采用改进的表示PCR技术分离胃癌差异表达基因及其临床意义

建立优化的差示ＰＣＲ条件：运用建立的条件分离胃癌ＧＣ７９０１与胃粘膜ＧＥＳ－１细胞株之间的差异表达基因；根据获取的序列，设计引物并运用于检测胃癌组织、血活检胃粘膜标本，拟筛选出检出率与符合率高的数对引物，建立胃癌基因诊断方法。方法：以ＧＣ７９０１与ＧＥＳ－１细胞株为研究对象，探索ｍＲＮＡ差示ＰＣＲ 最佳反应条件，运用优化的条件分离细胞株之间的差异表达基因；以回收的片段作条件分离细胞打点杂交证实为真     

胃癌差异表达基因的克隆测序及临床应用

目的 筛选数个在胃癌及癌前病变中检出率高的胃癌差异表达片段。方法 以筛选了的gcys-10,gcys-12,gcys-13,gcys-16这4个新基因片段为研究对象，将它们克隆入T载体中进行测序，根据序列设计引物，采用RT－PCR方法检测胃癌细胞株GC7901、胃粘膜细胞株GES－1以及胃癌、胃粘膜活检标本。结果 4个差异基因表达片段测序后经过同源性检索均为新基因，被基因库收录，收录呈为AF054171，AF071052，071053,某某071056。根据这些基因设计的4对引物均能从GC7901总RNA中扩增出相应产物，而gcys-10的引物未能从GES－1细胞株中扩增出相应产物。gcys-10在50例活检标本中的检出率分别为：萎缩性胃炎83.3%，肠腺化生81.8%，疣状胃炎58.3%，胃癌88.9%，胃溃疡50.0%，十二指肠溃疡0，急性胃炎0。在17例胃癌手术标本的检出率为94.1%。结论gcys-10,gcys-12,gcys-13,gcys-16均为胃癌差异表达基因，其中gcys-10在胃癌及胃癌前病变中检出率非常高，其表达的变化可能对胃癌的早期发展有意义。     

胃癌高表达基因gcys-18的部分cDNA克隆

目的：分离克隆测序胃癌高表达基因ｇｃｙｓ－１８的部分ｃＤＮＡ．方法：采用ｍＲＮＡ差异展示技术从胃癌ＧＣ７９０１与胃粘膜ＧＥＳ－１细胞株中分离出一差异表达基因片段,对其命名,并进行克隆、测序及ＧｅｎＢａｎｋ检索;以此片段作探针与细胞株总ＲＮＡ进行打点杂交．结果：从差示ＰＣＲ电泳凝胶中分离出大小为４１６ｂｐ的差异表达片段,命名为ｇｃｙｓ－１８;ＲＮＡ打点杂交证实ｇｃｙｓ－１８在ＧＣ７９０１中呈高表达,     

原位逆转录PCR检测ppGalNAcT-2在胃癌细胞株SGC-7901的表达

目的 探索建立原位逆转录聚合酶链式反应方法以用于检测ppGalNAcT-2在细胞株中的表达。方法 采用原位逆转录聚合酶链式反应检测胃癌细胞株SGC-7901中ppGaINAcT-2的表达。结果 胃癌细胞株SGC-7901中ppGalNAcT-2表达有差异，在细胞株中约有30％的细胞表达。结论 原位逆转录PCR技术用于探索ppGalNAcT-2在肿瘤细胞中的表达是可行的。它有助于对ppGalNAcT-2功能的进-步了解。     

瘦素及瘦素受体在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达

摘要：【目的】探讨胃癌细胞株和胃癌组织是否有瘦素和瘦素受体表达，以及瘦素对胃癌细胞株的增殖作用。【方法】免疫组化和RT-PCR检测胃癌细胞株及胃癌组织中瘦素和瘦素受体表达，MTT法测定瘦素对胃癌细胞株SGC7901、MGC803、MKN45的增殖作用。【结果】胃癌细胞株SGC7901、MGC803及MKN45均有瘦素及瘦素受体表达；47例胃癌组织石蜡切片标本检测有瘦素表达20例，有瘦素受体表达23例，两者共同表达17例；19例新鲜胃癌组织标本，有瘦素mRNA表达13例，瘦素受体mRNA表达12例，两者共同表达10例；与对照组相比，100ng／mL的瘦素可使胃癌细胞株SGC7901、MGC803、MKN45的增殖率分别为1．45、1．56及1．54。【结论】胃癌细胞株及胃癌组织普遍存在瘦素和瘦素受体表达，瘦素可促进胃癌细胞株增殖。     

特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法的建立和优化

目的以16S rRNA编码序列为靶基因,建立特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法并优化。方法以类鼻疽伯克霍尔德菌标准菌株K96243的16S rRNA编码序列为靶序列,通过Primer Premier 5软件搜索特异的引物,以该菌为模板,优化特异引物PCR的退火温度、退火时间和反应循环数等条件。得到最优PCR反应条件后,将该方法用于检测临床分离的类鼻疽伯克霍尔德菌菌株和常见细菌感染病原体(大肠杆菌、痢疾志贺菌、伤寒沙门菌、幽门螺旋杆菌、金黄色葡萄球菌、甲型链球菌和乙型链球菌),评价该方法的有效性和特异性。结果共设计3对引物,分别扩增16S rRNA编码序列283～672、760～1 061、771～1 193片段,优化后PCR反应条件为:94℃预变性4 min,94℃变性40 s,54.5℃退火20 s,72℃延伸40 s,24个循环,最后延伸1 min;特异性分析发现此方法能将类鼻疽伯克霍尔德菌与其他常见感染病原菌进行有效地鉴别诊断。结论成功建立并优化一种快速鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌的方法,通过此方法能有效的从单个菌落中和基因组水平鉴定临床分离的8株类鼻疽伯克霍尔德菌。     

Bim-1基因在胃癌中的表达及其临床意义

目的:探讨Bim-1基因在胃腺癌细胞株、胃癌组织和癌旁组织以及胃癌患者外周血中的表达水平及其与临床病理特征的关系.方法:收集80例胃癌患者的癌组织和癌旁组织,培养胃腺癌细胞株(SGC-7901,BGC-823,AGS),采用RT-PCR和实时PCR的方法检测Bmi-1基因的表达情况.另外同时收集Bim-1基因阳性胃癌患者外周血标本以及健康体检者外周血标本各20例,用淋巴细胞分离液(Ficoll)分离获得单个核细胞,采用巢式PCR和实时PCR的方法检测其Bmi-1基因的表达情况.采用蛋白质印迹法验证胃癌组织和对应的癌旁组织以及胃癌患者及健康体检者血单个核细胞中Bim-1蛋白的表达情况. 结果:胃腺癌细胞株(SGC-7901,BGC-823,AGS)中Bim-1均高表达;胃癌组织中Bim-1表达(85%)明显高于癌旁组织(30%)(P<0.05);胃癌患者外周血单个核细胞Bim-1基因的阳性率为60%,显著高于健康体检者(P<0.05).胃癌组织和癌旁组织中Bim-1的蛋白水平存在差异,而在外周血中未见明显差异.结论:Bim-1基因在胃腺癌细胞株以及胃癌组织中高表达,胃癌患者外周血单个核细胞Bim-1的阳性率高于健康体检者,通过检测Bim-1基因可为胃癌的临床诊断及其靶向治疗提供新途径.     

榄香烯对胃癌SGC-7901细胞株PPARγ基因的影响

目的通过观察榄香烯对胃癌SGC-7901细胞株生长以及对过氧化物酶体增殖激活物受体γ（PPARγ）mRNA表达的影响，探讨榄香烯抑制SGC-7901细胞增殖的可能机制。方法用不同浓度的榄香烯处理胃癌SGC-7901细胞，CCK-8法观察细胞增殖抑制作用；RT—PCR法检测胃癌SGC-7901细胞中PPARγ mRNA表达的变化。结果榄香烯抑制SGC-7901细胞增殖，呈浓度和时间依赖性；作用48h后明显抑制胃癌SGC-7901细胞PPARγ基因表达，呈浓度依赖性。结论榄香烯可能通过下调PPARγ mRNA表达抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖。     

人源细粒棘球蚴的RAPD分析体系建立

目的建立PCR—RAPD反应体系，提升细粒棘球蚴随机扩增多态性DNA（RAPD）遗传多态性研究的稳定性，为研究细粒棘球蚴的分类学以及包虫病的分子流行病学奠定基础。方法采用改进的酚-氯仿抽提法提取细粒棘球蚴基因组DNA，用单因素筛选方法建立PCR—RAPD分析体系。结果采用改进的酚／氯仿抽提方法提取细粒棘球蚴基因组DNA质量高，适用于PCR—RAPD扩增分析；在25μL体系中，RAPD—PCR扩增反应各成分的最佳浓度为：dNTP0．2—0．3mmol／L、Taq酶2．5U、随机引物0．8—1．4μmol／L，模板为60ng。PCR扩增最佳条件为：95℃预变性5min；94℃变性30s、32℃退火45s、72℃延伸1min、共35个循环；最后72℃延伸10min；初步从20条引物中筛选出11条带型丰富的随机引物。结论酚-氯仿适用于提取细粒棘球蚴基因组DNA，优化的RAPD反应体系和筛选出的随机引物适合进行细粒棘球蚴RAPD遗传多态性分析。     

随机引物PCR检测人DNA指纹条件的优化

[目的]探讨随机引物PCR检测人DNA指纹技术的最优化条件。[方法]应用随机引物PCR技术，用一对经筛选的短引物，对扩增人DNA指纹的条件进行了优化。[结果]实验结果显示：DNA模板应新鲜，质量浓度在50－550mg/L1均有扩增产物，dNTP的浓度0.2mmol/L最宜。Mg^2 浓度5.0mmol/L效果最佳。循环参数以两个三步PCR，变性温度分别用94℃、90℃，时间各为30s，退火温度用43℃、48℃，时间分别为40s、50s，延伸温度为72℃，时间分别为1min、1min20s。[结论]按照优化的实验条件，得出的DNA指纹图重复性好，个体特异性高，为APHDF的推广提供了实验基础。     

心室除极与复极的新见解

提出心电图的QR段属于室间隔和心尖部的除极过程;RS段是心室壁除极过程的前部;T波中部是室间隔和心尖部复极过程的后部;T波后部是心室壁的复极过程;ST段和T波的前部相当于室间隔和心尖部复极过程的前部和中部与心室壁除极过程的中部和后部的重合。同时论述了室间隔和心室壁的除极和复极的扩散方向。这些新见解对于理解和解释异常的QRS波型和ST T改变的生成及其病理意义都有较大帮助。     

朝鲜族磨牙外层解剖测量统计分析研究

[目的 ]研究朝鲜族磨牙外层解剖形态 .[方法 ]用电子数显卡尺测量离体牙的牙外层 ,如牙体、全长、冠长、根长、冠宽、颈宽、冠厚、颈厚等 ,均按王惠芸氏标准测定 ,并做统计分析 .[结果 ]朝鲜族上颌磨牙全长与王氏资料相比无明显差异 ,上颌磨牙冠长短于王氏资料 ,但朝鲜族上颌磨牙根长长于王氏资料 ;朝鲜族下颌磨牙全长和冠长短于王氏资料 ,但朝鲜族下颌磨牙根长度与王氏资料相比无明显差异 .[结论 ]朝鲜族磨牙较牢固 ,能担负较强的咀嚼力 ,并证实在临床实际工作中借牙冠长短估计根长是不准确的     

经产妇的分娩特点及新生儿情况分析

目的　了解经产妇的分娩特点及妊娠结局。方法　对 5 2 9例经产妇 (研究组 )与 2 2 1例初产妇 (对照组 )的分娩方式、产程、并发症及新生儿情况等进行分析比较 ,并观察末次妊娠距本次分娩时间对产程的影响。结果　 (1)两组产妇产程间的差别有显著性意义 (P <0 0 0 1)。 (2 )两组中巨大胎儿、胎儿窘迫、新生儿窒息及死亡的发生率间差别有非常显著性意义 (均P <0 0 0 1)。 (3)本次分娩距前次分娩的时间与产程间有一定的线性依从关系 (P<0 0 0 0 1)。 (4 )两组产妇剖宫产原因的构成比间差别有非常显著性意义 (P <0 0 0 1)。结论　经产妇的产程明显比初产妇短 ,但随着本次分娩距前次分娩时间的延长 ,产程也逐渐延长。产科医生应加强对经产妇的产前保健 ,积极预防巨大胎儿的发生 ,以减少产程中的异常情况     

CT诊断颅内低密度病变的探讨

３６例术前头颅ＣＴ诊断为脑胶质瘤，术后病理证实为其它病变的颅内低密度灶，其中胶质细胞增生４例，局限性脑炎３例，脑转移瘤６例，脑脓肿２例，脑结核瘤３例，脑血管畸形２例，脑血吸虫病３例，脑外伤后软化灶２例，脑梗塞５例，脑穿通畸形２例，多发性硬化灶４例。重点讨论了ＣＴ扫描对颅内低密度病灶的诊断及鉴别诊断。     

《证治准绳·目》版本源流述略

《证治准绳·目》为明代医家王肯堂所撰,成书后屡经翻刻,现存13种版本。其诸多版本大致可分为6大系统：①万历初刻本系统,包括明万历三十年壬寅（1602）初刻本、日本宽文朝1670年铜驼书林刻本、清康熙十四年乙卯（1675）金坛虞氏刻本、清康熙三十八年己卯（1699）金坛虞氏修补刻本、清光绪二十五年（1899）西蜀善成堂刻本5种;②修敬堂本系统,包含清乾隆五十八年癸丑（1793）修敬堂金氏刻本、清光绪十八年壬辰（1892）广州石经堂校本、清旧学山房刻本3种;③图书集成本系统,是指清光绪十八年壬辰（1892）上海图书集成印书局铅印本;④带月楼刻本系统,指清乾隆十四年己巳（1749）带月楼刻本;⑤九思堂刻本系统,指清嘉兴九思堂刻本;⑥石印本系统,即1912年上海鸿宝斋石印本及1935年上海扫叶山房石印本。     

荧光定量PCR方法检测男性三种标本的分析

目的:分析荧光定量PCR方法检测1256例前列腺液、尿道分泌物、精液标本解脲支原体(UU)和(或)沙眼衣原体(CT),了解三种标本感染UU、CT的情况。方法:对2007年1256例怀疑感染UU或CT的患者和不孕不育症患者标本检测。结果:149例前列腺标本中UU阳性率为42.3%(63/149)、136例前列腺标本CT阳性率为19.9%(27/136);361例尿道分泌物UU阳性率为21.1%(76/361)、346例尿道分泌物CT阳性率为10.4%(36/346);141例精液UU阳性率为11.3%(16/141)、123例精液CT阳性率为7.3%(9/123)。结论:三种标本的UU、CT阳性率相差显著,P<0.005。前列腺标本检测的阳性率明显高于尿道分泌物标本,精液检测的阳性率最低。不同类型的标本检测的UU、CT的结果有很大的差异,送检的标本最好是前列腺液。     

艾箱灸神阙穴联合大承气汤在全身多发性骨折后腹胀中的疗效观察

正高能量全身多发骨折患者行动功能严重受限,病患需长期卧床。研究~[1-2])表明,超过80%以上的患者早期存在不同程度的腹胀、便秘症状,严重的可发展为机械性肠梗阻。为探求有效预防和缓解腹胀症状及便秘的发生,我院自2014年2月起对全身多发性骨折患者的腹胀及便秘行艾箱灸神阙穴联合大承气汤治疗,效果优良,报道如下。1临床资料1.1一般资料经医院伦理委员会同意,选取我院2014年2月—2016年2月收治的全身多发骨折患     

下颌体骨折倾斜角度与坚固内固定稳定性关系有限元分析

目的:用三维有限元的方法分析下颌体骨折倾斜角度与小型钛板坚固内固定后骨折段稳定性的关系。为治疗下颌骨体斜形骨折提供生物力学指导。方法:建立下颌骨体骨折的三维有限元模型,并设定不同的骨折线近中倾斜角度,按照Champy的下颌骨骨折理想固定线进行小型钛板固定,分别模拟切牙咬合及健、患侧磨牙咬合,得出骨折段的相对位移情况。结果:下颌体骨折坚固内固定的稳定性在夹板与骨折线垂直的时候最好,随着骨折线倾斜角度的增大,夹板与骨折线所成角度增大,骨折段的稳定性越来越小,当骨折线倾斜角度大于20°时,骨断端的相对位移超过了150μm。结论:下颌体骨折段的稳定性会随着骨折线倾斜角度的增大而减小。当骨折线倾斜角度大于20°时,应通过改良手术方法或术后增加辅助固位或减小咬合力等措施防止固定失败。     

黄褐斑中医辨证分型与性激素水平相关性探讨

目的：探讨女性黄褐斑患者的中医辨证分型与性激素水平及丙二醛（MDA）、血清超氧化物岐化酶（SOD）的相关性。方法：黄褐斑患者180例,辨证分型为肾阳虚型、肾阴虚型和肝郁气滞型三型。采用Dunnett＇t检验,检测不同证型黄褐斑患者卵泡期空腹静脉血血清性激素水平及静脉血血清的过氧化物岐化酶（SOD）、丙二醛（MDA）活性,并进行比较分析。结果：三型患者血清MDA均增高,SOD均降低,与正常对照组比较,均有统计学意义;不同分型间仅肾阳不足与肝郁气滞型比较具有统计学意义（P〈0.05）。性激素水平检测结果：肾阳不足型、肾阴虚型雌二醇（E2）均明显降低,但肾阴亏虚型睾酮（T）水平升高,与正常对照组比较,具有统计学意义,但阳虚和阴虚两型之间比较无统计学意义。肝郁型PRL、T水平、E2显著升高,与正常对照组比较,具有统计学意义。结论：E2水平的高低可作为黄褐斑虚症和实证的辨证标志;T水平的高低可作为肾阴虚和肾阳虚的标志;SOD、MDA含量的高低不能作为黄褐斑辨证分型的标志。     

先秦哲学的精气观念与《内经》肾藏象理论的发生

《内经》肾藏象理论是中医藏象理论的重要组成部分,从古哲学角度系统论述了先秦哲学中的精气观念与《内经》肾藏象理论发生的关系.精气观念是肾藏象理论发生的重要因素之一,有不可替代的重要意义,它促成了"肾藏精"这一重要命题的产生,又通过"司外揣内"的方法促成了其它结论的产生.