氧化型低密度脂蛋白对平滑肌细胞核因子-kB激活的影响

目的：观察氧化型低密度脂蛋白对人平滑肌细胞核因子-kB激活的影响，探讨氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化机制。方法：以体外培养的人脐动脉平滑肌细胞为对象，采用免疫细胞化学法测定氧化型低密度脂蛋白与核因子-kB亚单位p65核移位的时间效应与浓度效应关系。结果：在氧化型低密度脂蛋白刺激下，平滑肌细胞中0．5h即出现核因子-kB核移位，2h达高峰，4h仍持续可见。不同浓度(12．5，25，50及100mg/L)氧化型低密度脂蛋白均可诱导平滑肌细胞中核因子-kB核移位，在一定剂量范围内，氧化型低密度脂蛋白的浓度越大，核因子-kB核移位越明显，尤以50mg/L的氧化型低密度脂蛋白作用最明显。结论：氧化型低密度脂蛋白可刺激平滑肌细胞中核因子-kB的激活，进一步提示氧化型低密度脂蛋白／核因子-kB信号途径在促进动脉粥样硬化发病机制中起重要作用。     

一种改进的人脐静脉内皮细胞的培养方法

目的:建立稳定的人脐静脉内皮细胞分离和培养的方法. 方法:采用胰蛋白酶/胶原酶(1∶1)混合酶液消化法培养人脐静脉内皮细胞,简化完全培养液组分(不添加血管内皮细胞生长因子、肝素等辅助因子),当原代培养细胞80%以上汇合后用胰蛋白酶消化传代;用形态学、免疫细胞化学法进行鉴定. 结果:种植在培养瓶中的内皮细胞4h贴壁生长,48～96 h生长最快,7～10 d汇合. 内皮细胞呈单层铺路石样外观,Ⅷ因子相关抗原(Ⅷ:Ag)和内皮细胞生长因子受体2(KDR)鉴定内皮细胞纯度达95%以上. 结论:用混合酶液灌注脐静脉消化内皮细胞是获取内皮细胞的一种好方法,可靠性大,成功率高,可以构建体外研究血管内皮细胞的模型.     

单核细胞趋化蛋白-1诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡

目的:研究单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)对人脐静脉内皮细胞(hUVEC)凋亡的影响.方法:培养并鉴定hUVEC;用不同浓度MCP-1(0.1,1.0,10,100μg/L)对其作用24,48h;Annexin V/PI双染细胞,流式细胞仪观察内皮细胞凋亡;琼脂糖凝胶电泳检测细胞染色体"DNA ladder"的形成.结果:MCP-1能诱导hUVEC的凋亡,其效应随浓度和时间的增加而增强(P＜0.01);Annexin V/PI显示凋亡细胞明显增加;细胞DNA呈明显的"DNAladder".结论:MCP-1能诱导hUVEC凋亡.     

单核细胞趋化蛋白1诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的分子机制

目的研究单核细胞趋化蛋白1诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的分子机制。方法培养并鉴定人脐静脉内皮细胞,用不同浓度单核细胞趋化蛋白1(0.1、1.0、10和100μg/L)分别作用人脐静脉内皮细胞24h、48h;用流式细胞技术及蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2和Bax的表达。结果胶原酶灌注     

甲磺酸阿帕替尼通过p53抑制结肠癌细胞HCT116增殖的作用及机制

摘要：目的 探讨阿帕替尼对人结肠癌细胞HCT116及敲除野生型p53的HCT116细胞抑制作用的差异并探讨 其机制。方法 以0、15、30、60 μmol/L阿帕替尼处理HCT116 p53+/+、HCT116 p53-/-细胞24、48 h,以CCK-8法检测阿 帕替尼对两株细胞增殖的抑制作用;流式细胞术（Annexin V/PI法）检测0、15、30 μmol/L阿帕替尼处理细胞24 h后凋 亡率变化;实时荧光定量PCR法和Western blot法检测0、15、30 μmol/L阿帕替尼处理细胞24 h后,p53、NF-κB p65、 Caspase-3 mRNA和蛋白表达变化。结果 CCK-8结果显示,阿帕替尼能抑制HCT116 p53+/+、HCT116 p53-/-细胞的增 殖,抑制作用具有剂量依赖性（P＜0.01）。流式细胞术结果显示,阿帕替尼干预后,HCT116 p53+/+、HCT116 p53-/-细胞 凋亡率升高（P＜0.01）。与HCT116 p53+/+细胞相比,阿帕替尼处理后HCT116 p53-/-细胞的凋亡率较低（P＜0.05）。阿 帕替尼处理后,HCT116 p53+/+、HCT116 p53-/-细胞中 p53、NF-κB p65、capsase-3 mRNA 和 Caspase-3 蛋白表达升高 （P＜0.05）。阿帕替尼干预后,HCT116 p53+/+细胞中 p53、NF-κB p65 蛋白表达下调而 HCT116 p53-/-细胞中 NF-κB p65蛋白表达上调（P＜0.01）。结论 阿帕替尼可能通过p53/NF-κB通路抑制HCT116 p53+/+、HCT116 p53-/-细胞增殖 并促进细胞凋亡,结肠癌细胞可能通过野生型p53对阿帕替尼产生耐药。     

医学生物化学教学的几点体会

生物化学是高等医学院校一门重要的医学基础课,其发展速度快,知识信息广,授课难度较大,也是学生普遍反应,难学好的一门课程[1].它主要研究生物体分子结构与功能,物质代谢与调节,以及遗传信息传递的分子基础与调控规律,从分子水平探讨生命现象的本质[2].同时,它又是生命科学中进展迅速的基础学科,其理论和技术渗透至基础医学与临床医学的各个领域[2].校园中就流传着"生化生化,深而难化"的俗语.如何在有限的学时里让学生掌握足够深度和广度的生化知识,提高学生对这门课程的兴趣及认知水平,是需要我们生化教师仔细总结和探讨的.为此,笔者就教学中的一些体会进行了讨论,恳请同行指正.     

人外周血内皮祖细胞培养方法的建立

背景:成人外周血来源丰富,但内皮祖细胞含量较少,为使其能够更好的应用于组织工程及细胞治疗,有必要建立外周血内皮祖细胞成熟、稳定的体外扩增体系.目的:建立稳定的人外周血分离、培养和体外扩增血管内皮祖细胞的方法.方法:应用密度梯度离心法,获取外周血单个核细胞,将分选后细胞接种于预先包埋了人纤维连接蛋白的培养板上,加入内皮祖细胞专用培养基中培养3d 后,洗掉非贴壁细胞,培养至第6 天,收集贴壁细胞,应用倒置显微镜和苏木精-伊红染色进行细胞形态学观察;采用MTT 法和细胞计数测定第1,3 代细胞生长曲线;应用流式细胞仪测定祖细胞和内皮细胞系标志,对培养的细胞进行鉴定.结果与结论:细胞生长曲线测定表明接种后第3 天细胞进入指数增生期,至第6 天进入平台期,随着传代次数的增加,细胞增殖速度变慢,同时表达干细胞表面标志CD34、CD133 和内皮细胞表面标志血管性血友病因子、血管内皮生长因子受体2.证明人外周血可以分离培养内皮祖细胞.     

贵州产天冬总皂苷清除氧自由基能力的研究

目的 提取贵州产天冬中总皂苷,并观察其清除氧自由基作用. 方法 提取贵州产天冬总皂苷,选用菝葜皂苷元为对照品,采用分光光度法,高氯酸显色,310 nm波长处测定其吸光度,计算天冬中总皂苷的含量;采用连苯三酚法及邻二氮菲-Fe(Ⅱ)/H₂O₂体系,用分光光度法测定天冬总皂苷对O^2-和&#8226;OH的影响. 结果以菝葜皂苷元为对照品,贵州产天冬中天冬总皂苷的含量为2.390%,RSD＝1.19%(含量均以干燥品计算);提取的天冬总皂苷在体外对O^2-具有清除作用(P<0.01),其对O^2-清除率及O2-的抑制率与天冬总皂苷含量成正相关;贵州产天冬中天冬总皂苷对&#8226;OH也有一定的清除作用,清除率为(29.1±0.17)%(P<0.05). 结论 贵州产天冬中天冬总皂苷对O^2-具有显著的清除及抑制作用,对&#8226;OH也有一定的清除作用.     

天冬总皂苷对衰老肾脏抗氧化作用的研究

目的研究天冬总皂苷对衰老大鼠肾脏的抗氧化作用,探讨其治疗衰老肾脏的作用及其机制。方法以D-半乳糖所致的衰老肾脏模型为研究对象,灌胃服用天冬总皂苷进行治疗3,个月后处死各组大鼠,应用全自动分析仪检测血清中肌酐(Cr)、尿素(UREA)含量;采用光镜和BI2000图像分析系统对大鼠肾脏各项形态学指标进行定量分析;采用硫代巴比妥酸和黄嘌呤氧化法分别检测血清和肾脏中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与模型组相比,治疗组血清中Cr及UREA的含量均显著降低(P<0.05);治疗组肾小球形态、肾小球硬化率均与模型组不同(P<0.05);治疗组血清与肾脏中SOD的活性均明显增高、MDA含量也显著降低(P<0.05)。结论天冬总皂苷能够减轻衰老肾脏的氧化损伤,可能是其改善衰老肾脏的机制之一。     

血管紧张素Ⅱ对高血压病NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA表达影响的初探

目的研究高血压病人血吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P2phoxmRNA的表达及其与血管紧张素(AT-Ⅱ)的相关性.方法研究对象分为原发性高血压组(EH)和正常组(N).通过密度梯度离心法获取血中吞噬细胞,采用Rt-PCR技术检测吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA的表达量,放免法测定血浆AT-Ⅱ水平.结果高血压组血吞噬细胞P22phoxmRNA较正常组高表达,血浆AT-Ⅱ水平的测定结果显示高血压组较正常组升高(P＜0.01),两组人群血浆AT-Ⅱ含量与相应的吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA表达量呈显著正相关.结论高血压组血吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA较正常组有显著的高表达,推测吞噬细胞NAD(P)H氧化酶的活性可能受血浆AT-Ⅱ的调节.