PCR-RFLP方法检测医学重要真菌的临床应用研究

目的：建立并应用PCR-RFLP技术区分临床重要真菌的方法，进行实验研究和临床应用。方法：首先根据医学真菌的18SrRNA基因合成了白色念珠菌、热带念珠菌、假热带念珠菌、近平滑念珠菌、解脂念珠菌、新型隐球菌、烟曲霉菌等9种真菌的通用引物；建立鉴定医学真菌的PCR-RFLP方法。通过用白色念珠菌感染大鼠，建立了白色念珠菌感染的实验动物模型。将建立的方法用于临床，并与血培养法和协同凝集试验法进行了比较。结果：PCR-RFLP法的灵敏度高于协同凝集试验和血培养法。经过一年多的临床应用，我们分别用PCR结合限制性内切酶鉴定技术、协同凝集试验法和血培养法检测了118例血液病、肿瘤和其他发热患者的血液标本。应用协同凝集试验（CoA）法检出真菌血症19例，阳性率为16.1%。应用PCR和限制性内切酶技术共有40例检出真菌血症，阳性率为33.9%；其中白色念珠菌血症占真菌血症的65.0%，热带念珠菌感染占17.5%，假热带念珠菌感染占10%，光滑念珠菌感染占5.0%，近平滑念珠菌感染占2.5%，为临床不明原因发热患者寻找病因、进行抗真菌治疗提供了参考依据。结论：该技术具有快速、敏感、不需放射性同位素等优点，而且准确性极高，有着较好的临床应用前景。此技术应用于临床将为血液病、肿瘤和免疫抑制患者的诊断和救治工作起到积极的作用。     

中国黑龙江斑点热立克次体和日本斑点热立克次体基因型和血清型的比较

中国黑龙江斑点热立克次体和日本斑点热立克次体先后被鉴定为斑点热群中的两个新种。通过采用微量免疫荧光方法和聚合酶链扩增／限制性内切酶片段长度多态性分析技术，对两株斑点热立克次体进行了比较。结果显示，黑龙江立克次体抗血清与日本株抗原无交叉反应，黑龙江立克次体抗原与日本株抗血清仅呈低滴度反应。同时采用获自主氏立克次体蛋白抗原Ｒｒ１９０序列的一对寡核苷酸序列作为引物扩增上述两株立克次体后，用限制性内切酶ＲｓａＩ消化扩增产物，其Ｒｒ１９０－ＲｓａＩ图谱说明，两株的酶切带的迁移率明显不同。     

人血小板生成素在大肠杆菌中的高效表达

目的：人血小板生成素（ＴＰＯ）在大肠杆菌中的高效表达。方法：利用ＰＣＲ技术,扩增出了（１－１７４个氨基酸的）人血小板生成素ｃＤＮＡ,并将其克隆到ｐＧＥＸ－１λＴ载体中,构建了融合蛋白表达质粒。重组子用限制性内切酶酶切鉴定。表达产物ＳＤＳ－聚丙烯胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）。结果：限制性内切酶酶切鉴定表明重组子含有正确的（１－１７４氨基酸）ＴＰＯｃＤＮＡ片段;表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ相对分子质量     

霍乱弧菌ctxAB融合基因的克隆及原核表达

目的构建霍乱毒素A亚基基因（ctxA）和B亚基基因（ctxB）的融合表达载体，并在原核系统表达，为霍乱毒素（CT）免疫原性的研究及其作为免疫佐剂的研究提供基础。方法以霍乱弧菌DNA为模板，利用重叠PCR技术，扩增出含有ctxA和ctxB的融合基因片段ctxAB，并与带有硫氧还蛋白（Trx）基因的高效原核表达质粒pET32a（＋）定向重组，构建重组质粒，转化大肠杆菌BL21（DE3）。经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后，以IPTG诱导表达TrxBB—CTAB融合蛋白，用SDS—PAGE及Western blot进行鉴定。结果限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明，扩增出了霍乱弧菌1158bp的ctxAB融合基因，成功构建了重组质粒pET—ctxAB，SDS—PAGE及Western blot分析显示重组质粒pET—ctxAB在原核系统中得到了高效融合表达。结论霍乱弧菌ctxA基因和ctxB基因通过重叠PCR成功地融合在一起，融合基因ctxAB在大肠杆菌中得到了高效表达。     

中国黑龙江省斑点热立克次体和日本斑点热立克次体基因…

中国黑龙江斑点热立克次体和日本斑点热立克次体先后被鉴定为斑点热群中的两个新种。通过采用微量免疫荧光广泛和聚合酶链扩增／限制性内切酶片段长度多态性分析技术，对两株斑点热立克次体进行了比较。结果显示，黑龙江立克次抗血清与日本株抗原无交叉反应，黑龙江立克次体抗原与日本株抗血清仅呈低滴度反应。     

PCR-RFLP技术在布氏菌鉴定与分型中的应用

目的 利用PCR-RFLP技术扩增7株布氏菌临床分离株16S RNA基因片段,为该菌的分子诊断学、遗传学和流行病学研究提供实验依据.方法 参考GenBank公布的布氏菌ATCC 25840标准株序列,设计针对该菌16S RNA保守区的特异性引物,从临床分离培养7株布氏菌,提取DNA并行16S RNA片段的PCR扩增.将PCR产物克隆至PGEM-T载体进行测序并选用合适的限制性内切酶进行RFLP分析,将分析结果用于临床株的同源性及变异位点的研究,并对感染患者的临床资料进行回顾性分析,研究不同布氏菌基因型与感染患者临床特征的相关性.结果 利用PCR扩增出的目的片段与预期一致,大小约为1500bp.测序及同源性分析表明,7株临床分离株之间存在98.88%的同源性和11个变异位点.RFLP结果将7株菌分为4个基因型,临床资料回顾性分析患者不同基因型与临床表现之间无明显联系.结论 利用PCR技术扩增布氏菌16S RNA基因片段可以实现对该菌的早期诊断,为布氏菌的分子遗传学和流行病学提供依据.     

PCR技术在鉴定阳性重组子中的应用

介绍了采用ＰＣＲ技术在人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）、人促红细胞生成素及中国人γ－干扰素（ｈＩＦＮ－γ）ｃＤＮＡ重组质粒的构建过程中快速鉴定阳性重组子的方法。经ＰＣＲ扩增鉴定为阳性的重组子，提取质粒ＤＮＡ经重组位点相应的ＤＮＡ内切酶双酶切鉴定表明，全部含有插入片段。     

聚合酶链反应—酶谱法分型检测人疱疹病毒DNA方法的建立及应用研究

在疱疹病毒高度同源序列DNA聚合酶基因中设计一对引物，能对HSV－Ⅰ、HSV－Ⅱ、EBV和CMV4种疱疹病毒DNA进行扩增，继而用凝胶电泳和限制性内切酶BarnHⅠ或SmaⅠ酶切分析扩增产物进行鉴别，建立了能一次性分型检测上述4种病毒的POR－酶谱法。敏感性和特异性试验表明，灵敏度可测到1fgDNA，相当于6个病毒颗粒，且引物仅对4种疱疹病毒扩增。对影响PCR效果的有关因素如Mg2＋浓度、引物浓度、循环参数等进行了优化选择。用建立的PCR－酶谱法检测病毒性脑炎患者脑脊液和慢性宫颈炎患者宫颈分泌物中的疱疹病毒，取得较好结果。本方法的建立为疱疹病毒感染的临床早期准确诊断、药物疗效考核和流行病学研究等提供了有效的手段。     

用核糖体RNA ITS区序列寡核苷酸探针鉴定临床常见真菌

目的：建立一种快速鉴定临床常见真菌菌种的方法。方法:选取真菌核糖体RNA的ITS区为靶基因，设计通用引物和种特异性探针，将3个属的6种临床常见真菌(白色念珠茵、热带念珠茵、光滑念珠茵、新型隐球菌、烟曲霉和黄曲霉)的种特异性探针加尾后固定于硝酸纤维素膜上；用标记生物素的真菌通用引物扩增11种医学真菌DNA，产物与固定在膜上的探针杂交。结果：通用引物可以扩增所试11种医学重要真菌的DNA，扩增片段长度约为560bp。6种真菌扩增产物只与其对应的探针杂交。结论：此方法快速、简便、特异，适合常规实验室开展。     

The role of interventional radiology in trauma

Introduction Interventional Radiology has evolved into a specialty having enormous input into the care of the traumatized patient.In all hospitals,regardless of size,the Interventional Radiologist must consider their relationships with the trauma service in order to     

Diagnóstico ecográfico del neumotórax

The ultrasonographic diagnosis of pneumothorax is based on the analysis of artifacts. It is possible to confirm or rule out pneumothorax by combining the following signs: lung sliding, the A and B lines, and the lung point. One fundamental advantage of lung ultrasonography is its easy access in any critical situation, especially in patients in the intensive care unit. For this reason, chest ultrasonography can be used as an alternative to plain-film X-rays and computed tomography in critical patients and in patients with normal plain films in whom pneumothorax is strongly suspected, as well as to evaluate the extent of the pneumothorax and monitor its evolution.     

Carbohydrate Supplementation during Exercise: Does It Help? How Much is Too Much?

KEY POINTS· Carbohydrate intake during exercise can delay the onset of fatigue and improve performance of prolonged exercise as well as exercise of shorter duration and greater intensity (e.g., continuous exercise lasting about 1h and intermittent high-intensity exercise), but the mechanisms by which performance is improved are different.     

磁共振DWI和动态增强鉴别颅底脊索瘤和侵袭性垂体瘤的应用

目的 探讨磁共振扩散加权成像(DWI)和动态增强在颅底脊索瘤和侵袭性垂体瘤(IPA)鉴别诊断中的应用价值.方法 搜集经手术病理证实且影像学有鞍区破坏的颅底脊索瘤患者15例、向鼻咽部侵犯的IPA患者20例.测量二者的表观扩散系数(ADC)值,绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析动态增强曲线的类型,统计达峰时间(TTP)、增强峰值(EP)和最大对比增强率(MCER),分析各个参数在鉴别诊断中的价值.结果 颅底脊索瘤的ADC值为(1.274±0.07)×10-3mm2/s,高于IPA ADC值(0.672±0.03) ×10-3 mm2/s(P ＜0.001),ADC阈值为0.964×10-3mm2/s时,ROC曲线下面积为0.997,敏感度为93.3％,特异度为100％.颅底脊索瘤时间-信号强度曲线(TIC)Ⅰ型14例,TICⅢ型1例,此例TICⅢ型者TTP约40 s;IPA TIC Ⅰ型7例,TICⅢ型13例.颅底脊索瘤和IPA的EP、MCER差异均有统计学意义(P ＜0.001).结论 ADC值和TIC的类型及其相关参数(EP,MCER)有助于颅底脊索瘤和IPA之间的鉴别.     

Treatment of intrahepatic arteriovenous fistula in hepatocellular carcinoma with N-butyl-2-cyanoacrylate

Primary hepatocellular carcinoma (HCC) continues to be one of the most common malignancies with an incidence of approximately one million cases per year and a dismal prognosis; some authors have reported a median survival of 1 ～ 2 months after diagnosis. Although surgery remains the only hope for cure, few patients are candidates[1,2].     

U50,488H对正常及缺氧心肌细胞L型钙电流的作用

目的 探讨心脏阿片受体和β-受体相互作用的机制。方法 采用全细胞膜片钳技术，观察U50，488H(β-阿片受体选择性激动剂)对正常和缺氧心肌细胞L型钙电流的作用。结果 U50，488H剂量依赖性(0．1～100μmol／L)抑制正常心肌细胞的L型钙电流及异丙肾上腺素(0．1μmol／L)激动的钙电流，而细胞缺氧后，这一抑制作用减弱；U50，488H对Forskolin(10μmol／L)激动的L型钙电流无明显影响。结论 β-阿片受体对β-受体信号的负性调节作用在细胞缺氧后减弱，其作用位点可能发生于β-受体与腺苷酸环化酶环节之间。     

Overtraining syndrome : la piste de la suractivité ?

Introduction

Overtraining is clearly a multifactorial disturbance. We aimed at evaluating the relative importance of overactivity and nutritional imbalances.

Methods

A comparison of 17 footballers with seven subjects with a diagnosis of overtraining evidenced that the two groups differ by energy expenditure resulting from physical activity (1573 ± 378.6 kcal/d from 804.7 ± 184.7 kcal/d) while food intake does not exhibit significant differences.

Conclusion

In this sample of subjects, inadequate food intake is found in both groups, so that overtraining appears rather characterized by a higher level of physical activity. Therefore, a relative energy deficit resulting from overactivity rather than dietary mistakes appears to explain the syndrome in these athletes, who are thus truly “overtrained”.     

Prenatal detection of brain anomalies with ultrasonography

Ultrasound is the first-line imaging study of the fetal brain performed at 12, 22 and 32 weeks of gestation. The very structured evaluation of biometric and morphological data, facilitated by the use of a checklist, ensures a high quality examination. All patients where an anomaly of any key element is suspected should be referred to a center dedicated to prenatal diagnosis for confirmation irrespective of the gestational age. Prenatal diagnosis plays a significant role in France since medical interruption of pregnancy until term is authorized.