HFRS患者汉滩病毒特异性CTL克隆靶细胞的建立及意义

目的:建立肾综合征出血热(HFRS)患者汉滩病毒(HTNV)核衣壳蛋白(NP)特异性CTL克隆的靶细胞.方法:采用Ficoll密度梯度离心法分离HFRS患者外周血单个核细胞(PBMC),并用EB病毒(EBV)转化B淋巴细胞,建立B淋巴母细胞样细胞系(B-LCL).然后,用含HTNVS基因的重组痘苗病毒(rVV)转染B-LCL,间接免疫荧光(IFA)检测NP的表达,并用HTNV特异性T细胞克隆对转染rVV的B-LCL进行细胞毒杀伤实验.结果:B淋巴细胞经EBV感染4wk左右,可形成B-LCL.HTNV-S基因在B-LCL中能有效表达NP,且能被HTNV特异性T细胞克隆识别.结论:成功建立了HFRS患者永生化B-LCL.含HTNVS的基因重组痘苗病毒转染的B-LCL可用作HTNV特异性CTL克隆的靶细胞.     

趋化因子复合受体在HIV-1感染中的作用

趋化因子复合受体与HIV-1感染关系密切.此文简要回顾了HIV-1复合受体以及它们在病毒膜融合和HIV-1发病机制中的作用,以期为将来研究趋化因子复合受体抗HIV-1感染提供理论依据.     

浅谈医生信息素养的培养

从信息素养的概念入手,论述了培养医生信息素养的必要性,并探讨了培养医生信息素养的具体内容和途径。     

原发性硬化性胆管炎13例临床分析

目的　探讨原发性硬化性胆管炎 (PSC)的临床表现。方法　回顾性分析 13例PSC患者的临床表现 ,并检测其血清自身抗体。结果　 13例PSC患者中 ,男性 8例 ,女性 5例。平均年龄5 5 .73岁。以重度黄疸、轻度乏力为主要表现 ,伴有瘙痒、上腹钝痛、白陶土样便。硷性磷酸酶(ALP) 2 74U/L ,谷氨酰氨基转肽酶 ( 2 98± 77.78)U/L。血清抗中性粒细胞胞浆抗体周围型 (pANCA)阳性 7例 ,抗核抗体 (ANA)阳性 2例 ,平滑肌抗体 (SMA)、抗线粒体抗体 (AMA)分别有 1例阳性 ,抗肝肾微粒体抗体 1(LKM 1)及抗可溶性肝抗原抗体 (SLA)均阴性。B超检查主要表现为胆管壁增厚、回声增强及胆管内径变细。内镜逆行胰胆管造影 (ERCP) 13例全部阳性 ,肝外型 9例 ,混合型 4例。纤维结肠镜检查提示溃疡性结肠炎 6例。结论　原发性硬化性胆管炎好发于中年男性 ,临床表现为梗阻性黄疸 ,硷性磷酸酶 (ALT)、γ 谷氨酰胺转移酶 (GGT)明显升高为其显著特点 ,pANCA阳性率较高 ,往往伴有溃疡性结肠炎。B超对本病诊断具有提示和辅助作用     

HFRS患者汉滩病毒核蛋白特异性CTL克隆的建立及其初步研究

为探讨汉滩病毒核衣壳蛋白 (HTNV NP )诱生的特异性细胞免疫的分子基础 ,为阐明HFRS的发病机制和疫苗的设计提供资料 ,本文分离HFRS患者的PBMC ,建立HTNV NP特异性的CTL克隆 ,同时将克隆有HTNVS基因不同片段的真核表达载体转染患者自身的B淋巴母细胞系 (BLCL ) ,建立CTL靶细胞系 ,并进行细胞杀伤试验。建立的特异性CTL克隆对表达完整NP、NP羧基和氨基端肽段的靶细胞均有比较明显的杀伤效应 ,平均杀伤率分别为 5 0 2 %、 39 0 %和 2 5 8%。表明HTNV NP优势T细胞表位可能主要位于病毒核蛋白的羧基端     

中国株HIV-1外膜蛋白基因疫苗诱导免疫小鼠免疫应答的实验研究

目的 :构建中国流行株HIV 1外膜蛋白 (gp12 0 )基因疫苗并接种小鼠 ,评价其诱导的体液和细胞免疫应答。方法 :将HIV 1gp12 0基因插入到真核表达载体pVAX1中 ,构建重组真核表达质粒pVAX1 GP12 0 ,并经EcoRI和PstI双酶切以及测序鉴定。同时以pVAX1 GP12 0和空载体pVAX1分别免疫BALB/c小鼠 ,采用ELISA检测免疫小鼠的特异性抗体和IFN γ水平 ,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖 ,用乳酸脱氢酶 (LDH)试验检测小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)的应答。结果 :酶切及测序结果表明 ,成功地构建了HIV 1gp12 0基因疫苗。与空载体pVAX1组相比较 ,pVAX1 GP12 0免疫组小鼠血清抗HIV 1gp12 0抗体的滴度和IFN γ的水平均升高 ,两者差异显著 (P <0 .0 1)。pVAX1 GP12 0免疫组小鼠脾淋巴细胞增殖的刺激指数 (SI)及特异性CTL的杀伤活性 ,均高于空载体pVAX1组 (P <0 .0 1)。结论 :构建了针对我国HIV 1流行株的gp12 0基因疫苗。以其免疫BALB/c小鼠可诱导特异性体液和细胞免疫应答 ,为进一步将其用于我国的HIV的治疗奠定了基础。     

汉滩病毒S基因真核表达载体的构建及免疫小鼠的初步研究

目的研究汉滩病毒Ｓ片段编码区基因免疫小鼠的作用。方法利用基因重组技术,构建含汉滩病毒Ｓ片段编码区基因的真核表达质粒。用此质粒直接注射到ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨骼肌内进行ＤＮＡ免疫,用间接免疫荧光法检测免疫小鼠血清中汉滩病毒抗体。结果在初次免疫的小鼠血清中检测出有低滴度的汉滩病毒抗体。加强免疫后,抗体水平显著上升,免疫荧光抗体（ＩＦＡＴ）滴度最高达１６４０。约８７％的免疫动物发生了血清抗体阳转。抗体水平及小鼠血清抗体阳转率与注射的质粒ＤＮＡ剂量及注射次数有关。结论应用基因免疫技术能够诱导机体产生针对汉滩病毒的特异性免疫应答     

不同缺失突变的丙型肝炎病毒核心蛋白基因在大肠杆菌中的表达

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)全长及3种不同缺失突变的核心蛋白基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达. 方法:用PCR方法扩增基因型为1b型的HCV核心蛋白的全长及3种不同缺失突变的基因片段,对应氨基酸分别为C573:1-191aa,C510:1-59aa 81-191aa,C507:1-169aa,C444:1-59aa 81-169aa. 将其克隆到高效表达载体pRSET-A中构成重组质粒(pRSET-A-C573,pRSET-A-C510,pRSET-A-C507,pRSET-A-C444),转化大肠杆菌BL-21(DE3)pLysS. IPTG诱导表达6×His融合蛋白,表达产物经SDS-PAGE及Western blot检测和鉴定. 结果:经酶切鉴定及测序证实全长及3种不同缺失突变的核心蛋白基因的原核表达载体构建正确. 经SDS-PAGE及Western blot显示在Mr约为21×103, 19×103, 19×103, 16.5×103处出现融合表达条带. 融合蛋白的表达量约占菌体蛋白总量的20%. 结论:全长及3种不同缺失突变的丙型肝炎病毒核心蛋白基因均在大肠杆菌中得到有效表达.