例AMI患者纳入研究,患者中位年龄为66岁,女性占26.9%。2001至2011年,阿司匹林早期加权使用率有明显改善(2001年69.9%、2006年84.9%和2011年88.8%,趋势P值＜0.0001),而且从医院水平看,早期阿司匹林服药率亦呈逐年上升趋势。然而,即使在2011年,仍有2家医院(约占10%)早期阿司匹林使用率低于80%(分别为55.6%和69.2%)。多因素Logistic分析显示,入院时合并胸部不适(OR 4.6,95%CI 2.7～7.8)和有PCI能力医院(OR 3.2,95%CI 1.5～6.7)的患者更倾向于使用阿司匹林,而非ST段抬高型心肌梗死的患者较少使用阿司匹林(OR 0.5,95%CI 0.3～0.8)。 结论 从2001年至2011年,我国西部农村地区医院AMI住院患者中早期阿司匹林使用率呈明显上升趋势,但一些医院和某些特征人群仍有较大的改善空间。     

HPLC法测定瑞香狼毒中香豆素类三种成分含量

目的:建立BP-HPLC法同时测定中药瑞香狼毒中三种香豆素类成分瑞香素,伞形花内酯,东莨菪内酯的含量测定方法.方法:采用反相高效液相色谱法,选用AgiLent EcLipse XDB-C18(4.6 mm×150mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈(A)-1%冰乙酸(B),进行梯度洗脱;检测波长为:327 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃.结果:瑞香素平均回收率为98.07%,RSD为1.88%;伞形花内酯平均回收率为98.82%,RSD为1.98%;东莨菪内酯平均回收率为97.42%,BSD为2.37%.结论:本法灵敏度高,重现性好,可用于中药瑞香狼毒的质量控制.     

CDKN2BAS基因多态性与川崎病的关联性研究

目的 探讨CDKN2BAS基因rs1333049位点及rs4977574位点多态性与川崎病及并发冠状动脉损伤(CAL)的关联性.方法 选取100例川崎病患儿作为研究组,100例健康婴幼儿作为对照组,提取外周血DNA并进行基因测序,分析CDKN2BAS基因的rs1333049位点及rs4977574位点的多态性.结果 研...     

HPLC-ESI-MS/MS同时测定四神丸中9种有效成分

目的建立了HPLC-ESI-MS/MS法同时测定四神丸中五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、补骨脂素、异补骨脂素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱9种有效成分的分析方法。方法 HPLC采用色谱柱Agilent Zorbax Eclipse Plus C18柱(100 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量0.4 m L/min,进样量20μL;质谱采用电喷雾离子源、正离子模式(ESI+),通过多反应监测(MRM)同时对四神丸中的9种有效成分进行定量分析。结果四神丸中9种有效成分五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、补骨脂素、异补骨脂素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的线性范围分别为8.50~850.00 ng/m L(r=0.999 7)、1.32~132.00 ng/m L(r=0.997 4)、9.60~960.00 ng/m L(r=0.999 8)、12.00~1200.00 ng/m L(r=0.999 3)、11.50~1 150.00 ng/m L(r=0.997 9)、21.70~2 170.00 ng/m L(r=0.999 7)、23.80~2 380.00 ng/m L(r=0.999 6)、10.70~1 070.00 ng/m L(r=0.999 5)、8.54~854.00 ng/m L(r=0.998 0),平均加样回收率分别为98.3%、100.3%、99.2%、100.4%、99.1%、97.7%、99.0%、98.9%、100.3%,RSD值分别为2.21%、1.78%、2.19%、2.23%、2.18%、3.03%、2.51%、2.72%、2.10%。8批四神丸样品中9种有效成分的质量分数分别为67.6~425.6、0~131.5、2.1~258.0、0~71.2、23.2~678.8、806.4~1 310.8、718.5~1293.7、11.5~123.2、10.9~62.4μg/g。结论所建立的分析方法简单、灵敏度高、专属性好,可应用于不同厂家不同生产批次的四神丸中有效成分的测定及质量控制。     

吴银根运用膏方治疗支气管扩张咯血的经验

支气管扩张是呼吸系统常见感染性疾病之一,主要症状为慢性咳嗽、咳大量脓痰、反复咯血。本病尤其是出现咯血者,发病急骤,又易反复,临床治疗颇感棘手。膏方以滋补见长,且服用较汤剂方便,在慢性呼吸系统疾病,尤其是支扩咯血的防治中显示了较好疗效。笔者长期跟随上海市名中医吴银根教授门诊,每见其应用膏方调治支扩咯血,颇为得心应手。吴教授认为支扩咯血一证之所以难治,乃因标本同病,标在热伤肺络,而本在肺肾阴虚,治疗必须扶正祛邪,标本兼顾。若单治本,或单治标,均难以收功。兹介绍其运用膏方辨治支气管扩张咯血经     

六安市某高职院校学生健康饮水知识调查

目的了解高职院校学生饮水知识的知晓情况,为在学生中开展健康饮水知识教育提供科学依据。方法采用分层整群抽样的方法,抽取皖西卫生职业学院中专、大专共计537名学生,采取自行设计的问卷进行饮水相关知识调查。结果调查对象中仅有9.9%的学生知道每日最少饮水量为1 200 mL;8%的调查对象不知道白开水是最健康的饮品;仅有26.1%的学生知道饮水不足会引起认知功能发生改变;44.9%的学生认为感到口渴时才饮水最利于健康;对于一次饮水量200 mL为宜,调查对象的知晓率为50.1%。高职院校学生总体健康饮水知识的知晓率,男生低于女生、中专生低于大专生、独生子女低于非独生子女。结论调查对象饮水知识不全面,需采取适宜措施,有针对性开展健康饮水知识教育,提高其健康饮水意识。     

HPLC法测定复方制剂中苦杏仁苷含量的研究

目的:建立复方制剂中苦杏仁苷HPLC定量法。方法:采用Hypersil C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),甲醇-乙腈-水-冰醋酸(1:1:16:0.02)为流动相,流速为0.8mL·min~(-1),检测波长210 nm,柱温40℃。以HPLC法测定了麻杏石甘汤、桂枝茯苓丸等6种自制模型制剂和橘红丸、桂枝茯苓丸胶囊等3种市售商品制剂中苦杏仁苷的含量。结果:苦杏仁苷线性范围:0.1104～1.840mg·mL~(-1)(r=0.9998);平均回收率在96.6％～103.2％;RSD在0.9％～2.6％(n=3),且操作简便、快速、适用范围广。结论:本法作为复方制剂中苦杏仁苷含量测定法是可行的。     

长期睡眠剥夺下调AMPK/SIRT1/PGC-1α通路引起小鼠脂代谢紊乱

目的探讨长期睡眠剥夺对小鼠肝组织腺苷酸激活蛋白激酶(adenosine 5’-monophosphateactivated protein kinase,AMPK)/沉默信息调节因子1(silent information regulation1,SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator 1α,PGC-1α)系统的影响。方法2月龄C57BL/6J小鼠16只随机分为睡眠剥夺组和正常对照组,睡眠剥夺组利用睡眠剥夺仪每天剥夺睡眠20 h,每周剥夺6 d,连续10周。正常对照组在相同实验条件下自由睡眠10周。每周测量一次体重,10周后进行小鼠体成分测定,并采集血液、肝脏和脂肪组织样本,检测血清褪黑素水平、肝组织AMPKα、SIRT1、PGC-1α及胆固醇调节元件结合蛋白1C(sterol regulatory element-binding protein 1C,SREBP-1C)蛋白表达水平,以及脂肪组织中脂肪合成关键酶脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、乙酰辅酶A羧化酶1(acetyl CoA carbosylase 1,ACC1)表达水平。结果建模结束后,睡眠剥夺组小鼠体重显著高于对照组(F=10.955,P=0.006),且从第6周末开始,睡眠剥夺组小鼠体重明显高于对照组(F=8.535,P=0.012),并且睡眠剥夺组小鼠体脂量[(14.58±1.70)%]高于对照组[(11.24±1.64)%](t=4.007,P=0.001),血清褪黑素浓度[(2.33±0.53)ng/ml]低于对照组[(2.87±0.23)ng/ml](t=2.643,P=0.019),AMPK通路中的AMPKα(t=7.134,P<0.001)、SIRT1(t=7.531,P<0.001)、PGC-1α(t=11.537,P<0.001)表达水平降低,AMPK/SIRT1/PGC-1α通路下调。而SREBP-1C表达水平升高,差异有统计学意义(t=-4.496,P=0.001)。同时睡眠剥夺小鼠脂肪组织中FAS(t=-4.375,P=0.001)、ACC1表达水平均升高(t=-4.072,P=0.001)。结论长期睡眠剥夺可致褪黑素受体介导的AMPK/SIRT1/PGC-1α通路抑制,并且脂肪合成相关基因表达增强,引起能量代谢特别是脂代谢稳态失调和体脂增加。