ELISA法检测尿微量白蛋白的临床应用与评价

目的：评价ELISA方法检测尿微量白蛋白的准确性、可靠性及其临床意义。方法：使用ELISA一步竞争法测定尿微量白蛋白，与放免法、化学发光法进行比较。结果：ELISA测定尿微量白蛋白与放免法、化学发光法测定的结果十分接近，相关系数r值分别为0．98和0．95。测定400例健康人晨尿尿微量白蛋白正常值为18μg/ml。糖尿病、高血压、冠心病患者尿微量白蛋白的检测。阳性率分别为39．2％、42．0％和36．1％。结论：ELISA法测定尿微量白蛋白具有经济、实用的特点，与化学发光法、放免法比较有良好的相关性。对于糖尿病、高血压、冠心病早期肾脏损伤的诊断以及疾病的预测具有重要意义。     

应用原子力显微镜观测血小板的黏附

原子力显微镜(Atomic force microscope,AFM)是近年应用于生物医学领域研究的新技术,分辨率可达到纳米层次.血小板黏附在止血血栓过程中起十分重要的作用.本研究以胶原(collagen)为基质建立血小板的黏附模型,利用AFM的tapping mode在液体环境下观测了血小板的黏附、伸展过程.并应用contact mode中的侧向力模式观察了血小板在胶原上的黏附能力.观察结果表明,血小板在黏附过程中可见到伪足伸出、微小粒子的释放、细胞骨架重组.黏附血小板的细胞骨架网络结构可对抗～80nN的侧向力.     

社区老年糖尿病合并高血压患者对认知功能的影响

目的 了解社区老年糖尿病患者合并高血压对其认知功能的影响。方法 选择北京市某社区＞60 岁老年糖尿病患者82 例和糖尿病合并高血压患者142 例为调查对象, 同社区年龄、性别及文化程度相匹配的277 名正常老年人为对照, 以简易智能状态检查量表（MMSE）和蒙特利尔认知评估量表（MoCA）评估三组人群的认知功能状况。结果 糖尿病合并高血压患者组较正常对照组MMSE总分降低（28.42±1.52 vs. 28.88±1.47）, 差异有统计学意义（P＜0.05）;糖尿病合并高血压患者组与正常对照组比较, MoCA总得分（25.20±3.91 vs. 26.50±3.29）、视空间与执行功能（3.60±1.56 vs. 3.96±1.18）和语言得分（2.10±0.80 vs. 2.37±0.80）明显降低, 差异有统计学意义（P＜0.05）。多元回归分析显示, 高龄、受教育程度低是认知障碍的独立危险因素（P＜0.01）。结论 老年糖尿病患者合并高血压可导致认知功能受损。     

肿瘤坏死因子α对血管平滑肌基质Gla蛋白表达的调节作用

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)如何通过核因子κB(NF-κB)信号通路调节血管平滑肌基质Gla蛋白(MGP)的表达。方法给予人主动脉平滑肌细胞(HVSMCs)TNF-α(10μg/L)刺激,或者借助于病毒载体过表达或敲低NF-κB水平,通过实时PCR分析MGP mRNA水平,克隆人MGP基因启动子,以荧光素酶作为报告基因,观察TNF-α对MGP启动子的调节作用。结果 TNF-α和NF-κB的p65亚基过表达都明显下调MGP表达,而p65-shRNA可阻断TNF-α对MGP的抑制作用,此外TNF-α通过抑制MGP基因启动子活性,在转录水平调节MGP表达。过表达MGP抑制平滑肌细胞骨形态发生蛋白2(BMP-2)的表达。结论炎症因子TNF-α通过激活NF-κB信号抑制钙化保护因子MGP的表达,并促进BMP-2表达,调节细胞的成骨分化。     

银杏内酯B对胶原或二磷酸腺苷刺激血小板活化后一氧化氮含量及血管舒张因子刺激磷酸蛋白磷酸化的影响

背景:研究表明,增龄机体血小扳一氧化氮合成能力下降,导致环磷鸟苷水平降低,进而使血小扳功能亢进,成为血栓易感状态.目的:探讨胶原或二磷酸腺苷不同血小板刺激剂诱导后,银杏内酯B对增龄机体血小板一氧化氮含量、血管舒张因子刺激的磷酸蛋白磷酸化的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-08/2007-12在卫生部老年医学重点实验室完成.材料:13月龄Wistar大鼠5只,36月龄新西兰白兔5只,均由中吲科学院动物所提供.银杏内酯B购自徐州大观园有限公司,批号BN52021,其中银杏内酯B含量为92%,其他8%为银杏内酯A,C,M,J成分.方法:用3.8%枸橼酸抗凝抽取全血,离心分离富血小板血浆.分别将不同浓度的银杏内酯B加入到富血小板血浆中孵育5 min,再加入10 mg/L胶原或5 μmol/L二磷酸腺苷刺激血小板5 min.主要观察指标:使用一氧化氮试剂盒测定一氧化氮含量,Western blot法分析血小板血管舒张因子刺激的磷酸蛋白磷酸化水平,血小板聚集仪测定银杏内酯B对胶原或二磷酸腺苷诱导血小板聚集的抑制效果.结果:800 mg/L银杏内酯B预处理的血小板经胶原刺激活化后,血小板内一氧化氮含量增加62.3%:经二磷酸腺苷刺激活化后一氧化氮含量增加24%.胶原刺激血小板活化时,银杏内酯B可明显提高血管舒张因子刺激的磷酸蛋白的磷酸化水平:二磷酸腺苷刺激血小板活化时,银杏内酯B亦可提高血管舒张因子刺激的磷酸蚩白磷酸化水平,但增加幅度不如前者明显.800 mg/L银杏内酯B几乎完全抑制了胶原诱导的血小板聚集,血小板聚集率仅为2%;但其对二磷酸腺苷诱导的血小板聚集抑制效果较弱,血小板聚集率达64%.结论:银杏内酯B对胶原刺激血小板活化的抑制作用与一氧化氮/环磷鸟苷通道相关,能够完全阻止胶原刺激的血小板聚集,对二磷酸腺苷刺激血小板活化的抑制效果较差,提示银杏内酯B对胶原、二磷酸腺苷诱导的血小板活化有不同的调节机制.     

银杏内酯B抑制血小板CD40Ligand表达的分子机制研究

目的探讨银杏内酯B(ginkgolide B)对活化血小板CD40 Ligand(CD40L)的影响以及相关的分子机制。方法取正常人血分离血小板,用不同浓度银杏内酯B孵育血小板5 min,然后用胶原(collagen)刺激血小板活化。用Westernblot分析PI3K表达,Akt磷酸化,CD40L的变化。结果①用collagen刺激血小板聚集,银杏内酯B(0.2、0.4、0.6 g.L-1)预处理血小板5 min,血小板聚集率明显降低,聚集率分别为77%,60%和48%。②Western blot结果显示胶原刺激血小板活化后CD40L表达明显增加,银杏内酯B以剂量依赖方式抑制了CD40L表达。③银杏内酯B对胶原刺激的血小板PI3K表达无明显影响。④collagen刺激血小板活化后Akt的磷酸化增加,银杏内酯B抑制了Akt磷酸化。结论银杏内酯B能够有效抑制collagen诱导的血小板聚集以及CD40L的表达,并明显抑制了Akt磷酸化,表明银杏内酯B能够通过PI3K/Akt信号传导通路抑制血小板活化。     

银杏内酯B对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响。方法 12只8周龄C57BL/6J小鼠为正常组,24只8周龄♂ApoE-/-小鼠为阳性模型组以及药物组;药物组每天给予GB 0.6 mg灌胃。8周后处死小鼠,用病理学方法观察小鼠动脉斑块、脂质沉积以及巨噬细胞表达。用ELISA方法测定血浆RAN-TES含量。结果电镜结果显示模型组动脉斑块较大,血管内膜损伤明显,而GB组小鼠动脉内表面损伤明显减轻,斑块较小。HE染色显示了同样的结果,模型组斑块较大,GB组斑块较小。血浆RANTES测定正常组为123.81 ng.L-1,模型组为359.16 ng.L-1,GB组为193.36 ng.L-1,各组之间差异存在统计学意义(P<0.01)。结论 GB能有效地减轻ApoE-/-小鼠的动脉粥样硬化损伤,并降低血浆RANTES含量,其药理学机制可能与抑制血小板功能相关。     

细胞内钙的调节机制与临床应用

钙离子参与细胞多种反应 ,对维持机体功能十分重要。该文简要介绍了细胞内钙离子通道及调节机制 ,脑血管疾病、心血管疾病钙离子分布的变化及一些药物对细胞内钙的调节机制。     

酶联免疫吸附法测定血小板反应素1及其对前列腺癌诊断价值的研究

Objective To use enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for measuring thrombospondin-1 (TSP-1),and to analyze its diagnostic value for prostatic carcinoma.Methods The possible difficulties and the way to solve the difficulties with ELISA spot were explored first.Three agents which could segregate idio-antigen and one technique which could depurate proteinum were designed and developed.The non- idio- proteinum cross reaction problems were solved and the routine method to measure TSP-1 with ELISA was set up successfully.The serum TSP-1 was measured in 14 patients with benign prostatic hyperplasia (BPH) and 18 patients with prostatic carcinoma.Results The TSP-1 values were (73.77±12.72)% and (121.86±-19.47)% in prostatic carcinoma group and benign prostatic hyperplasia group,respectively (t= 8.44,P＜0.01).The diagnostic sensitivity and specificity of TSP-1 and prostate specific antigen (PSA) for prostatic cancer were 92.7%,88.9% and 85.7%,66.7%,respectively (P＜0.01).The area under the receiver operating characteristic curve (ROC) of TSP-1 and PSA were 0.9663 and 0.7421 (P＜0.05).Conclusions The determination of TSP-1 with ELISA is feasible.TSP-1 is an ideal diagnostic parameter for prostatic carcinoma and it may distinguish BPH from malignant prostatic disease more exactly than PSA.     

原发性高血压、冠心病患者尿微量白蛋白阳性率及其相关因素

目的：探讨微量白蛋白尿与原发性高血压和冠心病的关系。方法：采用酶标记抗原一步竞争法,检测81例原发性高血压患者、66例冠心病患者及108例健康对照的尿微量白蛋白。结果：原发性高血压患者尿微量白蛋白阳性率为54.3%,冠心病患者尿微量白蛋白阳性率为37.9%,高血压患者尿微量白蛋白与收缩压及高密度脂蛋白相关,尿微量白蛋白阳性冠心病患者发生急性心梗和尿微量白蛋白阴性冠心病患者发生急性心梗分别为40%和17.1%（P〈0.05）。结论：冠心病尿微量白蛋白阳性患者预后不良,提示尿微量白蛋白测定的重要性。