人轮状病毒非结构蛋白NSP4基因特征的初步分析

目的：初步了解重症腹泻轮状病毒株NSP4基因特征及变异情况，方法：在2002年100例秋冬季腹泻患儿轮状病毒分子流行特征的研究中，确诊为轮状病毒腹泻的10例患儿的粪便标本。用PCR方法对其NSP4基因进行测定，并挑选出一株重症腹泻轮状病毒毒株(简称02′K1)。采用一步法RT-PCR对其NSP4基因进行扩增获得NSP4 cDNA，利用银染测序方法对所扩增获得NSP4 cDNA进行测定，采用Winegene231核酸分析软件对02′K1株NSP4核苷酸序列进行翻译，同时利用Omiga生物软件对02′K1株、ST3株(人轮状病毒G4血清型)及代表NSP4四个主要基因型的之一的Wa株(简称Wa-1株)、Wa-a株、Wa-v株的核苷酸和氨基酸序列进行比较，分析其同源性及02′K1株的NSP4氨基酸变异位点，结果：(1)经一步法RT-PCR扩增获得的NSP4 cDNA约725bp，NSP4基因全长686个核苷酸，含有一个开放读码框架，编码一个由175个氨基酸组成的蛋白；(2)02′K1株与ST3株、Wa-1株、Wa-a株、Wa-v株的核苷酸和氨基酸同源性均达90％以上；(3)与ST3比较，02′K1株的NSP4氨基酸序列有14个位点发生了变异。即aa16、aa26、aa60、aa72、aa76、aa124、aa135、aa140、aa141、aa145、aa146、aa161、aa162、aa169，结论：(1)02′K1株的NSP4基因型属于Wa组；(2)02′K1株的NSP4氨基酸序列有14个位点发生了变异。     

血流向量成像技术评价房间隔缺损的左室流场变化特点及能量损耗变化规律

目的应用血流向量成像技术评估房间隔缺损左室流场的变化特点及能量损耗的变化规律,为定量评估ASD左室结构和功能提供新的参考。方法选取ASD患者60例,分为合并肺动脉高压(PAH)组32例和无PAH组28例,健康志愿者31例为正常对照组,利用VFM技术测量左室涡流相关参数、 EL值大小,分析总结相关演变规律。结果①左室流线成像均显示在舒张早期的快速充盈期(P1)、舒张中期(P2),二尖瓣口附近存在较多涡流。②合并PAH时各时相下的涡旋面积、循环强度、涡旋数量、 EL值明显增大;EL峰值均出现在P1期(P0.05)。结论 VFM成像技术可显示ASD左室内血流的流场状态变化特点以及能量损耗的变化规律,为定量评估ASD左室流体力学相关变化及其心功能指数提供有力的参考。     

人轮状病毒NSP4蛋白131和133位氨基酸变异对毒力影响的研究

目的研究两株A组人轮状病毒NSP4蛋白131位和133位氨基酸位点的变异对毒力的影响。方法从昆明地区2002年和2005年秋冬季婴幼儿腹泻流行期不同程度腹泻患儿中分离得到两株轮状病毒流行株02k38和05k44,RT-PCR扩增NSP4全长基因,进行cDNA序列测序。通过pGEX-5X-1载体,转化E.coliBL21以谷胱苷肽S-转移酶融合蛋白的形式表达两株病毒的NSP4蛋白C-端86～170位氨基酸（GST-NSP486-170）;并酶切融合头纯化得到两种NSP486-170蛋白,在ICR乳鼠中比较这两种蛋白致小鼠腹泻的差异。结果两种NSP486-170蛋白毒性无差异。结论两株轮状病毒131位和133位氨基酸位点的变异不影响毒力的改变,其致腹泻活性没有明显差异（P〉0.05）。     

昆明地区A组轮状病毒感染状况调查与VP7血清型分析

A组轮状病毒(HRV)是世界范围内小儿急性胃肠炎的主要病原。我们采用ELISA和PAGE方法对昆明地区HRV的分子流行特征进行了VP7血清型别研究。 1.材料与方法:100例(男68例,女32例)婴幼儿腹泻粪便标本来源于2002年9～12月昆明医学院第一附属医院儿科门诊和住院部急性腹泻患儿,标本贮于-70℃冻存以备用。用ELISA法检测RV-Ag,严格按试剂盒说明操作。RV-     

给药技术的现状及前景

本文概述了给药系统的研究现状及发展前景，重点阐述了口服、鼻腔、经皮、胶囊化技术等各种药物给予途径及相关生物技术，从技术进步及研究策略角度探讨了给药系统的发展方向。     

母传甲型肝炎抗体衰减过程分析

目的：了解母传甲型肝炎抗体衰减过程，为制定科学的免疫程序提供依据。方法：采集310名0～24月龄健康儿童血清，测定抗HAV总抗体，分析不同月龄组的抗体水平。结果：〈1个月龄组甲肝抗体阳性率和几何平均滴度（GMT）均最高，分别为98.04%和2451.55mIU/ml，之后逐渐下降，12个月～组降至最低，12个月～和18～24个月龄组间甲肝抗体阳性率和GMT差异均无统计学意义。结论：12～24月龄应为甲肝疫苗免疫的最佳时期。     

自体骨髓干细胞肝移植治疗晚期肝硬化1例报道

病例 男，59岁。因“发现慢乙肝20余年，腹泻，乏力，纳差，腹胀加重1周。”以“乙肝后性肝硬化失代偿期”收住。入院查体：T37．4℃，R20次／min，BP130／70mmHg，HR80次／min。一般稍差神清合作，皮肤巩膜轻度黄染，胸部发现多个蜘蛛痣，心、肺（-），腹软，稍隆起，全腹无压痛，肝脾触诊不满意。移动性浊音（＋），肠鸣3次／min。双下肢轻度凹陷性水肿。实验室检查：肝功ALB22．6g／L，TB51．9μmol／L，DB23．5μmol／L，ALT，AST〈40U／L，TBA53．6μmol/LPA 72mg/L。肾功、电解质、大便正常。     

两株Wa株人源轮状病毒NSP4蛋白的表达及其致ICR小鼠腹泻的毒力比较

目的研究两株Wa株人源轮状病毒NSP4蛋白139位氨基酸位点的变异对毒力的影响。方法从2002～2004年昆明地区婴幼儿轮状病毒感染者大便样品中,通过RT-PCR,PCR扩增了22株轮状病毒株的NSP4全长基因、cDNA序列,并对cDNA序列测序,发现这些病毒株的NSP4氨基酸序列高度保守,仅在79位、139位氨基酸位点存在差异。选取139位氨基酸不同(V/I)的两株病毒株,在E.coli BL21中,用pGEX5X-1载体融合表达了两株病毒的86～175位氨基酸(GST-NSP4_(86-175);并酶切融合头得到两种NSP4_(86-175)蛋白,在ICR乳鼠中比较这4种不同蛋白致小鼠腹泻的差异。结果发现GST-NSP4_(86-175)蛋白毒性比NSP4_(86-175)蛋白强,而139位氨基酸不同(V/I)的两株病毒株的NSP4_(86-175)蛋白毒性没有明显的差异。结论139位氨基酸位点的变异并不影响NSP4蛋白的毒力改变。     

云南森林脑炎病毒核酸的提纯及其性质研究

通过蜱传脑炎病毒复合群和云南森林脑炎病毒核酸基本性质的研究，建立了病毒核酸的提纯方法，为今后的试验打下了基础。比较蜱传脑炎病毒复合群中的中国东北株ＲＳＳＥ与云南森林脑炎病毒的电泳图谱，发现它们基本处于同一位置。     

甲型肝炎灭活疫苗的研究

目的研制甲肝灭活疫苗.方法甲型肝炎病毒TZ84株、吕8株接种人胚肺二倍体细胞2BS、KMB17株,经培养繁殖、收获、提纯、甲醛溶液灭活和氢氧化铝吸附制成灭活疫苗.结果纯化的甲肝病毒经HPLC、SDS-PAGE等方法检测表明具有良好的纯度.灭活工艺经验证盲传三代证明灭活可靠.甲肝灭活疫苗在豚鼠、小白鼠、ICR小鼠、恒河猴和普通狨猴上具有良好的安全性和免疫原性;经539例临床研究表明,该疫苗儿童组和成人组副反应均轻微,全程免疫后接种者100%抗体阳转,儿童组0,6月注射500u全程免疫后抗体水平达4535mIU/ml,成人组注射500u 0,6月全程免疫后抗体水平为1657mIU/ml,均可获得较长期的保护效果;该疫苗2～8℃保存21个月、37℃保存32天,质量稳定.结论甲肝灭活疫苗安全、有效、稳定.