血小板反应素-1对淋巴管内皮细胞生成的影响

目的寻找一种安全、有效、实用的淋巴管生成抑制剂。方法取健康猪的胸导管内皮细胞进行培养,通过划线刮除法和MTT法来判定血小板反应素-1(thrombospondin-1,TSP-1)对细胞是否有抑制作用。结果应用划线刮除法,对对照组与实验组的细胞数及细胞游走距离进行统计学分析,两者P值﹤0.01;采用MTT法,对对照组与实验组吸光光度值进行统计学分析相比较,P﹤0.01。结论TSP-1对淋巴管内皮细胞的增殖和游走有明显的抑制作用,且有剂量依赖性。     

家兔喉淋巴管的超微结构

目的 观察家兔喉毛细淋巴管内皮细胞的超微结构,探讨喉淋巴生成途径.方法 半薄切片光镜观察,超薄切片透射电镜观察,计算机图像分析.结果 喉内毛细淋巴管内皮细胞连接有3种类型,端端连接占24.26%.插入连接占26.48%,重叠连接占49.26%,处于开放状态的占2.94%,内皮细胞加接处有特殊粘着装置的占24.26%.内皮细胞内富含质膜小泡,小泡的数密度为135.59±2.68个/μm^3,体密度为0.0595±0.0040,平均直径为76.46±2.64nm.结论 喉淋巴液的生成可能以毛细淋巴管内皮细胞间的开放连接所形成的通道作用为主,以内皮细胞胞质内的转运质膜小泡的作用为辅.     

山奈酚对糖尿病性微血管内皮细胞RAGE表达的影响

目的:观察山奈酚(kaempferol)对糖尿病性心肌病微血管内皮细胞AGE受体(RAGE)表达的作用。方法:体外原代培养心脏微血管内皮细胞,采用牛血清白蛋白糖基化终末产物(BSA-AGEs)(100mg/L)与山奈酚(2μM,10μM,50μM)作用于心脏微血管内皮细胞(24h),免疫组化法和western法检测RAGE蛋白表达。结果:随着山奈酚浓度的增加,RAGE蛋白表达逐渐减少(P<0.05)。结论:山奈酚能够抑制AGEs诱发的心脏微血管内皮细胞RAGE的表达,从而进一步抑制氧化应激的发生。     

RNA干扰沉默 NS 基因对人非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究RNA干扰沉默核干细胞因子（nucleostemin, NS ）基因表达对人肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响。方法：向A549细胞内分别转染靶向 NS 基因的siRNA表达载体pcDNA4/C-NS-silencer和空载体pcDNA4/C vector作为silencer组和vector组,以不转染质粒的A549细胞为normal组,Real-time PCR检测转染pcDNA4/C-NS-silencer对A549细胞内 NS 基因表达的影响。CCK-8法检测沉默 NS 基因对A549细胞增殖的影响,流式细胞术检测对细胞周期的影响,Hoechst33258核染色法和流式细胞术检测对细胞凋亡的影响。结果： Silencer组 NS 基因表达较vector组和normal组明显被抑制（0.166±0.024 vs 0.497±0.022、0.505±0.032, 均 P <0.01）;Silencer组A549细胞增殖活性显著低于vector组和normal组 (0.518±0107 vs 0.855±0.102、0.832±0.158,均 P <0.05);Silencer组A549细胞周期阻滞于G0/G1期;Silencer组细胞核皱缩呈致密浓染,染色质碎裂呈块状并有边集现象,且细胞凋亡率较vector组与normal组显著增高\[(34.80±6.77)% vs (9.70±150)%, (8.16±2.01)%, P <0.01\]。 结论： RNA干扰沉默 NS 基因可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

Nucleostemin特异性RNA干扰联合化疗药物对人食管癌细胞株Eca-109的作用

目的:探讨Nucleostemin(NS)特异性RNA干扰(RNAi)联合4种化疗药物对人食管癌细胞株Eca-109生长的影响。方法:NS特异性RNAi表达载体转染Eca-109细胞;实验分为沉默组、正常组、单纯用药组和联合用药组,提取各组肿瘤细胞总RNA,用RT-PCR方法检测NS的表达;利用镜下细胞形态观察和MTT法检测各组细胞的增殖情况。结果:联合用药各组NS基因表达量低于单纯用药各组,细胞增殖速率明显低于单纯用药各组,而细胞增殖抑制率明显高于单纯用药各组。结论:4种化疗药物与NS特异性RNAi联合对Eca-109细胞具有一定的协同抑制作用。     

家兔肺内毛细淋巴管的超微结构

目的观察家兔肺内毛细淋巴管的超微结构特征,探讨肺淋巴生成途径。方法半薄切片光镜观察,超薄切片透射电镜观察,计算机图像分析。结果肺内毛细淋巴管内皮细胞内富含质膜小泡,小泡数密度为167.44±2.46个/μm3,体密度为0.0862±0.0040,平均直径为78.64±2.63nm。内皮细胞连接有三种类型,端端连接(9.74%),插入连接(39.82%),重叠连接(50.44%),处于开放状态的占1.77%。内皮细胞连接处有特殊粘着装置的占52.21%。巨噬细胞所经过的内皮细胞迁移通道,一侧淋巴管内皮细胞的质膜完整,而另一侧质膜则不完整,巨噬细胞与淋巴管内皮细胞的彼此接触面缺乏紧密连接和缝隙连接等连接形式。结论肺内淋巴液的生成可能以小泡转运系统为主,肺巨噬细胞及白细胞迁移入淋巴管的通道可能是位于细胞连接处的一侵蚀性通道。     

PPARγ激动剂山奈酚对2型糖尿病大鼠视网膜病变作用研究

目的研究PPARγ激动剂山奈酚对糖尿病大鼠视网膜病变的作用机制。方法高糖高脂饲料喂养加腹腔注射链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,实验组灌胃给予山奈酚50 mg/(kg·d)、100 mg/(kg·d)、200 mg/(kg·d),灌胃给药10周后,酶联免疫吸附法测定各组大鼠血清中IGF-1、E-selectin和VEGF含量,real-time PCR法测定视网膜组织中IGF-1和VEGF的mRNA表达,免疫组化法检测视网膜组织中MMP-2表达。结果与糖尿病模型组大鼠相比,山奈酚治疗组IGF-1表达呈上升趋势,VEGF、E-selectin和MMP-2表达有所降低,且存在显著性差异。结论山奈酚可通过上调IGF-1表达、下调VEGF、E-selectin和MMP-2表达,发挥对糖尿病视网膜微血管病变的保护作用。     

PKC/NADPH氧化应激途径对大鼠心脏微血管内皮细胞eNOS脱偶联的影响

目的 观察体外原代培养大鼠心脏微血管内皮细胞内PKC/NADPH氧化应激途径在eNOS脱偶联中的作用.方法 用牛血清白蛋白糖基化终末产物(BSA-AGEs)(100 mg/L)与LY33531(PKC抑制剂)和DPI(NADPH抑制剂)分别作用大鼠心脏微血管内皮细胞(24 h),HPLC法检测BH4,试剂盒检测NO和O2-生成,免疫组化检测eNOS蛋白表达,Western blot法检测P47phox蛋白表达.结果 随着LY33531和DPI浓度(5、10和20 μmol/L)的增加,eNOS脱偶联状态减轻:NO生成逐渐增加(90.7 ±0.3～122.6 ±0.3,160.6 ±0.6,P＜0.05),而O2-生成逐渐减少(P＜0.05),eNOS表达逐渐减少(126.1 ±3.5 ～ 112.6±1.7,114.4 ±1.8,P＜0.05),而BH4含量逐渐增加(P＜0.05).同时,ROS表达和P47phox表达减少(P＜0.05).结论 NADPH氧化应激途径可能参与AGEs诱导的心脏微血管内皮细胞eNOS脱偶联的发生.而AGEs诱导的心脏微血管内皮细胞内NADPH氧化应激的发生是依赖PKC激活的.     

基底膜特殊显色反应在淋巴管研究中的应用

在淋巴管的研究中，以往多用5’-Nas-Alpase双重染色的酶组化法和Ⅳ型胶原蛋白及Laminin免疫组化法来区分淋巴管与血管。近年来，由于淋巴管的特异性标记物如LYVE-1，prox-1，podoplanin和D2—40等的发现，使得应用免疫组织化学显色法区分淋巴管与血管变得更为客观，但以上反应条件限制较严格，试剂较贵，很难应用于日常教学用淋巴管的显示，基底膜特殊显色反应一般用于观察毛细血管，用此法鉴别血管与淋巴管尚未见报道。