叶下珠、干扰素治疗慢性低酶型乙型肝炎的疗效观察

目的探索叶下珠、干扰素α-2b(IFNα-2b)不同组方治疗慢性低酶型乙型肝炎的临床治疗效果。方法用叶下珠片治疗低酶型乙型肝炎152例,3个月内ALT升高达1000U/L以上者,随机分为叶下珠继续治疗组(Ⅱa组),加用IFNα-2b组(Ⅱb组),改用IFNα-2b组(Ⅱc组),仍属低酶者设为对照组(Ⅰ组)继续应用叶下珠,Ⅰ组、Ⅱ组所有患者在相同条件下,采用不同方案继续治疗6个月。结果Ⅱa、Ⅱb、Ⅱc组均在ALT复常,HBeAg阴转,抗-HBe阳转,HBVDNA阴转方面优于Ⅰ组(P<0.05);Ⅱb、Ⅱc组明显优于Ⅰ组(P<0.05);Ⅱb、Ⅱc之间无差异(P>0.05)。结论慢性低酶型乙型肝炎患者应用叶下珠初始治疗,在ALT升高达100U/L以上,适时加用或改用IFNα-2b治疗慢性乙型肝炎可获得满意的临床疗效。     

C基因截短突变体抗乙型肝炎病毒作用机制的研究

目的 探讨C基因截短突变体抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用机制。方法 构建C基因截短的真核表达载体pcDNA3-△C及野生型C基因真核表达载体pcDNA3-C，瞬时转染HepG2细胞，用SDSPAGE western blot检测pcDNA3-△C、pcDNA3-C的蛋白表达。pcDNA3-△C与adwR9共转染HepG2细胞，以pcDNA3与adwR9为对照，用荧光定量PCR检测培养上清液及细胞内病毒量，用Native western blot分析C基因截短蛋白干扰核心颗粒形成。结果重组载体pcDNA3-△C、pcDNA3-C均可表达，DcDNA3-△C与adwR9共转染组上清液和细胞内病毒量较对照组降低，pcDNA3-△C和pcDNA3-C共转染组Native western blot条带与pcDNA3和pcDNA3-C共转染组条带相比较明显淡。结论 C基因截短突变体可干扰核心颗粒的形成，导致HBV复制下降。     

血清透明质酸Ⅲ型前胶原Ⅳ型胶原及脯氨酸肽酶对肝组织纤维化诊断的意义

探讨肝病患者血清透明质酸（HA），Ⅲ型前胶原（PCⅢ），型胶原（CⅣ）及脯氨酸肽酶（PLD）水平与肝纤维化程度的关系。用酶联免疫（ELISA）法及生化比色法检测225例各种肝病患者血清中HA、PCⅢ、CⅣ及PLD水平，并与肝活检病理炎症分级和纤维化分期相比较。四项指标与肝组织炎症坏死及纤维化程度均呈显著相关（P〈0．05）。HA、PCⅢ及CⅣ与肝纤维化相关性高于炎症，PLD与炎症的相关性高于纤维化。血清学指标与肝组织病理病变程度一致，联合检测肝病患者血清HA、PCⅢ、CⅣ及PLD水平，既可反映肝纤维化严重程度，又能了解肝坏死情况，为临床诊断治疗提供参考。     

3种粪便隐血检测试剂在结直肠癌筛查中的性能评价与比较

目的：探讨检测粪便中血红蛋白（Hb）和转铁蛋白（TF）对诊断消化道出血性疾病及结直肠癌筛查中的临床应用价值。方法分别采用联合免疫法、单克隆抗体法和 Quick chaser 法对有消化道出血性疾病的患者粪便样本进行检测,同时结合患者临床资料,对检测结果的一致性程度进行综合分析,初步评估其临床应用价值。结果联合免疫法、单克隆抗体法和 Quick chaser 法检测血红蛋白的灵敏度分别为0．2、0．4和2μg/mL,单克隆抗体法仅对人的血红蛋白发生反应,联合免疫法和 Quick chaser 法对人和动物的铁蛋白和血红蛋白均发生反应。结论联合免疫法灵敏度高、特异性强,对于诊断消化道出血性疾病及结直肠癌的诊断具有重要的参考价值。     

未接受抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者多聚酶P基因YMDD变异检测

目的 了解未经拉米夫定及干扰素抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中HBV多聚酶YMDD变异情况。方法 应用错配PCR扩增方法检测病人血清HBV的YMDD位点，选择65例病史超过半年以上、肝功能异常、HBV DNA阳性的慢性乙型肝炎患者。结果 在65例患者中，YMDD变异阳性6例(9．07％)，阴性59例，6例变异中2例为YIDD阳性，其中1例为YMDD野毒株和变异株混合存在，4例为YYDD阳性，其中1例为YMDD野毒株和变异株混合存在。结论 本检测方法简便、实用，在未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中可存在YMDD变异株，其与野生株一样是自然存在的。     

以乙型肝炎病毒为载体的基因治疗研究

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)作为肝靶向性基因治疗载体的可能性。方法 用外源报告基因绿色荧光蛋白(GFP)取代HBV S基因读码框构建重组HBV载体,通过脂质体转染HepG2细胞,荧光显微镜下观察外源基因的表达,半巢式聚合酶链反应(PCR)检测细胞核内HBV 共价闭合环状DNA构型,常规PCR和Southern杂交检测上清液重组病毒DNA。结累 携带外源基因GFP的重组HBV载体能够在肝细胞内表达外源蛋白,此重组载体为复制缺损型,单独转染后不能在肝细胞包装与复制,在缺失包装信号ε的辅助HBV质粒下可被包装成携带外源基因的成熟重组HBV颗粒并分泌到胞外。结论 HBV可被改造成肝靶向性基因治疗载体。     

药物治疗过程中乙型肝炎患者血清病毒外膜大蛋白与病毒核酸的检测分析

目的探讨阿德福韦酯(ADV)抗病毒治疗慢性乙型肝炎(CHB)过程中,患者血清中乙型肝炎病毒大蛋白(LHBs)和乙型肝炎病毒(HBV)DNA载量的相关性及临床意义,评价LHBs在ADV抗病毒治疗中的应用价值。方法将117例CHB患者分为HBeAg阳性组49例,HBeAg阴性组68例,分别给予ADV 10 mg,口服,每日1次,治疗96周。采用ELISA法检测LHBs和HBV免疫标志物(HBV-M);采用实时荧光定量PCR法检测HBV DNA。结果抗病毒治疗24、48、72、96周后HBV DNA和LHBs转阴率无明显差别(P>0.05),LHBs水平与HBV DNA拷贝数对数呈正相关(r=0.827);LHBs A值和HBV DNA拷贝数随抗病毒治疗时间的延长同步下降;在HBeAg阳性组46例中HBV DNA、LHBs转阳率分别为58.7%(27/46)、54.3%(25/46),两者差异无统计学意义(P>0.05);在HBeAg阴性组68例中HBV DNA、LHBs转阳率分别为48.5%(32/66)、65.2%(43/66),两者差异有统计学意义(P<0.01)。结论 LHBs是判断HBV体内复制的可靠指标,尤其对判断HBeAg阴性患者体内病毒复制及预后评价具有重要价值。     

阿德福韦酯联合复方鳖甲软肝片治疗乙型肝炎肝硬化的临床观察

目的观察阿德福韦酯联合复方鳖甲软肝片治疗乙型肝炎肝硬化失代偿期的疗效和安全性。方法 78例乙型肝炎肝硬化失代偿期患者随机分为阿德福韦酯与复方鳖甲软肝片联合治疗组及单用阿德福韦酯对照组,观察48周时两组患者肝功能、Child-Pugh分级及血清HBV DNA自基线下降的水平。结果治疗48周后,治疗组肝功能、Child-Pugh分级及血清HBV DNA自基线下降水平与治疗前比较差异均有统计学意义（P〈0.01）;联合治疗组肝纤维化指标及脾门厚度的下降值均优于对照组（P〈0.01）。结论阿德福韦酯联合复方鳖甲软肝片治疗失代偿期乙型肝炎肝硬化明显优于单用阿德福韦酯。     

携带免疫刺激DNA序列的载体及人工合成免疫刺激DNA对HBV核心区基因免疫的影响

为慢性ＨＢＶ感染的防治寻求新的高效基因免疫策略。分别构建携带免疫刺激ＤＮＡ序列及不携带免疫刺激ＤＮＡ的ＨＢＶ核心区基因真核表达载体 ,并人工合成免疫刺激ＤＮＡ寡核苷酸 ,分组免疫Ｂａｌｂ/ｃ小鼠 :( 1)Ｖ ＨＢｃ ＣｐＧＯＤＮ组 ;( 2 )Ｖ ＨＢｃ 非ＣｐＧＯＤＮ对照组 ;( 3)Ｖ ＨＢｃ/ＣｐＧ。观察各组小鼠体液免疫应答及细胞免疫应答。结果表明 ,3组免疫鼠血清ＨＢＶ抗体均阳性 ,体外ＣＴＬ活力检测 3组小鼠脾细胞对转染ｐＲＳＣ ＨＢＶ的ＳＰ2 / 0细胞的细胞毒活性明显高于其他组 (Ｐ <0 .0 5) ,荷瘤试验显示第 3组免疫小鼠注…     

C基因截短的HBV复制与包装

目的 探讨C基因截短型HBV变异体的复制与包装。方法 采用分子克隆、人工定点突变等技术构建C基因截短型HBV变异体质粒，用脂质体法转染HepG2细胞，提取细胞内及培养上清液中DNA分别进行Southem杂交，PCR及实时定量荧光PCR分析。结果 经DNA测序及酶切鉴定证实C基因截短型HBV质粒载体构建成功；C基因截短型HBV为复制缺损型，与辅助质粒共转染HepG2细胞，可在细胞内及培养上清液中检测到HBV各种DNA构型；DNA定量分析提示C基因截短型HBV的包装效率较野生型HBV提高3～40倍。结论 C基因截短型HBV变异体为复制缺损型，单独转染后不能在肝细胞内包装与复制，但在缺失包装信号ε的相应辅助病毒辅助下可有效复制并包装成子代病毒颗粒分泌到胞外，且包装效率大大提高。