重组逆转录病毒载体携带乙型肝炎病毒载体的构建与表达

目的 探索利用逆转录病毒载体表达HBV载体的可能性及复制缺损性HBV能否被正确包装。方法 在逆转录病毒载体中插入表达显性阴性突变体的HBV基因复制单元，制备重组逆转录病毒后分别用以感染Hep G2和2．2．15细胞，免疫荧光法检测细胞内HBV核心抗原的表达，PCR检测上清液中重组HBV颗粒。结果 在包装细胞系PA317中能形成较高滴度的重组逆转录病毒，用以感染Hep G2细胞后，可检出核心抗原的表达。感染2．2．15细胞后，在培养上清液中能检测出突变型HBV颗粒。结论 重组逆转录病毒能携带HBV载体在细胞内表达，并在有野生型HBV提供结构蛋白的前提下，发挥HBV载体的功能，可望用于抗HBV基因治疗。     

C基因截短型HBV载体的复制、包装与表达

目的 探索C基因截短型重组HBV载体的复制、包装和表达。方法 采用分子克隆、定点突变技术构建C基因截短型HBV载体；瞬时转染HepG2细胞，在荧光显微镜下观察外源目的基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达；提取转染细胞胞内、胞外DNA分别进行半巢式聚合酶链反应(PCR)、非变性凝胶电泳杂交技术、sourhern blot杂交定量分析及常规PCR等分析，检测重组HBV载体的复制、包装及子代病毒的生成。结果 经酶切鉴定，C基因截短型HBV载体构建成功；转染HepG2细胞，外源目的基因能够高效表达；在辅助载体的辅助下，C基因截短型HBV载体能够在肝细胞进行复制，包装，通过定量分析，C基因截短型HBV载体的包装效率比C基因非截短型HBV，载体提高4～8倍；另外，C基因截短型HBV载体可以在辅助载体的辅助下包装成携带外源目的基因的子代病毒颗粒分泌到胞外。结论 C基因部分截短不影响HBV载体外源基因的表达和病毒的复制，而且可以提高载体的包装效率。     

IL-2和IL-12联合基因治疗小鼠肝癌的实验研究

目的探讨瘤内注射共表达mIL-12和hIL-2质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用.方法构建pDC511hIL2-mIL12、pDC511mIL-12、pDC511hIL-2真核表达质粒载体;ELISA方法检测各组质粒在真核细胞的表达;小鼠肝癌H22皮下移植瘤瘤内注射各组质粒DNA后,检测不同时间血清中细胞因子浓度;观察各组小鼠存活时间,肿瘤大小变化;并检测各组小鼠脾脏细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL)活性.对各治疗组在质粒DNA注射后一月进行瘤体组织学观察.结果酶切鉴定各组质粒载体,均示构建成功,并能在真核细胞内高效表达相应细胞因子.瘤内注射各组质粒载体后,pDChIL2-mIL12组在不同时间表达的hIL2和mIL12分别与pDC511hIL2 组(F=71.11,P<0.01)、pDC511mIL12组 (F=30.70,P<0.05)比较有显著性差异.mIL-12基因和hIL-2基因联合治疗组,肿瘤生长明显受抑制,疗效显著优于各单独治疗组和对照组(P<0.05),并且小鼠脾细胞CTL杀伤活性增强.双基因联合治疗组,病灶内肿瘤细胞坏死明显,炎性细胞广泛浸润.结论 IL-12、IL-2基因治疗可抑制小鼠肝癌H22皮下移植瘤的生长,提高机体的抗肿瘤免疫应答,两者联合运用可产生协同效应.为进一步运用高效基因导入技术进行肝癌基因治疗研究提供初步的实验依据.     

白细胞介素-12治疗小鼠肝癌的实验研究

白细胞介素(IL)-12能诱导T细胞和自然杀伤细胞(NK)细胞产生多种细胞因子，促进细胞毒性T淋巴细胞(CTL)增殖和功能的活化。本实验以瘤内注射表达mIL-12质粒DNA的方式，初步探讨IL-12基因治疗肝癌的作用。     

基因重组HBV的构建及其表达反义RNA抗-HBV作用的研究

目的　探索利用乙型肝炎病毒 (HBV)作为基因治疗载体的可能性及检验其表达反义RNA抗HBV的作用。方法　在表达完整HBV颗粒的质粒上 ,经基因修饰后分别表达S或S启动子区的反义RNA ,整合于具有HBV复制的 2 .2 .15细胞 ,形成细胞克隆 ,酶联免疫吸附 (ELISA)法检测细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg ,斑点杂交法检测细胞内HBV核壳中HBVDNA ,聚合酶链反应(PCR)法检测上清液中重组HBV颗粒。结果　 2 .2 .15 pMEP4组、2 .2 .15 SAS组和 2 .2 .15 PAS组对HBsAg平均抑制率分别为 (2 .74± 3.83) %、(6 6 .5 4± 4 .4 5 ) % (P <0 .0 1)和 (5 5 .18± 3.2 7) % (P <0 .0 1) ;对HBeAg平均抑制率分别为 (4 .4 6± 4 .2 5 ) %、(2 6 .36± 1.6 9) % (P <0 .0 1)和 (6 5 .5 4± 3.2 2 ) % (P <0 .0 1) ;对HBV复制的抑制率分别为 17.0 %、5 9.9%和 72 .8%。 2 .2 .15 SAS组及 2 .2 .15 PAS组培养上清液中能检测出突变型HBV颗粒。结论　经过对HBV基因组的两处改造 ,分别在细胞内表达S区及S启动子区反义RNA具有干扰HBV复制及抑制HBV抗原表达的作用 ;在 2 .2 .15细胞中野生型HBV辅助下 ,仍能包装并分泌完整的HBV样颗粒     

乙型肝炎病毒X基因的蛋白产物对HLA-DR表达的效应

目的 了解HBVX基因蛋白产物对HLA-DR表达的效应。方法 用野生型HBVX基因与真核载体质粒构建重组表达载体质粒pWHXⅡ转染HepG2细胞。用PCR、Southern印迹，ELISA及Western印迹等分析鉴定目的基因DNA片段与其在转染细胞中的表达产物HBVX蛋白，将带重组质粒pWHXⅡ的HepG2细胞的和带有HBV全基因组的2.2.15细胞，在相同条件下用间接免疫荧光分析和免疫酶细胞化学技术检测。结果 在转染的HepG2细胞和2.2.15细胞表面均清晰地显示有HLA-DR表达，而对照组即不带质粒或只带载体质粒的HepG2细胞则用同法不能在其表面检出HLA-DR的存在。结论 证明HBVX蛋白能在无炎症和外界因素存在下，单独诱导HLA-DR的表达，提示HBVX蛋白有参与乙肝免疫反应机制的可能性。     

蒙古国人丙型肝炎患者HCV RNA检测及基因型的研究

目的通过检测丙型肝炎病毒基因分型,探讨蒙古国抗-HCV阳性患者血清中HCV基因型流行株特征。方法采用基因芯片法对蒙古国183例抗-HCV阳性患者血清标本进行基因型检测,同时检测相关病毒学及肝功能生化指标,分析基因型分布特点和临床意义。结果 183例抗-HCV阳性患者中HCV RNA阳性134例(73.2%),其中基因1b型68例(50.7%),2a型59例(44.0%),并有少量的1a、3a、1b+2a和其它3例混合型。结论抗-HCV阳性并非HCV感染直接标志,蒙古国感染HCV患者的基因型以1b和2a型为主,比例基本相当;基因型在性别上人群分布差异无统计学意义。     

血清GP73检测在原发性肝癌诊断中的价值

目的探讨血清中高尔基体蛋白73(GP73)对原发性肝癌(PHC)诊断的临床意义。方法应用ELISA法和化学发光免疫分析法分别对85例肝细胞癌、57例慢性肝炎、48例肝硬化和30例健康对照者血清中GP73及AFP进行定量检测。结果 GP73和AFP检测在肝癌组对PHC诊断的敏感度分别78.83%和64.71%;两者联合检测敏感度可提高至92.94%。结论 GP73对PHC诊断具有较好的敏感度,GP73和AFP联合诊断更有利于提高PHC的临床诊断。     

透射电子显微镜超薄切片机的原理及常见故障维修

超薄切片机是透射电子显微镜样品制作专用必备精密仪器,其机构看似简单,但对机械加工精度高、金属材料选择十分苛刻。尽管国内有些厂家试图仿造该仪器,至今鲜有成熟产品出现。目前,国内透射电镜样品制作仍大多使用LKB和Nova超薄切片机。     

武威汉简百病膏药方治疗胃溃疡临床观察

目的 分析武威汉简百病膏药方治疗胃溃疡临床效果。方法 选取2021年4月—2023年4月于医院脾胃病科门诊及住院治疗的胃溃疡患者100例为研究对象,并将其随机分成对照组50例、观察组50例。其中,对照组采用良附丸结合综合治疗,观察组则是选用“武威汉简”百病膏药方颗粒剂结合综合治疗,比较两组的胃肠激素水平、炎性因子水平、不适症状疗效、中医证候疗效、临床疗效的变化情况。结果 治疗后,两组的表皮生长因子(EGF)、转化生长因子-α(TGF-α)、胃动素(MTL)水平有所升高,胃泌素(GAS)、白介素-17(IL-17)水平有所降低,且研究组较对照组改善情况良好(P<0.05)。研究组不适症状的总有效率比较于对照组较低(P<0.05)。与对照组比较,研究组的中医证候疗效明显下降,临床的治疗总有效率明显上升(P<0.05)。结论 通过使用武威汉简百病膏药方可有效提升胃溃疡患者的临床疗效,效果显著,能有效降低炎性反应,改善胃肠激素水平,减缓中医证候,避免不良症状发生,具有一定的临床意义。