人端粒酶逆转录酶和人白细胞介素18融合基因真核表达载体的构建和功能研究

目的：以基因重组技术在真核细胞中表达人白细胞介素18（hIL-18）和人端粒酶逆转录酶（hTERT）融合基因，并观察其生物学功能。方法：健康人单核细胞经RT～PCR扩增hIL-18后、T—A克隆。亚克隆至经NheⅠ、HindⅢ酶切的PCDNA3．1（＋）／hTERT中，限制性内切酶验证后，挑选出含有目标基因的正确克隆。经限制性内切酶和DNA测序分析两个基因是否已经正确连接到真核表达载体中。将hTERT／hIL-18融合基因质粒脂质体介导转染3T3细胞中表达，经Western—blot验证目的基因表达产物，同时对转染细胞作免疫荧光染色。以ELISA检测转染细胞刺激KG-1细胞分泌了干扰素的能力，以流式细胞仪检测转染细胞抗MTX诱导凋亡的能力。结果：hTERT／hIL-18融合基因的真核表达载体PCDNA3．1（＋）构建成功，经限制性内切酶验证和DNA测序及同源性对比分析，该基因片段与NCBI基因库hIL-18和hTERT基因CDS序列同源性均达到99．9％；而细胞转染后经Western—blot验证，hTERT／hIL-18融合蛋白的分子量约127kMr，与预期一致，荧光显微镜观察显示融合蛋白在细胞中弥散表达。此融合蛋白能刺激KG-1细胞分泌γ-干扰素，并具有抗MTX诱导凋亡的生物学功能。结论：本实验构建的PCDNA3．1（＋）／hTERT—hIL-18质粒能够在真核细胞中表达，并具有生物学功能，为进一步转染树突状细胞，研制肿瘤的治疗性疫苗提供基础。     

血浆置换合并化疗治疗T细胞性非霍奇金淋巴瘤一例

患者 ,男 ,4 0岁。因反复畏寒、发热 2月余 ,加重伴黑便10ｄ ,于 2 0 0 1年 9月入院。患者于 2 0 0 1年 7月开始出现畏寒、发热 ,体温最高达 4 0℃ ,曾用多种抗生素治疗均无效 ,病情进行性加重并出现黑便 ,用“施他宁”等止血药物治疗病情无明显好转而转来我院。入院查体 :危重病容 ,中度贫血貌 ,体温 4 0℃ ,面罩吸氧下呼吸急促 ,呼吸 4 0次 ｍｉｎ ,血压 90 6 0ｍｍＨｇ,皮肤巩膜黄染明显 ,全身皮肤可见散在瘀点、瘀斑 ,浅表淋巴结未扪及肿大 ,胸骨无压痛 ,两肺呼吸音粗 ,未闻及干、湿口罗音 ,心率 130次 ｍｉｎ ,律齐 ,未闻及病理性杂音…     

非霍奇金淋巴瘤患者合并乙型肝炎病毒感染的临床研究

研究证实乙型肝炎病毒(HCV)感染与B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)相关[1-2],但是有关HBV感染和NHL之间关系的研究较少,研究认为HBV表面抗原阳性的人群伴发所有类型NHL的风险高[3-4].我们回顾性分析了我院近7年来新诊断的NHL患者的临床资料,以探讨HBV感染与NHL的关系.     

异基因冻存外周血干细胞加骨髓移植治疗白血病

目的 探讨异基因外周血干细胞加骨髓移植的临床疗效与急性移植物抗宿主病(aGVHD)发生情况.方法 对AMLL患者以其妹冻存外周血干细胞和骨髓联合移植,并观察疗效和并发症发生情况.结果 患者造血恢复良好,患者移植后为(+)19天中性粒细胞数＞0.5×109/L,+30天Plt数＞50×109/L.无aGVHD情况.结论 冻存外周血干细胞加骨髓移植是白血病有效的治疗方法,值得进一步探索.     

细胞自噬与血液肿瘤关系研究进展

自噬是胞浆大分子物质和细胞器在膜包囊泡中降解的生物学过程,具有多种生理功能.在某些情况下,自噬可以导致细胞死亡,即自噬性细胞死亡.近年研究表明,自噬和恶性肿瘤发生、发展有密切关系.靶向自噬途径有可能成为治疗肿瘤的新方法.     

子宫颈淋巴上皮瘤样癌1例分析

子宫颈淋巴上皮瘤样癌是鳞状细胞癌中的一种罕见变异型，预后好于一般鳞癌。笔者结合1例子宫颈淋巴上皮瘤样癌病理资料对该病进行复习和讨论。     

急性白血病细胞端粒结合蛋白2表达的研究

目的研究人类白血病细胞株及原代白血病细胞中人端粒结合蛋白2(TRF2)的表达.方法应用实时定量RT-PCR,检测白血病细胞株及原代白血病细胞中TRF2 mRNA的表达,应用Western Blot,检测TRF2蛋白的表达.结果T淋巴系白血病细胞株的TRF2表达显著高于骨髓单个核细胞和髓系白血病细胞株.在原代白血病细胞中,M0和M1亚型患者白血病细胞TRF2的表达高于其他各亚型急性髓系白血病(AML)患者.结论预后差的AML患者和T细胞恶性肿瘤细胞株高表达TRF2,提示TRF2高表达可能和白血病的预后有关.     

胆道结石的溶石疗法

胆道结石,尤其是胆固醇结石的病因已较明了。一般认为,是由于胆汁内胆固醇的过饱和,胆汁酸和卵磷脂的相对减少,破坏了胆汁内脂质的微胶粒的稳定状态,以致胆固醇发生沉淀逐渐形成结石。溶石疗法就是人们根据胆结石的形成机理给患者使用某些药物使结石溶解,达到治愈的目的。近年来国内外应用鹅脱氧胆酸等一系列药物治疗胆石,取得了良好的效果。一、鹅脱氧胆酸:1.作用机理:鹅脱氧胆酸(Chenodeoxycholicacid简称CDCA)能增大胆汁库,提高胆汁中胆汁酸浓度,抑制在肝脏内合成胆固醇的3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A(3-hydroxy-3-methyl     

散发性脑炎合并突发性耳聋1例

散发性脑炎的临床表现复杂,可以精神异常、癫痫发作,肢体瘫痪等为首发症状,易致误诊。但未见合并突发性耳聋报道,我们曾遇到1例,报告如下。患者女,55岁,1985于年5月7日入院。患者于1周前始有发热、恶心、呕吐,在当地卫生院肌注青     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4~+和CD8~+细胞端粒长度及端粒酶活性的研究

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD 4+、CD 8+和CD 19+细胞端粒长度和端粒酶活性变化及其在发病中的作用。方法:用免疫磁珠法,从外周血单个核细胞分离CD 4+、CD 8+和CD 19+淋巴细胞,提取细胞蛋白后,用PCR为基础的端粒酶测定法(T e lom eric repeats am p lification protoco l,TRAP)测定端粒酶活性;Sou thernB lot测定细胞端粒长度。结果:SLE患者CD 4+、CD 8+和CD 19+细胞端粒酶活性均高于正常对照,但只有CD 19+细胞端粒酶活性与正常对照相比差异有显著性(P<0.05)。SLE患者CD 4+和CD 8+淋巴细胞的端粒长度均较正常对照明显缩短,CD 19+淋巴细胞的端粒长度无明显缩短。结论:SLE患者CD 19+细胞端粒酶活性显著增高,维持了细胞端粒长度;而CD 4+和CD 8+细胞端粒酶活性可能不足以维持由于细胞分裂所导致的细胞端粒缩短。