FAK通过和EGFR的相互作用调节MAPK和Akt之间的相对平衡

目的研究上皮生长因子受体和FAK的相互作用以及对下游信号的影响。方法建立聚集粘连激酶(FAK)缺失突变和绿色荧光蛋白(GFP)融合基因del1-693FAK-GFP、del1-100FAK-GFP和FAK-GFP稳定表达细胞系。结果同野生型FAK-GFP相比,N-端1-100氨基酸残基的缺失突变体,缺失1-693氨基酸残基的突变体结合在黏附点的能力被完全抑制。应用等电聚焦和SDS-PAGE双向电泳证明,EGF和纤维连接蛋白诱导FAK磷酸化的位点不同,进一步证实del1-693FAK-GFP、del1-100FAK-GFP,抑制MAPK的磷酸化,增强Akt的磷酸化;而FAK-GFP增强MAPK磷酸化,抑制Akt磷酸化。结论FAK通过和EGFR的相互作用调节MAPK和Akt之间的相对平衡。     

西安市食管癌的分子流行病学研究

目的　探讨西安地区食管癌与 p5 3和 H- Ras高表达的关系 .方法　应用分子流行病学研究方法 ,调查分析了西安地区 6 1例病例、43例对照的基础资料并检测组织中 p5 3和H- Ras高表达情况 .结果　病例组 p5 3和 H- Ras的高表达率(分别为 80 .3% ,41.0 % )均高于对照组 (30 .2 % ,16 .3% ,P<0 .0 1) .p5 3高表达的危险因素是 H- Ras高表达与肿瘤家族史且二者具有协同作用 .结论　 p5 3和 H- Ras高表达是西安地区食管癌重要的生物学标志     

人S100A6-GST融合蛋白的原核表达和纯化

目的:制备人S100A6-GST融合蛋白,为研究人S100A6((hS100A6)蛋白的功能奠定基础.方法:从pHAHA-hS100A6中双酶切获取hS100A6基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-moluc-hS100A6,转化BL21后,IPTG诱导重组菌表达hS100A6蛋白,SDS-PAGE及Western Blot鉴定表达产物,Glutathion-Sepharose 4B球珠分离纯化.结果:重组菌株表达出与理论预测值相符的一个约36ku的hS100A6融合蛋白,纯化后的融合蛋白的产量为3mg/L菌液,纯度约92%.结论:成功构建了hS100A6-GST原核表达质粒,在大肠杆菌中表达纯化后得到较高浓度的hS100A6-GST融合蛋白,为hS100A6蛋白功能的研究打下了基础.     

快速检测IL-28B rs12979860基因多态性双色荧光PCR法的建立

目的建立一种适合临床常规检测白细胞介素28B(interleukin-28B,IL-28B)rs12979860基因多态性的快速实验方法。方法随机收集我院223例丙型肝炎住院患者外周血标本,设计针对IL-28B rs12979860基因多态性位点的特异性引物和荧光探针,直接通过双色荧光PCR法检测IL-28B rs12979860基因多态性,以基因测序法进行验证,同时初步探讨IL-28B rs12979860不同基因型在本研究人群中的分布频率。结果双色荧光PCR法能很好地鉴别IL-28B rs12979860 3种基因型,与测序法结果一致率为100%。IL-28B rs12979860基因多态性中T/T、C/T和C/C基因型在本研究人群中的分布频率分别为1.79%(4/223)、23.32%(52/223)和74.89%(167/223)。结论根据IL-28B rs12979860单核苷酸多态性基因型特异性探针和引物所建立的双色荧光PCR法能快速有效地进行rs12979860基因多态性分型,方法快速、可靠,为丙型肝炎患者抗病毒个体化治疗效果的预测提供了一种有效的检测方法。     

慢性乙肝患者HBV反转录酶区新变异rtL180M+A181C+M204V的鉴定及表型耐药特点分析

目的鉴定经核苷(酸)类似物序贯治疗的慢性乙肝患者HBV反转录酶(RT)区的新变异rtA181C,并分析其表型耐药特点。方法 2010年6月解放军302医院确诊的慢性乙肝患者1例,提取血清HBV DNA,巢式PCR扩增HBVRT全基因,采用PCR产物直接双向测序结合克隆测序分析HBV RT区12个耐药相关突变位点。构建代表性克隆重组表达载体pTriEx-HBV1.1,瞬时转染人肝癌细胞系HepG2细胞,转染4h后加入不同浓度拉米夫定(LAM,终浓度为0、0.01、0.1、1、10、100μmol/L)、阿德福韦(ADV,终浓度为0、0.033、0.1、0.33、1、3.3μmol/L)、恩替卡韦(ETV,终浓度为0、0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L)和替诺福韦(TDF,终浓度为0、0.01、0.1、1、10、100μmol/L),4d后采用实时荧光定量PCR检测不同药物浓度作用下培养细胞上清中HBV DNA的复制水平并分析其表型耐药特点。结果此例慢性乙肝患者序贯接受LAM治疗36个月→ADV治疗14个月→ETV治疗29个月,而后发生病毒学突破,HBV DNA由阴性升高至1.1×106IU/ml,ALT由正常升高至235U/L。直接测序显示HBV RT基因rtL180M+A181V+M204V变异,克隆测序得到18个克隆,其中9个为rtL180M+A181V+M204V变异株,7个为rtL180M+A181C+M204V变异株,1个为rtV173L+L180M+A181V变异株,1个为野生株。病毒复制力检测结果从高到低依次为:野生株>rtV173L+L180M+A181V>rtL180M+A181C+M204V>rtL180M+A181V+M204V。表型耐药分析显示,与野生株比较,rtL180M+A181V+M204V变异株和rtV173L+L180M+A181V变异株对LAM和ADV不敏感,rtL180M+A181C+M204V变异株对LAM和ETV不敏感。结论长期核苷(酸)类似物序贯治疗可引起多重耐药;rt181位点新的变异rtA181C与ETV长期用药有关,可能是新的ETV耐药变异位点。     

关于我院《生理学实验》课程考核方法的改革及实践初探

《生理学实验》是一门重要的医学基础必修课程,其教学目标不仅是巩固和加深学生对基础理论知识的理解和掌握,更重要的是培养学生实际的动手能力、综合分析和解决问题的能力.文章介绍了贵阳中医学院中西医结合专业和医学心理学双学位专业的学生学习《生理学实验》课程之后的考核方法改革,包括建立系统的考核评分体系、制定评分细则、多种考试形式等,既考查了学生运用理论分析问题的能力,又重视学生的实际动手能力.结果表明,通过改革,既提高了学生兴趣,又提升了教学质量.     

林州市食管癌病因及其变化的一次病例对照研究

河南省林州市是我国食管癌的高发区 ,国内外研究者就其病因进行了很多研究 ,发现的暴露因素主要有 :不良的饮食习惯 ,如烫食、快食、粗食、硬性食物 ,食酸菜 ,少食新鲜蔬菜、水果或动物性食品 ,吸烟 ,食管癌家族史等。为了解目前的病因因素和变化趋势及其与宿主生物学标志 (ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ)之间的关系 ,我们自 1995年开始进行了分子流行病学研究。本文仅报告一次病例对照研究 (1995年 10月至 1996年 1月 )中危险因素宏观研究的结果。一、材料与方法1.对象选择 :(1)病例 :选自林州市肿瘤医院、林州市第一人民医院和第二人民医院、姚村…     

阿德福韦酯治疗失败的慢性乙型肝炎患者HBV反转录酶区新变异rtN236V的表型耐药特点分析

目的 鉴定1例阿德福韦酯(ADV)治疗失败的慢性乙型肝炎患者HBV反转录酶(RT)区的新变异rtN236V,并分析其表型耐药特点.方法 从1例ADV治疗失败患者的血清中提取HBV DNA,采用巢式PCR扩增HBV RT区,将PCR产物克隆到pGEM-Teasy载体,转化JM109细胞.挑选34个阳性克隆进行DNA测序并分析耐药相关突变.构建1.1倍HBV野生株和耐药株重组载体,转染人肝癌细胞系HepG2细胞.转染4h后分别加入不同浓度的拉米夫定(LAM)、ADV、恩替卡韦(ETV)和替诺福韦(TDF),转染后第4天收集细胞培养液,采用实时荧光定量PCR法检测不同药物浓度作用下细胞培养上清中HBV DNA的产量,并分析其表型耐药特点.结果 该例患者在接受ADV治疗15个月后出现病毒学突破和生化学突破,测序结果显示34个克隆中,20个(58.8％)为rtN236V变异株,11个(32.4％)为rtN236T变异株,2个(5.9％)为野生株,1个(2.9％)为rtA181V+N236V变异株.rtN236T、rtN236V和rtA181V+N236V变异株的相对病毒复制力分别为野生株的89.43％、83.60％和75.44％.表型耐药分析显示:rtN236T株、rtN236V株和rtA181V+N236V株对ADV的敏感性分别为野生株的1/4.75、1/3.10和1/5.10,但对LAM、ETV和TDF均敏感.结论 在ADV长期治疗失败的慢性乙型肝炎患者血清病毒池中鉴定了新的变异形式rtN236V,并与rtN236T和rtA181V株伴随存在,该变异降低了病毒的复制力及对ADV的敏感性,可能是一个新的ADV耐药相关变异.     

上海市某传染病专科医院护士焦虑状况及相关因素调查

目的调查传染病专科医院护士的焦虑状况及相关因素。方法采用Zung焦虑自评量表（SAS）、简易应对方式量表及自行设计的问卷对116名上海市某传染病专科医院的护士进行调查。结果116名护士的SAS总分均值与常模SAS均分比较差异有统计学意义（t=16．912,P〈0．01）。不同科室护士SAS评分比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。116名护士的SAS评分与担心差错事故（XL2）、担心职业暴露（XL3）、担心家人的歧视（XL4）、担心亲戚朋友或邻居的歧视（XL5）、与患者或其家属间的误解和冲突（XL6）有统计学意义（r分别为0．328,0．412,0．262,0．262,0．467;P〈0．01）,与积极应对无统计学意义（P〉0．05）。结论传染病专科医院护士的焦虑情况较严重,应引起管理者的重视。探寻如何减少职业暴露、差错事故,避免或帮助护士化解与患者或其家属间的误解和冲突,培养良好的积极应对方式,这些均对提高传染病专科医院护士的心理健康有益。     

MRI影像组学在脑胶质瘤分级中的价值研究

目的采用MRI影像组学方法对胶质瘤的高、低级别进行术前评估。方法纳入154例经病理证实的脑胶质瘤病人,其中WHO Ⅱ级(低级别胶质瘤)75例,WHO Ⅲ~Ⅳ级(高级别胶质瘤)79例,随机分为训练集和验证集各77例。应用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)表示训练集和验证集性能。利用影像组学标签联合病理学检测构建评估高、低级别脑胶质瘤的预测模型,并采用影像组学诺模图反应测试模型。结果采用LASSO方法在388个影像组学特征中选择3个标签特征,联合病理结果进行二分类建模。诺模图显示联合影像组学标签及病理结果构建的模型图可以显著提高诊断效能。训练集中AUC达到0.850,特异性达81.8%,敏感性为77.3%;验证集中AUC达0.836,特异性达83.3%,敏感性为77.3%。LASSO构建的模型评估决策曲线高于其他模型。结论 MRI影像组学方法可在术前帮助区分脑胶质瘤的高、低级别。