不同缺氧方法诱导BeWo细胞缺氧诱导因子1α表达的实验研究

【目的】探讨用于滋养细胞缺氧研究的缺氧方法及滋养细胞模型。【方法】滋养细胞来源的BeWo细胞系,分4组培养:正常对照组、低氧浓度组、二氯化钴组和去铁敏组。培养4 8h后收集细胞,应用实时定量PCR方法,检测BeWo细胞HIF- 1αmRNA表达水平;应用Westernblot方法,检测BeWo细胞HIF -1α蛋白的表达水平。【结果】与正常对照组相比,低氧浓度组、二氯化钴组和去铁敏组的HIF- 1α蛋白和mRNA表达均明显升高;与低氧浓度组比较,二氯化钴组和去铁敏组HIF 1α蛋白和mRNA表达水平无明显差异。【结论】环境缺氧和细胞缺氧均可诱导BeWo细胞HIF 1α的表达,二氯化钴或去铁敏可以作为缺氧方法用于滋养细胞缺氧方面的研究,BeWo细胞也可作为一种细胞模型用于HIF -1α表达的研究。     

泰素和顺铂联合化疗治疗卵巢癌免疫功能变化的临床研究

目的探讨泰素联合顺铂治疗卵巢癌对机体免疫功能的影响.方法应用流式细胞仪检测23例经泰素和顺铂联合化疗的卵巢癌患者治疗前后外周血CD3、CD4、CD8、CD16、CD19、CD25的表达率.结果化疗后CD4、CD4/CD8、CD16表达明显下降,相差有显著意义(P<0.05).CD25下降相差有非常显著意义(P<0.01).CD3、CD8、CD19变化相差无显著意义(P0.05).不同临床分期间CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、CD16、CD19、CD25表达化疗前后改变相差无显著意义(P0.05).结论泰素和顺铂联合化疗治疗卵巢癌可损害患者的细胞免疫功能,NK细胞减少,机体的免疫功能活性降低.     

低氧诱导体外培养绒毛组织sFlT-1表达的实验研究

 目的 探讨低氧对体外培养的绒毛组织可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlT-1)表达的影响.方法 孕早期的绒毛组织体外分两组培养:常氧照组和缺氧组.应用RT-PCR方法检测sFlT-1基因mRNA表达水平,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养液中sFlT-1蛋白水平.结果 与常氧组相比,缺氧组绒毛组织的sFlT-1基因mRNA表达水平增加,sFlT-1蛋白水平也增加.结论 缺氧可以诱导体外培养的绒毛组织sFlT-1基因表达,产生sFlT-1增加.缺氧可能是子痫前期胎盘组织sFlT-1高表达的原因.     

RNA干扰沉默HIF-1α基因对宫颈癌HeLa细胞定植和侵袭的影响

目的探讨HIF-1α基因短发夹干扰RNA(shRNA)低氧条件下对宫颈癌HeLa细胞定植和侵袭能力的作用。方法针对HIF-1α基因设计并合成2条寡聚DNA片段,退火后将其克隆入pSilencer2.1-U6-neo质粒中,构建shRNA真核表达质粒,脂质体转染人宫颈癌细胞株HeLa细胞。低氧培养后,应用Western blot和定量PCR法检测HIF-1α蛋白及mRNA表达水平;用软琼脂克隆形成实验和体外侵袭实验检测HeLa细胞的定植和侵袭能力。结果成功构建的HIF-1αshRNA真核表达载体转染宫颈癌HeLa细胞,低氧条件下HeLa细胞的HIF-1α蛋白及mRNA表达下降;同时细胞在软琼脂中克隆形成数和穿透Matrigel膜的细胞数减少。结论HIF-1α的shRNA真核表达载体在低氧条件下可抑制宫颈癌细胞的定植和侵袭能力。     

microRNA-99b表达调控对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨上调microRNA-99b(miR-99b)表达对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的作用及可能的机制。方法:利用转染试剂将Pre-miR-hsa-miR-99b miRNA Precursor转染宫颈癌HeLa细胞,荧光实时定量PCR方法检测miR-99b表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测其靶基因CDC-25A蛋白的表达。结果:转染Pre-miR-hsa-miR-99b miRNA Precursor的HeLa细胞,miR-99b表达增高86.45倍,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率增加,同时细胞CDC-25A蛋白表达降低。结论:上调miR-99b表达可通过降低靶基因CDC-25A表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,miR-99b可能成为治疗宫颈癌的靶基因。     

RNA干扰沉默HIF-1α基因对卵巢癌SKOV3细胞定植和侵袭的影响

【目的】构建针对HIF-1α基因的短发夹干忧RNA真核表达质粒，探讨低氧条件下其对卵巢癌SKOV3细胞定植和侵袭能力的影响。【方法】根据siRNA设计原则，结合psilencer 2．1-U6-neo质粒特点，针对HIF-1α基因设计并合成2条寡聚DNA片段，退火后将其克隆人DSilencer2．1-U6-neo质粒中，采用脂质体法将重组真核表达质粒转染人卵巢癌SKOV3细胞。缺氧培养后，应用实时定量PCR和Western blotting方法检测HIF-1α蛋白及mRNA表达水平；用软琼脂克隆形成实验和体外侵袭实验检测SKOV3细胞的定植和侵袭能力。【结果】成功构建的HIF-1α的短发状siRNA真核表达载体，转染卵巢癌SKOV3细胞，低氧条件下细胞HIF-1蛋白及mRNA表达水平下降；同时SKOV3细胞在软琼脂中形成的克隆数和穿透Matrigel膜的细胞数明显减少。【结论】构建的HIF-1α短发状siRNA真核表达载体，下调卵巢癌SKOV3细胞HIF-1α基因表达，卵巢癌细胞的定植和侵袭能力降低。     

剖宫产术中大出血58例抢救处理

近20年来剖宫产率的上升是国内外产科领域面临的共同趋势。剖宫产是解决难产及高危妊娠的有效办法,但剖宫产手术本身亦隐藏着许多不安全因素。近年来,全国孕产妇死亡率虽有所下降,但产后出血仍是产妇死亡第一位的原因[1]。如何及时有效止血一直是产科处理中的一个重要问题。1临     

S-腺苷蛋氨酸联合熊去氧胆酸治疗妊娠肝内胆汁淤积症疗效观察

目的: 评估两种药物联合应用治疗妊娠肝内胆汁淤积症的效果. 方法: 临床诊断为妊娠肝内胆汁淤积症患者45例,随机分为联合用药组(n=24)和常规用药组(n=21). 联合用药组给予熊去氧胆酸加S-腺苷蛋氨酸治疗, 常规用药组给予能量合剂、维生素及地塞米松治疗. 两组治疗均以10 d为1疗程. 用药10 d后进行临床瘙痒症状、血中胆酸及转氨酶的评价. 分娩后,观察两组的早产率、新生儿体质量和新生儿窒息率. 结果: 联合治疗组治疗后皮肤瘙痒评分、血中胆酸、天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶降低数值分别为: 3.01±0.29, (44±4) μmol/L, (3.13±0.28) μkat/L, (1.85±0.28) μkat/L;早产率、新生儿体质量和新生儿窒息率分别为: 16.7%, (3.4±0.2) kg, 23.6%. 常规用药组皮肤瘙痒评分、血中胆酸、转氨酶降低数值分别为: 1.57±0.23, (22±4) μmol/L, (0.93±0.20) μkat/L, (0.77±0.25) μkat/L;早产率、新生儿体质量和新生儿窒息率分别为: 33.3%, (3.2±0.1) kg, 25.7%. 与常规用药组相比,联合用药组皮肤瘙痒评分、血中胆酸、转氨酶的浓度明显下降(P<0.05);早产率下降(P<0.05),但新生儿体质量及新生窒息率差异无统计学意义(P>0.05). 结论: S-腺苷蛋氨酸联合熊去氧胆酸治疗妊娠胆汁淤积症效果确切,可部分改善围产儿的预后.