人FcεRIα亚基细胞外区的原核表达及其和IgE结合的机制

应用两种不同的表达系统对FceR I α亚基的细胞外区进行克隆和表达,表达产物经纯化后用免疫斑点杂交法检测其与IgE结合的能力,探索IgE与其高亲和力受体FceR I α亚基的细胞外区结合的机制。结果两种体系均成功表达出FceRI α亚基的细胞外区,pBAD/gⅢA表达的FceR I α亚基的细胞外区能与IgE结合,而PQE30表达的FeaR I α亚基的细胞外区不能与IgE结合。提示FccR I α亚基的细胞外区已足够和IgE结合,无需β、γ亚基的存在,其所具有的一定的空间构型和二硫键的形成在与IgE结合时是必需的,而糖基化位点在与IgE的结合时是非必需的。     

F-PSA、T-PSA及其比值与前列腺疾病的关系

血清前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)检测被公认为诊断前列腺癌的最具临床价值的标志物,但其仅对前列腺组织特异而并非对前列腺癌特异[1],因此,前列腺良性疾病及其他因素也可导致血清PSA升高,检测PSA作为早期诊断指标缺乏足够的特异性和敏感性,采取同时检测血     

他克莫司在临床检测中的方法学比较

目的通过方法学比较为临床推荐一种更精确可靠的检测方法并为临床用药提供科学客观的参考依据。方法以目前常用的酶联免疫法（ELISA）和微粒子酶免疫（MEIA）技术，检测58例肝移植和肾移植患者血清中他克莫司的浓度，比较两者间的相关性。结果统计分析显示两种方法之间有较好的相关性（r=0.972），但两组结果比较有显著性差异（P〈0.01），MEIA法检测值普遍比前者高。结论两种方法之间有较好的相关性，适合临床批量样本测试。但两种方法的检测结果没有可比性，不应互相比较。     

免疫学在临床医学中的应用(六)——免疫复合物病及其实验诊断

免疫复合物(Immune Complex lC)是某种抗体与相应的抗原特异性结合或兼有补体成份附着而形成的复合体。由免疫复合物形成、沉积所引起或密切相关的疾病称为免疫复合物病(ImmuneComples Diseases ICD)。IC 通常以二种形式存在,一是游离于体液、血液中,二是在特定条件     

抗HBs Fab-IFNα融合蛋白的制备与初步鉴定

目的构建抗HBsAg的pComb Fab-IFNα载体,原核表达具双重生物活性的抗HBs Fab-IFNα融合蛋白。方法以pBAD-Fab和pBADIFNα作为模板,分别扩增Fd、λ和IFNα基因,经相应的限制性内切酶酶切后分3次克隆入pComBHss质粒,转化XL-1 Blue大肠埃希菌。限制性酶切和测序鉴定重组质粒,免疫蛋白印迹(Western blotting)和斑点印迹(Dot blotting)鉴定融合蛋白的表达及抗原结合活性。结果重组载体的酶切、电泳及测序表明抗HBs Fab-IFNα基因克隆正确。表达产物经12%SDS-PAGE电泳、转印,Western blotting显示该融合蛋白分子量约为65kD,Dot blotting显示其与HBsAg具有结合能力。细胞病变抑制法测定IFNα生物学活性为7.8×104~5.1×105U/ml。结论该原核系统成功表达了抗HBs Fab-IFNα融合蛋白,表明其既具有抗HBsAg结合能力,又具备IFNα的生物活性,为进一步的系统表达和应用研究提供了条件。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中趋化因子及其受体CCR6 mRNA的表达及其临床意义

目的探讨原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中CC型趋化因子配体20（CCL20）和CC型趋化因子受体6（CCR6）mRNA的表达及临床意义。方法采用TaqMan荧光探针技术,建立实时荧光定量PCR的方法,分别检测50例PBC患者、50例乙型肝炎肝硬化患者及50例健康对照者PBMCs中CCL20和CCR6 mRNA的表达水平。结果 PBC患者中CCL20和CCR6的mRNA表达显著高于健康对照组和疾病对照组（P〈0.01）;并根据临床不同分期检测后发现,PBC患者中Ⅲ、Ⅳ期CCL20和CCR6 mRNA的表达较Ⅰ、Ⅱ期明显升高（P〈0.05）。结论 PBC患者CCL20和CCR6 mRNA的表达与PBC的发生发展存在一定的相关性,可能参与PBC的调控机制,从而可能为PBC的诊断和预防提供一定的线索。     

肿瘤标记物CA125测定及其临床意义

ＣＡ１２５是目前最常检测的肿瘤标志物之一,对某些器官的恶性肿瘤,尤其是卵巢癌有重要辅助诊断价值。本文ＣＡ１２５的测定采用ＯＣ１２５单克隆抗体微粒子酶免疫技术检测人血清中ＣＡ抗原决定簇。ＯＣ１２５是用人浆液性囊腺癌细胞系ＯＶＣＡ４３３免疫的小鼠脾细胞与鼠骨髓瘤细胞杂交获得［１］,该单克隆抗体能与多数非粘液性卵巢癌和上皮性卵巢癌细胞系所表达的ＯＣ１２５抗原决定簇反应。正常细胞系、胎儿、成人的正常组织或良性卵巢组织无ＯＣ１２５抗原［２］,因此是检测卵巢癌的一项特异性较强的指标。测定用所有血清均来自住院…     

基因工程技术制备人源抗HBsAg抗体Fab片段

将从抗体文库中筛选出的抗HBsAg Fab阳性克隆转化大肠肝杆菌 ,IPTG诱导表达 ,经Western blot鉴定 ,证实上清中含有可溶性抗HBsAg Fab片段 ,应用自制的羊抗人免疫球蛋白片段抗体 (anti Fab )与Gama bind交联制备的亲和层析柱纯化表达产物 ,所得纯化产物在SDS PAGE中形成单一条带 ,经Western blot证实具备良好抗原特异性 ,Dot blot证实具备良好抗原结合活性。     

中国汉族人IgE重链恒定区CH2-CH4 cDNA的克隆

人血清中高水平的IgE是哮喘、过敏性鼻炎、慢性荨麻疹等过敏性疾病的标志,而IgE与效应细胞上的IgE高亲和力受体(FcεRⅠ)结合则是这些Ⅰ型变态反应的关键步骤[1].     

非竞争性ELISA法测定人源抗HBaAg Fab功能性亲和常数

目的 测定完全人源化基因工程抗体HBsAg Fab的亲和常数。方法 采用非竞争性ELISA同相法，经确定最佳抗原包板浓度、最佳抗原包板时间及最佳抗原与抗体结合反应时间后，得到了HBsAg与抗体片段抗HBsAg Fab及完整抗体抗HBsAg IgG的抗原抗体结合反应曲线，计算出抗HBsAg Fab及抗HBsAg IgG的亲和常数。结果 人源基因工程抗体抗HBsAg Fab的功能性亲和常数在10^7～10^8M^-1水平，比完整抗HBsAg IgG仅仅小约1个数量级(10^8～10^9M^-1)。结论 该基因工程抗体与抗原结合能力较强，为今后开发府用Fab进行牛物导向治疗提供了理论基础。