MIF基因沉默对肝癌细胞系增殖凋亡及ERK/RSK2信号通路的影响

目的探讨RNA 干扰介导的巨噬细胞移动抑制因子（MIF）基因沉默对肝癌细胞系SMMC-7721与HepG2 凋亡的影响及可能的作用机制。方法将MIF-siRNA 干扰序列转染SMMC-7721 与HepG2 细胞,以Con-siRNA序列转染的细胞作为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）及Western blot检测MIF沉默效果,CCK-8 法测定细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率。采用Western blot检测MIF 沉默后凋亡相关基因BCL-2、BAX、P53 的蛋白水平及细胞外信号调节激酶（ERK）、P90 核糖体s6 激酶2（RSK2）、糖原合成激酶3β（GSK3β）、Bad 蛋白水平及其磷酸化水平。结果沉默组细胞中MIF mRNA 及蛋白表达水平与对照组比较,差异有统计学意义（p <0.05）,沉默组低于对照组;两组细胞增殖能力比较,差异有统计学意义（p < 0.05）,MIF沉默组细胞增殖能力低于对照组;两组凋亡率比较,差异有统计学意义（p <0.05）,MIF沉默组细胞凋亡率高于对照组;两组细胞BAX、P53、BCL-2 蛋白水平比较,差异有统计学意义（p <0.05）,MIF 沉默组细胞BAX、P53 的蛋白表达水平高于对照组,而BCL-2 蛋白水平低于对照组;沉默组与对照组细胞中ERK、RSK2 及Bad 蛋白水平比较,差异均无统计学意义（p >0.05）,而沉默组与对照组细胞中GSK3β、p-GSK3β、p-ERK、p-RSK2 及p-Bad 蛋白水平比较,差异均具有统计学意义（p <0.05）。结论MIF 基因沉默抑制SMMC-7721与HepG2细胞的增殖能力并促进细胞凋亡可能是通过调节ERK/RSK2信号通路实现的。     

天门冬对慢性辐射损伤大鼠心脏的保护作用及其机制

目的:研究天门冬水煎剂对慢性辐射损伤大鼠心脏的保护作用及其机制。方法:SD大鼠以200mGy照射,照射50次建立慢性辐射损伤模型,以天门冬水煎剂进行治疗;采用硫代巴比妥酸和黄嘌呤氧化法分别检测血清和心脏中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;应用Real-time PCR和免疫印记法检测各组心脏组织中c-myc的表达。结果:天门冬水煎剂治疗组与模型组相比,血清与心脏中SOD的活性均明显增高、MDA含量显著降低(P<0.05),呈剂量依赖性;与模型组相比,天门冬能够使大鼠心脏组织内的c-myc表达下降(P<0.05)。结论:天门冬可以减轻慢性辐射对心脏的损伤作用,其机制可能与降低心脏c-myc基因的表达有关。     

牛磺酸对大鼠半乳糖性白内障抗氧化作用的探讨

目的 观察牛磺酸对半乳糖性白内障大鼠晶状体抗氧化能力的影响。方法 将36只大鼠分成3组：对照组、白内障组、牛磺酸组，采用d-半乳糖诱发白内障，牛磺酸组诱发当天开始球后注射15％牛磺酸。实验第30天取晶状体测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)、维生素E(VE)和超氧阴离子自由基。结果 白内障组与对照组相比，GSH-Px活性、T-AOC及VE含量明显降低，超氧阴离子自由基水平明显升高，而牛磺酸组上述指标有不同程度改善。结论 牛磺酸可保护晶状体免受氧化损伤，对半乳糖性白内障有一定的防治作用。     

金雀异黄素对血管平滑肌细胞中活性氧生成的影响

目的: 探讨金雀异黄素对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞中活性氧(reactive oxygen species, ROS)生成的影响. 方法: 以体外培养的人脐静脉平滑肌细胞(human umbilical vein smooth muscle cell, hUVSMC)为对象,用50 mg/L的ox-LDL作用细胞2 h,并加入不同浓度金雀异黄素(10, 30, 90 μmol/L)对其进行干预,应用流式细胞技术和荧光分光光度法分别检测细胞内总ROS水平.结果: hUVSMC经ox-LDL刺激2 h后,细胞内ROS水平明显升高(P<0.01);金雀异黄素(10 μmol/L)降低ox-LDL诱导的细胞内ROS的增加;金雀异黄素(30, 90 μmol/L)则进一步提高细胞内ROS水平.结论: 金雀异黄素(10 μmol/L)可清除细胞内ROS,而金雀异黄素(30, 90 μmol/L)则增加细胞内ROS的生成.     

金雀异黄素抑制人血管平滑肌细胞中核因子κB的激活

目的 研究金雀异黄素对氧化型低密度脂蛋白诱导的人血管平滑肌细胞中核因子κB激活的影响,并对其作用机制进行初步探讨.方法 以体外培养的人脐静脉平滑肌细胞为对象,用50 mg/L的氧化型低密度脂蛋白作用细胞2 h,并加入不同浓度金雀异黄素(10,30,90 mol/L)对其进行干预,免疫细胞化学方法检测各组血管平滑肌细胞中核因子κB亚单位p65核移位阳性细胞数,Western blot法检测细胞内κB抑制蛋白-α含量变化,硝酸还原酶法测定各组细胞培养液中一氧化氮生成量.结果 人脐静脉平滑肌细胞经氧化型低密度脂蛋白刺激2 h后,其核移位阳性细胞数为76.67±3.21,与空白组1.33±0.58相比明显增加(P<0.01),再与不同浓度金雀异黄素共同孵育2 h后,核移位阳性细胞数分别为28.33±2.52,19.67±1.53和15.67±2.89,与单纯给予氧化型低密度脂蛋白刺激相比明显减少(P<0.01),且随着浓度升高有递减的趋势;30,90 μmol/L金雀异黄素能明显增加细胞内κB抑制蛋白-α的含量;各组细胞培养液内的一氧化氮生成量差异无显著性.结论 金雀异黄素能抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞中核因子κB的活化;其作用机制可能涉及增加细胞内κB抑制蛋白含量,未发现与一氧化氮有关.     

人外周血内皮祖细胞培养方法的建立

背景：成人外周血来源丰富,但内皮祖细胞含量较少,为使其能够更好的应用于组织工程及细胞治疗,有必要建立外周血内皮祖细胞成熟、稳定的体外扩增体系。 目的：建立稳定的人外周血分离、培养和体外扩增血管内皮祖细胞的方法。 方法：应用密度梯度离心法,获取外周血单个核细胞,将分选后细胞接种于预先包埋了人纤维连接蛋白的培养板上,加入内皮祖细胞专用培养基中培养3 d后,洗掉非贴壁细胞,培养至第6天,收集贴壁细胞,应用倒置显微镜和苏木精-伊红染色进行细胞形态学观察;采用MTT法和细胞计数测定第1,3代细胞生长曲线;应用流式细胞仪测定祖细胞和内皮细胞系标志,对培养的细胞进行鉴定。 结果与结论：细胞生长曲线测定表明接种后第3天细胞进入指数增生期,至第6天进入平台期,随着传代次数的增加,细胞增殖速度变慢,同时表达干细胞表面标志CD34、CD133和内皮细胞表面标志血管性血友病因子、血管内皮生长因子受体2。证明人外周血可以分离培养内皮祖细胞。     

单核细胞趋化蛋白-1对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 研究单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1, MCP-1)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, hUVEC)凋亡的影响.方法 培养并鉴定人脐静脉内皮细胞;用不同浓度MCP-1(0.1、1.0、10、100 μg/L)对其作用24、48 h;先用MTT比色法观察细胞存活率、流式细胞技术检测细胞DNA含量及细胞周期观察其对hUVEC凋亡的影响.结果 单核细胞趋化蛋白-1能诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡(P＜0.05),其效应随浓度和时间的增加而增强:MTT明显减低;细胞DNA含量减少,出现明显亚G0/G1峰(凋亡细胞峰).结论 单核细胞趋化蛋白-1能诱导人脐静脉内皮细胞凋亡.