口服可生物降解微球后唾液、肠道、阴道和鼻腔中的抗体应答

作者用聚丙交酯和乙交酯共聚物(PLG)制成微球包裹不同剂量的卵清蛋白(OVA).于0和4周用微球经口免疫雌性BALB/c 小鼠,初免和加强免疫均为连续口服3天.于初免后2、4、6和8周取小鼠唾液、肠道和阴道洗液及血清,用ELISA法测定IgA、IgG抗体.并于初免后1、5、9和13周取小鼠唾液腺和鼻粘膜组织.用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测抗体形成细胞(AFC).对照小鼠则口服可溶性抗原.结果显示,可溶性抗原初免或加强免疫后,血清中均未测得IgA抗体,IgG抗体可于第8周测得;初免含抗原微球后2周小鼠产生显著的血清IgA抗体应答,加强免疫后应答显著增强,8周时达最高峰,IgG抗体滴度也明显高于对照组.可溶性抗原初免后,可在小鼠唾液中检得IgA抗体,加强免疫后抗体滴度升高;而试验组小鼠2次免疫后的唾液IgA抗体均明显高于对照组.可溶性抗原免     

免疫刺激复合物的粘膜佐剂特性

含 Quil A佐剂的亲脂性免疫刺激复合物 ( ISCOM)对口服给予的蛋白抗原能诱生局部和全身免疫应答。本实验旨在证实 IS-COM通过调节局部固有免疫应答和肠抗原吸收而发挥作用。　　作者选用 6～ 8周龄 BAL B/ c小鼠口饲含 2 0 0μg卵白蛋白 ( OVA)的 ISCOM。实验中所使用的 ISCOM由胆固醇、磷脂酰胆碱、OVA和 Quil A组成 ,OVA与 Quil A之比为 1 0∶ 1。　　结果显示 :( 1 )口饲 ISCOM后 ,小鼠肠相关淋巴细胞组织 ( GALT)有炎性细胞募集 ,于 4 8～ 72小时达到最高峰。细胞总数证实肠系膜淋巴结 ( MLN)和集合淋巴结 ( PP)…     

氯胺酮单克隆抗体的研制及其免疫学特性研究

目的：制备氯胺酮单克隆抗体（McAb）,并对其特性进行分析。方法：采用丁二酸酐偶联法将氯胺酮（Ket）与BSA和OVA偶联合成人工完全抗原Ket—BSA和Ket—OVA,选择Ket—BSA免疫BALB／C小鼠,用Ket—OVA作包被抗原进行间接ELISA和竞争ELISA检测免疫小鼠血清效价,从而选择小鼠脾细胞为融合备用。应用杂交瘤技术制备氯胺酮单克隆抗体（Ket—McAb）,并对其效价、亲和性和特异性等进行鉴定。结果：成功地合成了氯胺酮人工完全抗原,用该抗原免疫小鼠产生高效价抗Ket抗体（1：12800）,并能被Ket单体抑制;建立了一株分泌稳定的单克隆抗体细胞株,细胞培养上清液的抗体效价为1：6400,腹水抗体效价为2×10^6;同种型为IgG2a,50％抑制浓度为80ng／ml,经鉴定能与Ket特异性结合与其它毒品类药物如冰毒、摇头丸,大麻、吗啡等无交叉反应。结论：抗氯胺酮McAb是一种特异的探针,对吸毒和戒毒病例的检测具有潜在的应用价值。     

微针促渗仪经皮免疫部位对免疫应答的影响

目的 利用微针的促渗作用对小鼠进行经皮免疫,探讨不同免疫部位所引起免疫应答的特点.方法 用染色法和组织切片法考察微针促渗仪的穿刺能力和穿刺效果;采用微针促渗仪,对小鼠的后背皮肤和耳部皮肤进行处理,涂抹模型抗原卵清蛋白(OVA)和佐剂CpG ODN 1826后,采用ELISA法测定血清中的抗OVA特异性抗体.结果 微针促渗仪可成功穿刺皮肤角质层,将抗原OVA和佐剂CpG ODN 1826同时递送至皮肤表皮层.与经后背皮肤免疫比较,经耳部免疫会产生更强效的IgG、IgG 1和IgG 2a特异性抗体水平.结论 经皮免疫在耳部皮肤引起了比后背皮肤更强的免疫效果.     

超声粉碎抗原免疫预防鼠幽门螺杆菌感染的研究

目的研究幽门螺杆菌超声粉碎抗原与霍乱毒素B亚单位组成的口服疫苗预防HP感染的作用,探讨其保护性免疫应答机制。方法用HP超声粉碎抗原2mg加CTB10μg作为免疫预防组,另设单纯HP超声粉碎抗原组、单纯CTB组和PBS组为对照组。免疫4周后以活菌攻击,观察各组小鼠的免疫保护率。攻击前后测定血清中IgA、IgG1和IgG2a抗体的变化,小鼠胃黏膜分泌性IgA抗体变化情况。结果免疫预防组小鼠免疫保护率为73.33%,而对照组全部感染HP(P<0.001);攻击前免疫预防组小鼠IgA、IgG1和IgG2a抗体均轻度升高,攻击后IgA、IgG1和IgG2a抗体进一步升高,以IgG2a抗体增高更为明显,IgG1/IgG2a比值从0.67下降至0.59。结论HP超声粉碎抗原加CTB可预防HP感染,并诱导出以Th1反应为主的保护性免疫应答。     

优化口服菌苗:霍乱毒素作为佐剂可诱发对破伤风类毒素的全身和粘膜B细胞和抗体应答

霍乱毒素（CT）是一种有效的粘膜抗原,与不同抗原同时口服时,具有佐剂作用。作者用CT作佐剂,评估口服破伤风类毒素（TT）的B细胞抗原特异性应答,并检验CT和TT的免疫保护性。 取8～12周龄C57BL/6小鼠,分为4组,分别于0、7和14天给予口服免疫:第1组口服10μg TT和10μg CT;第2组口服100μg TT和10μg CT;第3组口服250μg TT和10μgCT;第4组仅口服250μgTT。 用ELISA检测小鼠粪便浸出物和血清中IgG、IgA、IgM抗TT,CT抗体水平。第2和第3组小鼠粪便浸出物中IgA抗TT抗体滴度分别为1:32和1:128,其余两组不产生抗TT抗体应答。口服CT后,小鼠粪便浸出物中均有IgA抗CT抗体应答。TT剂量不影响CT应答。第4组小鼠不产生抗CT抗体。仅在21天时诱发出弱血清IgG抗TT抗体应答。第2组小鼠,血清IgG抗TT抗体水平较高,第3组小鼠血清IgA抗TT抗体水平较高。血清抗CT应答IgG类最高,IgA类次之。第3组小鼠首剂免疫后,血清中无抗TT抗体,但2剂免疫后,可检出IgM和IgG抗     

姬松茸多糖佐剂诱导OVA抗原特异性Th1免疫应答的机制研究

目的： 探讨姬松茸多糖（ABP-AW1）作为佐剂对卵白蛋白（OVA）免疫鼠细胞免疫反应的调节作用。方法： 以OVA为抗原,ABP-AW1为佐剂经皮下两点免疫小鼠,于0,15 d各免疫一次,第28 d,碳粒廓清实验检测Mφ吞噬能力;ELISA法检测血清中免疫球蛋白及其抗体亚类水平,RT-PCR法分析Th1细胞因子IL-2、IFN-γ mRNA表达水平。结果： ABP-AW1可以增强OVA免疫小鼠抗原递呈细胞的吞噬功能;血清中抗体亚类IgG2b明显高于对照组（P<0.05）;脾细胞分泌Th1细胞因子IL-2、IFN-γ mRNA水平也均高于其他各组（P<0.05）。结论： ABP-AW1可作为OVA抗原的细胞免疫佐剂成分,调节OVA抗原Th1型反应的免疫应答。     

肌肉注射卵白蛋白/白细胞介素18融合DNA可有效诱导抗原特异性Th1型免疫应答

Th1型细胞可选择性分泌白细胞介素 2( IL- 2 )、γ干扰素 ( IFN- γ)和 β肿瘤坏死因子( TNF- β) ,调节以补体结合和调理抗体 (如Ig G2 a同种型抗体 )产生为特征的细胞介导免疫。作者构建了一种携带卵白蛋白 ( OVA)和 IL - 1 8( IFN-γ诱导因子 ) c DNA融合基因的哺乳动物细胞表达质粒 p OVA/IL- 1 8,并在 C57BL/6小鼠中研究了其是否能有效诱导抗原特异性 Th1型免疫应答。　　作者首先对含 SV4 0复制起点并表达免疫球蛋白基因的哺乳动物细胞表达质粒进行修饰 ,以去除其中绝大部分免疫球蛋白编码区及新霉素抗性基因 ,随后分别…     

小鼠以沙门氏菌,大肠杆菌和沙门氏菌——大肠杆菌杂交株口服免疫后肠道和血清抗体反应

小肠的局部免疫功能主要是由于产生和分泌IgA抗体,而小肠的集合淋巴结是吸收抗原和分泌IgA的主要部位。本文阐述了几株无毒沙门氏菌,大肠埃希氏杆菌(下称:大肠杆菌):大肠杆菌及其     

抗HBsAg单链抗体特异性单克隆抗体的制备及应用

目的获得抗HBsAg单链抗体(HBScFv)的单克隆抗体,并初步研究其在抗HBsAg类小分子抗体及其融合蛋白质的纯化、活性鉴定方面的应用。方法利用杂交瘤技术,以大肠杆菌表达的重组抗HBScFv为抗原,免疫Balb/c小鼠,再将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合。通过ELISA法、Western-blot鉴定特异性单克隆抗体,通过免疫双扩散法鉴定单抗亚型,并将筛选到的高效价单抗用于抗HBsAg Fab抗体等重组蛋白质的亲和色谱及ELISA鉴定。结果建立了9株能够稳定分泌抗HBScFv特异性单克隆抗体的细胞株,其细胞上清效价为1∶160~1∶12 800,腹水效价为1∶50 000~1∶400 000;单克隆抗体的亚类分析结果显示有6株为IgG1,其余3株为IgG2a。初步应用结果表明制备的单克隆抗体14F7可用于抗HBsAg Fab抗体等重组蛋白质的亲和色谱及活性鉴定。结论成功建立了能够稳定分泌HBScFv特异性单克隆抗体的细胞株。     

新型膦酸酯类化合物DHBMGP2的免疫抑制作用

目的从细胞和整体动物水平研究新型膦酸酯类化合物DHBMGP2免疫抑制活性。方法分离正常BALB/c小鼠脾淋巴细胞,与DHBMGP2共培养72 h,用[3H]TdR掺入法测定淋巴细胞增殖反应;染料排斥法检测24 h细胞存活率,观察淋巴细胞毒性。雄性BALB/c小鼠用二硝基氯苯(DNCB)皮肤致敏2次(间隔1周),制备小鼠迟发型超敏反应模型,初次致敏当天开始ig给药,每天1次,连续10 d,第11天处死动物测定耳肿胀度。雌性BALB/c小鼠足跖sc注射鸡卵清蛋白(OVA)免疫2次(间隔2周),制备致敏模型,首次免疫当天开始ig给药,每天1次,连续4周,每周眼球后静脉丛采血,ELISA法检测血清OVA特异性IgG,IgG1和IgG2a抗体水平,[3H]TdR掺入法检测OVA抗原特异性T细胞反应。结果 DHBMGP2 1～100μmol.L-1体外应用可明显抑制小鼠脾淋巴细胞增殖反应,对脾淋巴细胞24 h存活率无明显影响。DHBMGP2 20,40和80 mg.kg-1可以减轻DTH模型小鼠耳肿胀度,耳肿胀度由模型组的(8.1±3.4)mg分别降低为(5.2±2.1)(,5.1±1.0)和(5.4±1.3)mg,抑制其迟发型超敏反应。ig给予DHBMGP2 40和80 mg.kg-1可以明显抑制OVA致敏小鼠抗原特异性T细胞反应,[3H]TdR掺入值由模型组的(975±46)cpm分别降低为(769±30)和(601±45)cpm,但对血清OVA特异性抗体水平无明显影响。结论 DHBMGP2体内外应用对细胞免疫反应具有抑制作用,对体液免疫反应无明显影响。     

弓形虫STAg免疫小鼠后血清抗体水平的动态检测

目的 观察弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)免疫小鼠后,小鼠血清IgG抗体水平的动态变化,探索STAg抗原的最佳免疫次数.方法 5～6周龄BALB/c小鼠20只,随机分成对照组和实验组,其中对照组头背部皮下注射生理盐水,实验组头背部皮下注射20 μg STAg,免疫5次,每次免疫1周后取5只小鼠,采血并分离血清,通过ELISA法测定IgG抗体;通过Western Blot方法检测血清中产生的IgG和IgM抗体条带.结果 第二次免疫后小鼠血清IgG值明显高于初次免疫小鼠的血清IgG值,差异有统计学意义;但是.Western Blot检测的IgG抗体条带颜色未明显增强.第四次免疫后小鼠血清IgG再次增高并达到峰值,同时第四次免疫后小鼠血清中的IgG抗体条带的反应颜色也明显变深.结论 利用STAg免疫小鼠,免疫2次就会产生明显的免疫效果,但是免疫4次可进一步有效提高小鼠的免疫力.     

抗哇巴因单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备抗哇巴因单克隆抗体。方法以半抗原哇巴因与蛋白质载体卵清蛋白(OVA)的耦联物为抗原,免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,获得两株分泌抗哇巴因的单克隆抗体的细胞株(OUA1,OUA2)。结果两株细胞染色体数目均为100条左右,证实为杂交瘤细胞;所分泌抗体为小鼠IgG1亚类;小鼠腹水效价测定分别为5×106,8×106;和地高辛交叉反应率分别为1.342%和2.323%;ELISA相加试验表明,两株单克隆抗体可能针对同一抗原决定簇。结论成功制备出小分子物质哇巴因的单克隆抗体。     

抗螺杆菌免疫接种能刺激长期免疫力

为了解猫螺杆菌(Hf)和霍乱毒素共同免疫小鼠能否产生长期保护作用,作者分别在第1、3、6、30、54天用1mg超声处理的Hf菌体加10μg霍乱毒素口饲7～8周龄的SPF雄性BALB/c小鼠.分别于末次免疫后1、3、6、13、15个月用Hf活菌攻击小鼠,攻击后21天杀死动物,取其胃组织进行尿素酶试验和Giemsa染色,检测有无螺杆菌存在;同时用ELISA测血清IgG和唾液IgA抗Hf抗体.结果表明,在免疫后1、6、13、15个月时,所有免疫小鼠均能抵御Hf攻击,Hf清除率达100%,3个月时清除率为86%(尿素酶法)或93%(Giemsa法).与注射生理盐水的对照组相比,两组间的清除率有显著差异.免疫组和对照组的IgG抗体水平因个体免疫应答不同而都有变化,但免疫后1、6、15个月时的三次检测显示,免疫组的IgG抗体水平均显著高于对照组.免疫组小鼠1和15个月时的IgG抗体水平显著高于6个月时,而对照组间则无显著差异.唾液IgA抗Hf抗体     

直肠接种含抗原的微球体诱导的Th2应答强于口腔接种

直肠作为诱生全身和局部免疫应答的有效部位很少引起人们的注意。为了解含卵白蛋白 ( OVA)的微球体 ( MS- OVA)作为一种抗原进行直肠接种能否有效地诱导小鼠产生局部和全身性免疫应答 ,作者分别在 0、7、1 4天给予雌性 BALB/ c小鼠口服或直肠接种磷酸盐缓冲盐水 ( PBS)、空微球 ( MS)、OVA或 MS- OVA。第 1次接种后第 7、1 4、2 1、2 8和 35天收集血样 ,第 35天收集小鼠的粪便提取物 ,用夹心 ELISA法检测血清和粪便OVA特异性 Ig A和 Ig G水平 ,用酶联免疫斑点法 ( EL ISPOT)测定抗原特异性抗体形成细胞 ( AFC) ;从小肠、…     

小鼠HSP27/HSPB1单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备针对热休克蛋白27/热休克蛋白B1(HSP27/HSPB1)的特异性单克隆抗体并对其进行鉴定。方法用HSP27/HSPB1作为免疫抗原免疫BalB/c小鼠,通过常规杂交瘤技术将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0细胞经PEG融合,筛选阳性杂交瘤细胞株,进行克隆化培养后接种于小鼠腹腔制备HSP27/HSPB1单克隆抗体,并利用间接酶联免疫吸附试验、免疫印迹、免疫组织化学、免疫荧光技术对所制备的抗体进行鉴定。结果获得了一株可稳定分泌HSP27/HSPB1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为4C9C7,其亚类是IgG1,分泌的单克隆抗体能特异性结合组织和细胞中的HSP27/HSPB1蛋白。结论本实验成功制备了可稳定分泌HSP27/HSPB1单克隆抗体的杂交瘤细胞及HSP27/HSPB1特异性的单克隆抗体,可应用于各种相关的科学研究。     

鼻内接种流感疫苗和霍乱毒素B亚单位预防流感病毒感染

霍乱毒素(CT)与某种无关的抗原同时接种时,不但是有效的肠道免疫原,而且还是刺激对无关抗原的IgA和IgG抗体应答的免疫调节剂。本文作者将CT或霍乱毒素B亚单位(CTB)与流感疫苗同时接种小鼠,观察小鼠的免疫应答及流感病毒感染情况。流感HA疫苗由流感病毒A/山形/120/86(H1N1)株和A/PR/8/34(H1N1)株制成。对6～8周龄的雌性BALB/c小鼠鼻腔、腹腔或皮下接种HA疫苗和CTB或CT。4周后测定血清中血凝抑制(HI)抗体和鼻腔内流感特异性和CTB特异性IgA抗体。     

禽流感H5N1灭活疫苗与不同纳米化佐剂联合免疫研究

目的 观察禽流感H5N1灭活疫苗加不同佐剂以及纳米化佐剂免疫小鼠后产生的免疫应答的差异,同时观察免疫对异亚型病毒攻击后的保护情况.   方法 用H5N1灭活疫苗分别联合佐剂氢氧化铝、纳米化氢氧化铝、MF59和纳米化MF59通过腹腔注射方式免疫雌性BALB/c小鼠,同时分别以H5N1灭活疫苗免疫小鼠以及PBS腹腔注射处理小鼠作对照.采用ELISA方法分别对各组小鼠免疫后血清特异性IgG及其亚类IgG1、IgG2a水平进行检测,以PR8病毒鼻腔攻击后观察小鼠体重变化情况和生存率.采用t检验作组间比较.    结果 与PBS处理组相比,无论以何种方式免疫H5N1疫苗,免疫后特异性IgG及其亚类水平均明显升高(t=7.4004,P<0.01),以联合MF59后诱导的特异性抗体水平最高.其中疫苗单独免疫组和联合M59免疫组IgG2a水平升高明显,联合纳米化MF59免疫小鼠后IgG2a水平有所下降,IgG1水平有所升高;联合铝佐剂组以IgG1升高为主.攻毒后各组小鼠体重均出现下降,但疫苗单独免疫小鼠以及疫苗与佐剂联合免疫小鼠于攻毒后期体重恢复接近正常或者正常.PBS处理组小鼠攻毒后全部死亡,佐剂联合免疫组小鼠存活率100%,而疫苗单独免疫小鼠存活率为70%.   结论 H5N1疫苗无论是单独免疫或是联合不同佐剂免疫均可诱导较高水平的特异性抗体产生,有非常好的免疫原性.H5N1灭活疫苗诱导的抗体亚类以IgG2a为主,MF59以及纳米化MF59也以诱导IgG2a亚类为主,但纳米化MF59可诱导更均衡的免疫应答.联合铝佐剂或纳米化铝佐剂免疫小鼠后均可诱导以IgG1亚类为主的抗体应答.联合两种佐剂均可对小鼠产生很好的异亚型保护.     

用单克隆抗体对日本脑炎病毒进行抗原分析

作者用P3X63Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞和用日本脑炎(JE)病毒Nakayama-RFVL株免疫BALB/c小鼠获得的脾细胞进行融合,获得26个产生抗本株病毒的血凝抑制(HI)抗体的杂交瘤细胞系。对这26个克隆细胞产生的抗体的免疫球蛋白类型和免疫学性质进行比较分析,证明其中4个属于IgM,是JE种特异性抗体;21个属于IgG,是JE种、亚群或属特异性抗体;1个属于IgA,是JE亚群特异性抗体。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳证实IgG是清晰的单一的带,与小鼠IgG的位置一致。杂交瘤细胞染色体数目的平均范围在86.6～95.4。为了明确这26个单克隆抗体的免疫学特征,把每一个杂交瘤产生的腹水分别和6种     

用于人疫苗抗原的非磷脂脂质体的佐剂特性

作者在小鼠和家兔中对作为人菌苗抗原破伤风类毒素(TT)和白喉类毒素(DT)佐剂的、由二氧乙烯鲸蜡醚、胆固醇和油酸组成的非磷脂脂质体进行了评估.分别将TT和DT混合或包被在脂质体、脂质体-单磷酸脂质A(MPL)/鲨烯和脂质体-鲨烯中制成不同的脂质体抗原制剂,以磷酸铝吸附的抗原、结合弗氏佐剂的抗原及可溶性抗原为对照.分别用上述抗原免疫小鼠(2剂TT)和家兔(3剂DT).于首剂TT免疫后4、6、10和15周及每剂DT免疫后2周采血.用ELISA法测定抗-TT IgG、IgG亚类和IgM抗体及抗-DT IgG抗体.用毒素中和试验测定小鼠血清中破伤风抗毒素水平,用Vero细胞测定兔血清白喉抗毒素.