转基因成分重组克隆质粒的获得及应用

为了获得转基因成分的重组克隆质粒,并以其作为转基因产品检测时的阳性对照,用PCR扩增、测序鉴定外源cryIA(b)基因后,将此基因转化到先前构建的已含植物内源基因和多种转基因成分的质粒pBER中,对获得的重组克隆质粒pCBER的工作浓度和作为阳性时照的实际应用情况进行了测试.结果表明外源cryIA(b)基因被成功克隆,获得的重组克隆质粒的适宜工作浓度为100pg/μL;将获得的重组质粒作为转基因产品检测时的阳性对照是可行的,具有稳定可靠、使用方便等优点.     

15种常见食(药)用菌的3种总DNA提取方法比较研究

本文研究了15种主要食(药)用菌共16个样品的3种总DNA提取方法之比较，它们分别是CTAB法、食品DNA提取试剂盒法和QIAGEN试剂盒法。提取结果分别经过核酸蛋白分析仪、电泳以及RAPD检测。紫外检测结果表明3种方法提取到的总DNA质量均不理想，电泳结果表明3种方法均能提取出小平菇、红菇、香菇、双孢蘑菇、竹荪、黑木耳、姬松茸等7种食(药)用菌总DNA，RAPD检测结果表明CTAB法适用于所有15种食(药)用菌提取用于PCR的总DNA。根据以上结果，我们认为可以选用CTAB法作为在检测这些食(药)用菌的转基因成分时的总DNA提取方法。     

胶体金免疫层析法测定牛羊肉中掺杂鸡肉

目的建立胶体金免疫层析法快速检测牛羊肉中掺杂鸡肉的方法。方法采用柠檬酸三钠制备胶体金溶液,以真空干燥的方式制备有金标抗体的微孔试剂,将鸡IgY包被于硝酸纤维素膜(NC膜)的检测线(T线),兔抗羊抗体包被于硝酸纤维素膜(NC膜)的质控线(C线),向硝酸纤维素膜依次贴上吸水纸和样品垫,切条组装成试纸条。样品经磷酸盐处理,加入至金标抗体的微孔中,用试纸条检测,胶体金分析仪检测T/C线的颜色信号。结果该方法对牛羊肉中掺入鸡肉的检出限为3%,重复性和特异性较好,其他动物组织对其无干扰,检测时间仅需要15 min。结论该方法操作简便,具有较高的灵敏度和特异性,适用于牛羊肉中掺杂鸡肉的现场快速筛查和检测。     

玉米及其制品中转基因成分的单一 PCR及多重PCR检测

采用CTAB法提取玉米及其制品的总DNA，用PCR方法检测其中的转基因成分如花椰菜花叶病毒（Cauliflower mosaic virus，CaMV）35S启动子、根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）胭脂碱合成酶甚因（nos）终止子、根癌农杆菌CP4菌株的EPSPS基因、吸水链霉菌（Treptomyces hygroscopicus）bar基因及苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种（Bacillus thuringiensis subsp．kurstaki）crylA（b）基因，筛选到阳性样品，并建立了几组玉米内源zein基因和转基因成分之间的多重PCR检测方法。结果表明，建立的多重PCR方法用于同时检测玉米内源基因和转基因成分是可行的，值得推广；虽然我国还未有己获准商品化生产的转基因玉米，但国外转基因玉米已流入福建省。