查尔酮对人胃癌BGC823细胞生物学行为影响的初步研究

目的:研究查尔酮对人胃癌BGC823细胞生长抑制、细胞周期阻滞及诱导细胞凋亡的作用,为寻找预防肿瘤药物提供一定的线索.方法:细胞生长抑制采用MTT比色法检测,细胞周期阻滞用流式细胞仪检测,细胞凋亡用流式细胞仪及琼脂糖凝胶电泳检测.结果:浓度为6.25、12.5、25和50μmol/L的查尔酮呈剂量依赖性抑制BGC823细胞增殖.查尔酮诱导细胞凋亡率是对照的2.71、2.79、4.74倍.琼脂糖凝胶电泳可观测到12.5μmol/L、25μmol/L有DNA"梯子"现象.结论:查尔酮可以抑制BGC823细胞生长,并呈剂量-反应关系.查尔酮有将BGC823细胞增殖周期阻滞在G0/G1期趋势,查尔酮可以抑制肿瘤细胞的生长和增殖.     

金属硫蛋白对秋水仙碱致肝毒性的保护作用

秋水仙碱在临床上用于治疗急性痛风性关节炎和某些肿瘤,但是,其半数致死量较低,过量的秋水仙碱可导致消化道反应,肾、骨髓和肝的损害等[1,2].误食含有秋水仙碱的鲜黄花菜也会引起食物中毒[3].金属硫蛋白(metallothionein, MT)是生物体内的一种富含半胱氨酸巯基(-SH)的金属结合蛋白质,具有拮抗有害重金属毒性、抗电离辐射、捕获自由基、抗过氧化应激等功能[4].肝是MT含量比较丰富的器官.本研究利用MT基因敲除小鼠观察秋水仙碱对小鼠肝的毒性,为防治秋水仙碱中毒提供实验依据.     

姜黄素、二苯甲酰甲烷、查尔酮对人胃癌MGC-803细胞生物学行为的影响

目的:观察并比较姜黄素、二苯甲酰甲烷、查尔酮对胃癌细胞MGC-803生长抑制及凋亡的作用.方法:细胞增殖抑制采用MTT法,细胞凋亡采用流式细胞仪(FCM)检测.细胞形态变化采用HE染色、光学显微镜观察并照相.细胞DNAladder采取DNA抽取及电泳分析.结果:MTT显示MGC-803细胞株增殖抑制作用与药物剂量呈正相关.细胞凋亡率在24h内随药物剂量增加呈上升趋势.光镜下显示,经分别用姜黄素、二苯甲酰甲烷、查尔酮配制的12.5μmol/L、25.0μmol/L溶液处理24h后的MGC-803细胞,部分细胞密度变稀疏,体积变大,细胞膜完整或起泡,核仁丰富,核质比增大;DNA电泳显示, 12.5μmol/L、25μmol/L浓度查尔酮溶液处理组均有典型的DNA梯形图像.结论:姜黄素、二苯甲酰甲烷、查尔酮均可通过诱导MGC-803细胞凋亡而抑制其增殖,该作用有剂量依赖性,并导致相应细胞形态、DNA性状改变.     

高效液相色谱法测定小鼠血浆中8-甲氧基补骨脂素及其药代动力学研究

目的：建立小鼠血浆中8-甲氧基补骨脂素（8-methoxypsoralen,8-MOP）的高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）测定方法,并应用于8-MOP在小鼠体内的药代动力学研究。方法：以5-甲氧基补骨脂素为内标,Waters Symmetry-C18柱（250 mm × 4.6 mm,5 μm）分离,等度洗脱,流动相为甲醇-水（体积比55 ∶45）,流速为1.0 mL/min,荧光检测器检测,激发波长与发射波长分别为334 nm和484 nm,内标法定量。60只雄性健康的ICR小鼠随机分为12组,对照组以1%（质量分数）吐温80灌胃给药,其余11组小鼠灌胃给药8-MOP（40 mg/kg）,HPLC法测定给药后不同时间点小鼠血浆中8-MOP的浓度,DAS 2.0软件计算药代动力学参数。结果：小鼠血浆中8-MOP在0.05~10.00 mg/L范围内线性良好（r=0.999 3）, 检出限为0.015 mg/L;高、中、低3种浓度8 MOP的加标回收率为92.5%~100.6%;日内精密度为3.3%~8.2%,日间精密度为3.4%~6.7%;提取回收率为90.9%~92.0%;小鼠血浆样品在－80 ℃下至少可以保存15 d。小鼠灌胃给药后5 min即可在小鼠血浆中检出8-MOP（1.4 mg/L）,给药2 h血药浓度达到最高峰值,且给药后24 h仍可检出（1.1 mg/L）。t1/2为（39.21±3.65） h,Cmax为（2.31±0.02） mg/L,tmax为（2.00±0.00） h,AUC0-t为（33.34±1.19） （h·mg）/L。结论：该方法准确、简便,适用于小鼠体内8-MOP药代动力学研究。     

高效液相色谱法测定小鼠血浆中1,3-二苯-1,3-丙二酮及其药代动力学研究

目的:建立小鼠血浆中1,3-二苯-1,3-丙二酮(1,3-diphenyl-1,3-propanedione,DPPD)的高效液相色谱测定法,应用该方法测定DPPD在小鼠体内的药代动力学参数,并为DPPD的临床应用提供依据。方法:采用正交试验设计法优化小鼠血浆样本的前处理方法,Symmetry C18色谱柱分离,保留时间定性,内标法定量。雄性ICR小鼠灌胃给予DPPD,不同时间点内眦取血,测定DPPD的经时血药浓度。Thermo Kinetica4.4.1软件计算相应的药代动力学参数。结果:小鼠血浆中DPPD浓度在0.05μg/ml～20μg/ml范围内线性关系良好(r0.99);加标回收率为91.7%～102.7%。血浆样品在-80℃冰箱中至少可保存15 d。主要药代动力学参数为:t1/2=3.24±0.78 h,Tmax=2.50±0.42 h,Cmax=1.30±0.84μg/ml,AUC0～∞=6.63±2.80 h.μg/ml。结论:该方法准确、灵敏,适用于DPPD小鼠体内药代动力学研究。     

苯并(a)芘对金属硫蛋白基因敲除小鼠免疫功能的抑制

目的:观察苯并(a)芘[benzo(a)pyrene, B(a)P] 对金属硫蛋白(metallothionei n, MT)基因敲除的转基因小鼠[MT(-/-)]免疫功能的影响 .方法:选用MT(-/-)小鼠和野生型小鼠[MT(+/+)]进行对照,50 mg·kg -1体重的B(a)P 一次腹腔注射染毒后,检测动物对绵羊红细胞(sheep red blood ce lls, SRBC)的体液和细胞免疫功能变化.体液免疫指标为抗体形成细胞(plaque formation cells, PFC)数量.细胞免疫功能指标为迟发型变态反应(delayed-type hypersensitivi ty, DTH)的动物足跖厚度变化 .结果:MT(-/-)小鼠的脾脏重量在S RBC刺激后有明显增加,但在B(a)P染毒后被抑制.B(a)P染毒使MT(-/-)小鼠脾脏的的PFC 数明显减少,PFC抑制率达40.4%;而MT(+/+)小鼠没有观察到上述改变.B(a)P染毒对MT (-/-) 小鼠和MT(+/+)小鼠的细胞免疫反应的DTH未见明显影响.MT(-/-)小鼠和MT(+/+)小鼠的胸腺重量在B(a)P 染毒后都有减轻.结论:MT(-/-)小鼠的体液免疫功能更易被B(a)P抑制.提示MT具有保护小鼠不受B(a)P体液免疫损伤的功能.     

1,3-二苯-1,3-丙二酮对二甲基亚硝胺致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 探讨1,3-二苯-1,3-丙二酮（DPPD）对二甲基亚硝胺（DMN）急性肝损伤的保护作用.方法 小鼠按体重随机平均分为五组,分别为对照组、DMN组和三组剂量组.剂量组分别经口灌胃给予小鼠DPPD 100、200、400 mg/kg体重每日1次,连续4d,然后腹腔注射给予致肝毒性剂量DMN（22 mg/kg体重）.染毒后24h测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和乳酸脱氢酶（LDH）活性;制备肝匀浆,改良Hission法测定肝中还原型谷胱甘肽（GSH）、氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量,TBA法测定肝中丙二醛（MDA）含量;HE染色处理肝脏组织切片,光镜观察病理学改变.结果 与单独给予DMN组相比,给予DPPD组明显改善了DMN引起体重降低的现象,DMN＋DPPD高剂量组[（24.3±1.5）g]与DMN组[（22.7±1.0）g]相比,差异有统计学意义（P＜0.05）;并且显著降低血清中ALT、AST、LDH含量,DMN ＋DPPD高剂量组[ALT：（151±38）U/L,AST：（216±131）U/L,LDH：（1423±813）U/L]与DMN组相比[ALT：（1481±575） U/L,AST：（1155±559） U/L,LDH：（3196±784） U/L],差异有高度统计学意义（P＜0.01）.相比单独给予DMN组,给予DPPD组肝脏病理损伤明显改善,并呈一定的剂量效应关系.进一步研究表明,预防性给予DPPD各组可改善DMN引起的肝脂质过氧化现象,且相比单独给予DMN组,给予DPPD组的GSH/GSSG比值显著增加,DMN＋DPPD高剂量组（10.734±0.572）与DMN组（6.873±0.587）相比,差异有高度统计学意义（P＜0.01）.结论 DPPD可有效抵抗DMN对ICR小鼠肝脏造成的毒性损伤,调动机体抗氧化应激系统为可能的机制..     

姜黄素拮抗亚砷酸钠所致的DNA链断裂损伤

目的观察姜黄素对亚砷酸钠诱发小鼠体内免疫器官细胞DNA链断裂损伤的拮抗作用。方法用单细胞凝胶电泳法。结果亚砷酸钠单独染毒后的DNA链断裂损伤的高峰期各器官不同,脾脏为染毒后1 h,胸腺和骨髓在染毒后3 h。姜黄素拮抗亚砷酸钠引起的各器官DNA链断裂损伤的作用在高峰期明显,表现为彗星细胞百分比降低,并有量效关系。结论姜黄素可以预防亚砷酸钠诱发的小鼠脾脏、胸腺和骨髓细胞的DNA链断裂损伤。     

我国开展动物实验替代方法工作的前景研究(三)--我国开展动物实验替代方法研究的思路及对策

1　我国开展 3Ｒ研究工作的思路国外经过 4 0多年的发展 ,在 3Ｒ研究方面已达到较高的水平。 3Ｒ从它的提出到现在 ,之所以能够不断的丰富和发展 ,与以下几方面因素密不可分。①研究机构的建设和法律、法规的制定 :国外在 3Ｒ理论的普及、教育和 3Ｒ的研究、验证、应用方面已形成一个较完善的科学体系。法规性文件的制定则使 3Ｒ的研究有法可依、有章可循 ;②科研经费的投入 :经费来源是多方面的 ,既有国家经费的投入 ,也有来自企业、私人公司、动物福利或保护组织的资助 ,为 3Ｒ研究提供了雄厚的资金保障 ;③学术刊物和科普出版物 :在宣传…     

多环芳烃对金属硫蛋白缺欠小鼠微核及红细胞的影响

目的：观察两种致癌性多环芳烃化合物二甲基苯蒽（DMBA）和苯并（a）芘（BaP）对小鼠髓多染红细胞微核发生和血液循环中红细胞数量的时相影响以及金属硫蛋白的可能拮抗作用。方法：选用雄性金属硫蛋白（MT）基因敲除的转基因小鼠[MT(-/-)]和野生型小鼠[MT( / )]。在DMBA和BaP各50mg/kg1次腹腔注射染毒后24、48、72和144h，观察动物骨髓多染红细胞中的微核细胞发生率和外周血液循环中红细胞数量的变化。结果：DMBA和BaP均能引起两种小鼠骨髓多染红细胞微核发生增加和外周血液循环中红细胞数量减少。DMBA诱导微核发生的高峰在48h。在同种小鼠内DMBA诱导的微核细胞发生率大于BaP。在DMBA染毒48和72h后MT（－／－）小鼠的微核细胞率明显大于MT（＋／＋）小鼠，而在BaP染毒后两种小鼠之间差异无显著性。在DMBA染毒24h后MT（－／－）小鼠的红细胞数比染毒前明显减少。结论：在该研究 条件下，缺乏MT的小鼠的骨髓多染红细胞微核更易被DMBA诱导和发生红细胞数量减少。提示MT具有一定保护DMBA所致遗传损伤和红细胞系统损伤的功能。