分离小鼠腹水中抗HBs/a单克隆抗体杂交瘤细胞制备小鼠腹水

探讨利用从小鼠腹水中分离获得的单克隆抗体杂交瘤细胞,大量制备小鼠单克隆抗体腹水的方法收集已接种单克隆抗体杂交瘤细胞的小鼠腹水,用淋巴细胞分离液离心分离腹水中的杂交瘤细胞;再将此分离出的杂交瘤细胞,注入其他小鼠腹腔又制得腹水。每只小鼠分离得到的杂交瘤细胞可供5只小鼠腹腔注射,平均每只小鼠产腹水3.97ml。此法可规模制备大量高效价的单克隆抗体腹水。     

抗癌胚抗原单抗与生物素及链霉亲和素偶联物的制备及性能鉴定

目的　 研究抗癌胚抗原(CEA)单抗与生物素及链霉亲和素(streptavidin, SA)偶联物的制备方法。方法　 将CEA单抗按抗体与生物素活化酯物质的量之比为1:15～1:50进行生物素化。抗CEA单抗与SA的偶联采用3-（2-吡啶二巯基丙酸）-N-琥珀酰亚胺酯（SPDP）化学偶联法制备。抗CEA单抗偶联物的生物活性及免疫活性分别采用间接ELISA方法和放射免疫分析法进行测定。 结果　生物素化单抗每分子抗体中约偶联3分子生物素,具有良好的SA结合活性,经SDS-PAGE电泳证实为单一蛋白条带,仍保留95%的免疫活性。SA每分子中含有1～2个巯基,而抗CEA单抗每分子中含有2～3个3-（2-吡啶二巯基丙酸）-N-琥珀酰亚胺酯间接ELISA方法证实偶联物具有良好的生物素结合活性, SDS-PAGE电泳显示单抗-SA偶联物相对分子质量为210 000左右,仍保留着原单抗活性的70%左右。结论　所制备的两类抗CEA单抗偶联物基本保持完整的特异性结合肿瘤CEA的性质,可为进一步的预定位显像和治疗应用提供可靠的靶向载体。     

凝胶色谱法半制备级纯化单克隆抗体

作者采用ＳｅＰｌｌａｃｙｌＳ－２００凝胶色谱柱，在快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立了肝癌相关抗原单克隆抗体半制各级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水经４０％饱和硫酸铵盐析粗分离后，再用凝胶色谱纯化，一次上样量相当于５～１０ｍｌ腹水，可得纯化ＭｃＡｂ３０～６０ｍｇ，得率为６～６．５ｍｇ／ｍｌ腹水，回收率为６３％，一次色谱纯化周期２ｈ，整个分离纬化可在３ｈ内完成。经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和ＤＥＡＥ离子交换色谱法检测ＭｃＡｂ纯度大于８０％，ＡＢＣ染色法测定ＭｃＡｂ活性为，１：４００００（１．５６×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ），是一般实验室纯化ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的实用方法。     

72例多发性骨髓瘤单克隆蛋白分析

Serum and urinary monoclonal proteins (M protein) were measured in 72 cases of multiple myeloma (MM) using rate nephelometry. In IgG and IgA types of MM, the level of immunoglobulin (Ig) corresponding to the malignant isotype was significantly higher and that of Ig uncorresponding to the malignant isotype lower than the normal level. The light chain corresponding to the malignant isotype in serum was increased and the light chain uncorresponding to that in serum was decreased either kappa-IgG, IgA types or lambda-IgG, IgA types. Either kappa-LC or lambda-LC type of MM, the serum light chain corresponding to the malignant isotype was in the normal range and uncorresponding to that was decreased, and the corresponding light chain in urine was significantly elevated. Kappa/lambda ratio in serum and urine was all significantly abnormal in IgG, IgA, and LC types of MM. Our data suggest that any quota among kappa light chain > 20 g.L-1 or < 5 g.L-1, lambda light chain > 10 g.L-1 or < 2 g.L-1 in serum and kappa/lambda ratio > 5 or < 0.75 in serum and urine has an important value for diagnosing MM.     

活化脐血T细胞和NK细胞的抗原及细胞因子表达研究

目的 :比较γIL - 2及抗 CD3m c Ab γIL - 2对脐血单个核细胞 (MNC)的免疫表型及细胞因子的影响。方法 :采用间接玫瑰花结法实验测定 2 3例脐血 MNC表面的分化抗原 ,EL ISA双抗夹心法测定肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)、白介素 - 6 (IL - 6 )、白介素 - 8(IL - 8)。结果 :经γIL - 2及抗 CD3mc Ab γIL - 2激活的脐血 MNC其分化抗原发生明显变化。 1、两组与未活化相比 :CD3 、CD8 、CD16 、CD5 6 、CD19 、CD2 3 、HL A- DR↑ ,其表达 CD2 5亦均增加 ,但抗 CD3mc Ab γIL- 2激活组 >γIL- 2组 (P<0 .0 1) ,CD45 RA 均明显下降 ,但两组差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,CD34 无明显改变。 2、经抗 CD3m c Ab γIL- 2激活的 MNC,细胞集落增加 ,但 γIL- 2组无此作用。 3、细胞因子的改变 ,无论经 γIL- 2还是抗 CD3m c Ab γIL- 2激活的脐血 MNC上清液 ,其 IL- 6增高 ,但差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,TNF- α,IL- 8亦明显增高 ,但抗 CD3m c Ab组 >γIL- 2组 (P<0 .0 1)。结论 :脐血抗 CD3激活的杀伤细胞 (CD3AK)比 γIL- 2激活的L AK毒性作用更强 ,更有利于杀伤肿瘤细胞。     

卵巢癌荷瘤裸鼠~(99m)TcCOC183B_2放射免疫显像结果分析

目的 :研究99mTc标记抗卵巢上皮癌单克隆抗体COC183B2 在荷瘤裸鼠体内的分布 ,并进行放射免疫显像 ,为临床应用提供依据。方法 :COC183B2 用预亚锡法标记后 ,经腹腔注入荷瘤裸鼠体内 ,在 2 4小时进行放射免疫显像 ,并观察裸鼠体内的生物学分布。结果 :与对照组相比 ,标记抗体在肿瘤组织中出现了特异性浓聚。获得清晰的显像 ,T/NT比值在 0 99～ 5 99之间 ,T/B比值为 1 19。结论 :说明COC183B2 可特异地与卵巢癌结合 ,具有导向卵巢癌的作用     

抗人胸腺细胞单克隆抗体2G_2B_2和2G_2C_2的制备及特性鉴定

用杂交瘤技术制备２株单克隆抗体（单抗）２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２。经研究发现,它们主要与胸腺细胞、脐血及ＰＨＡ激活的外周血单个核细胞等反应;免疫组化显示其主要作用于皮质胸腺细胞;与造血系统中分化早期的瘤细胞、骨髓瘤细胞等反应阳性率较高。生物学特性鉴定结果提示,单抗均属免疫球蛋白ＩｇＧ１亚类,腹水效价达１：１２８０００,所识别抗原分子量为４５／４６ＫＤａ,无抗原调变作用。故２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２是类似ＯＫＴ１０的抗ＣＤ３８单抗,但竞争抑制结果表明三者分别作用于不同的抗原决定簇,即２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２是两个抗ＣＤ３８新单抗。     

重组汉坦病毒核壳蛋白的制备及其单克隆抗体的研制

将ＰＣＲ扩增的ＨＴＶ７６－１１８ＲＮＡ小片段的ｃＤＮＡ克隆插入到载体ｐＤＳ５６／ＲＢＳⅡ－（Ｏ）－６Ｈｉｓ中,通过ＩＰＴＧ诱导表达以及镍螯合层析纯化重组ＮＰ,经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫转印和ＥＬＩＳＡ方法分析其蛋白特性,证实该重组ＮＰ与毒粒ＮＰ相同,均为４９．６ｋｕ,能与肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）患者血清产生特异性反应。以此重组ＮＰ作为抗原制备抗ＮＰ单克隆抗体,获得两株持续稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用抗ＮＰＭｃＡｂ建立检测ＩｇＭ抗体的ＥＬＩＳＡ捕获法。证实纯化重组ＮＰ作为抗原,避免了组织培养病毒的感染性和非特异性以及难以标准化的缺点。所建立的ＥＬＩＳＡ捕获法检测ＨＦＲＳ患者血清中ＩｇＭ抗体的方法特异性强、敏感性高,可作为ＨＦＲＳ的早期诊断试剂