先天性无虹膜家系致病基因的突变检测

目的 对一常染色体显性遗传的先天性无虹膜( AN)家系进行PAX 6基因突变筛查,以确定其致病基因及致病突变.方法 收集一常染色体显性遗传的AN家系,采集该家系患者、家族健康成员外周静脉血,提取基因组DNA,应用聚合酶链式反应( PCR)方法扩增PAX 6 基因exon 4 ~exon 13共11个外显子以及外显子-内含子拼接部,将纯化后的PCR扩增产物直接测序,运用DNAStar软件(综合性序列分析软件)对测序结果进行序列分析,检测PAX 6基因的突变类型,并与80名随机抽取的与该家系无血缘关系的健康人PAX 6基因序列进行比对. 结果 该家系患者PAX 6 基因exon 11存在一个杂合突变c. 949 C>T(P. R 317 X),导致第317位精氨酸的密码子CGA被终止密码子UGA替代,造成编码PAX 6蛋白的过早终止,而该家系其他健康成员及80名与该家系无血缘关系的健康对照组成员均未检测到该突变. 结论 PAX 6基因c. 949 C>T( P. R 317 X)突变导致PAX 6蛋白提前编码终止是该常染色体显性遗传先天性无虹膜家系的致病原因.     

一先天性无虹膜症家系的PAX6基因突变研究

目的 确定一先天性无虹膜症家系的PAX6基因致病突变.方法 采集先证者及其患病女儿、表型正常父母和弟弟的外周静脉血,提取DNA,对先证者PAX6的全部外显子及外显子内含子接头处进行PCR扩增及测序,发现异常后检测其他家庭成员的PAX6基因是否存在此改变;选取PAX6基因附近的STR进行亲缘关系检测和突变来源鉴定.结果 患者的PAX6基因c.219位缺失一个T的(c.219delT),造成移码突变,使肽链合成提前终止;其患病的女儿也有同样改变;先证者的父母和弟弟均无此改变.先证者发生突变的等位基因条带来源于其父亲,其弟获得同样的父源基因标记.结论 先证者PAX6基因的c.219delT改变为致病突变,且为新生突变.     

PAX6基因R203X无义突变导致家族性先天无虹膜

目的探讨一个先天性无虹膜家系致病的分子基础。方法对一个先天性无虹膜家系进行全面的眼部检查,采集该家系的4例患者和两名健康成员外周静脉血,提取基因组DNA。采用DNA直接测序的方法分析无虹膜候选致病基因PAX6的14个外显子及其外显子-内含子拼接部的序列。结果该家系患者PAX6基因第8外显子存在一个杂合性突变c.C607T,导致编码蛋白在203位的精氨酸(p.R203X)处提前终止,产生一个变异蛋白;而家系正常成员未发现此突变,表型与突变位点呈共分离。结论 c.C607T(p.R203X)突变是PAX6基因导致无虹膜的突变热点之一,也存在于中国无虹膜家系中。     

多发性内分泌腺瘤综合征家系MEN1基因突变及功能分析

目的对一例多发性内分泌腺瘤综合征（multiple endocrine neoplasia type1,MEN1）家系进行基因突变检测及功能分析,以探讨MEN1发病的分子机制。方法对家系两名确诊患者及其他6名成员进行相关生化检查,留取外周血液标本,提取基因组DNA,采用PCR方法扩增MEN1基因所有编码序列,包括9个外显子及外显子／内含子边界,并进行直接测序。免疫组织化学法对2名患者肿瘤组织menin蛋白进行检测。结果2名患者MEN1基因第三外显子存在插入突变C．433-434ins CTTC,可导致开放阅读框移位并提前出现终止密码子。家系其他成员未发现MEN1基因突变。患者肿瘤组织中无menin蛋白表达。结论一种新型的MEN1基因突变形式被定位,这将有利于MEN1疾病的早期分子诊断。     

颗粒状角膜营养不良家系的BIGH3基因突变

目的 以基因突变分析一角膜营养不良家系的致病分子基础.方法 应用PCR产物直接DNA测序及限制性内切酶分析检测家系中7例患者和6例表型正常成员的K3、K12和BIGH3基因突变情况.结果 该家系患者成员在K3与K12基因的编码序列区没有发现突变,而BIGH3基因外显子12存在CGG＞TGG(R555W)突变杂合子,家系表现正常成员及正常对照均无BIGH3基因突变;限制性内切酶分析结果显示突变与疾病表现型呈完全共分离.结论 利用基因突变分析确诊我国首例报道的Meesmann角膜营养不良家系属于颗粒状角膜营养不良,且为BIGH3 R555W杂合突变类型.     

毛细管电泳技术快速检测p53基因点突变

目的：探讨利用毛细管电泳技术快速检测p53基因点突变的临床应用价值。方法：采用毛细管电泳作SSCP分析，检测20例结肠癌肿瘤标本p53基因第7外显子PCR扩增产物，并与传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果进行比较，最后用DNA序列测定判断其准确性。结果：20例结肠癌标本中，毛细管电泳技术检测出5例标本(Ca4，Ca6，Ca7，Ca8，Ca14)有突变，而凝胶电泳结合银染技术仅检出4例标本(Ca4，Ca6，Ca7，Cal4)有突变，测序证实经毛细管电泳所检出的5例标本均存在点突变。结论：对于PCR产物的单链构象多态性分析，毛细管电泳技术是一种更加快速、简便、敏感的方法，可应用于临床筛查基因点突变。     

在散发型腓骨肌萎缩症患者中未检测出LMNA基因突变

TheCharcot Marie Tooth(CMT)disease,alsoknownasthehereditarymotorandsensoryneuropathy(HMSN),isagroupofinheritedneuropathies.Itisacommondiseasebothaffectingchildrenandadultswithanestimatedprevalenceof1in2500.CMTischarac terizedclinicallybydistalmusclewastin…     

喉癌p53基因点突变研究

目的　探讨喉癌组织 p5 3基因点突变的频率、特征。方法　选用 P5 3蛋白表达阳性的喉癌标本2 2例 ,正常喉组织 2例 ,采用聚合酶链反应 -限制性内切酶片段长度多态性 (PCR- RFL P)、单链构象多态性 (SSCP)及 DNA直接测序法分析 p5 3基因第 7外显子第 2 49位密码子的点突变。结果　在 2 2例喉癌中有 3例发生突变 ,分别位于 2 48、2 5 0及 2 5 4密码子 ,表现为碱基 C的丢失和 A→ T颠换 ,但无 2 49密码子突变。结论　在喉癌中 p5 3基因第 7外显子的第 2 49位密码子的突变可能并不常见     

原发性肝细胞性肝癌中p16基因的失活与P16蛋白表达的研究

为探讨ｐ１６基因与原发性肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）的关系,作者分别采用多重ＰＣＲ、ＳＳＣＰ以及以ＰＣＲ为基础的甲基化分析法,对２５例原发性ＨＣＣ标本及其相应的非肿瘤肝组织标本中ｐ１６基因的缺失,点突变及甲基化情况进行了检测。另用免疫组化ＳＬＡＢ法对３５例（包括前述已作基因检测的２５例）原发性ＨＣＣ肿瘤标本及其相应的非肿瘤组织标本中Ｐ１６蛋白的表达情况进行了检测。结果：２５例原发性ＨＣＣ肿瘤标本中,３例     

聚合酶链反应-单链构象多态性分析在家族性高胆固醇血症研究中的应用

目的：探讨聚合酶链反应－单链构象多态性分析（polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism，PCR－SSCP）在家族性高胆固醇血症（familial hypercholesterolemia,FH)研究中的应用价值。方法：提取FH患者外周血基因组DNA，进行PCR－SSCP及DNA序列分析。结果：对1家2例临床诊断为FH的患儿及其父母从基因水平明确了诊断。LDL受体基因突变是位于第6外显子的移框突变，结论：PCR－SSCCP可以从基因水平对FH患者明确诊断，并可对先证者家族系成员早期诊断，以便提供咨询和指导。     

Study of Mutation in Tyrosine Protein Kinase of Insulin Receptor Gene in Patients with Polycystic Ovarian Syndrome

Objective To explore the molecular mechanism of insulin resistance in the patients with polycystic ovarian syndrome (PCOS ) Methods Polymerase chain reaction, silver staining-single strand conformation polymorphism(PCR-SSCP ) and DNA direct sequencing were used to detect the mutation of insulin receptor (INSR) gene in exon 17～21 with the abdominal wall adipose tissue from 31 patients with PCOS (PCOS Group) and 30 patients with pure hysteromyoma in reproductive lift (Control Group).Results Twenty-two variant SSCP patterns in exon 17 of INSR gene were detected.Direct sequence analysis of exon 17showed that homozygous nonsense mutation was two alleles single nucleotide polymorphism (SNP) at the codon 1058 ( CAC→CAT). Exons 18～21 were not detected with any significantly mutation. The INSR gene His^1058C→T substitution collecting rate and insulin resistance were significantly higher in the PCOS group than in the control group (P=0. 0293, P＜0. 05, P＜0. 01).Conclusion It is suggested that the SNP in codon 1058 of the INSR gene might be related with the insulin resistance in PCOS patients, which has hereditary tendency.And the missense mutation,nonsense mutation and frameshi ft mutation at exons 18～21 in tyrosine protein kinase region of INSR gene for PCOS patients were not frequently observed.     

先天性眼外肌纤维化伴少年白发家系的KIF21A基因突变分析

目的对先天性眼外肌纤维化(Congenital fibrosis of the extraocular muscles,CFEOM)伴少年白发家系进行候选致病基因KIF21A突变筛查。方法应用Wizard Genomic DNA Purification试剂从家系成员外周静脉血中提取基因组DNA;以先证者基因组DNA为模板,PCR扩增KIF21A基因外显子8、20和21的DNA序列,PCR产物纯化后进行DNA直接测序筛查突变位点。一旦发现可疑性变异,则采用DNA双向测序方法在其他家系成员进行疾病与突变共分离分析以及进一步确认其是否为致病性突变位点。结果该家系三代呈常染色体显性遗传,临床表型大致相同,可确诊为CFEOM1型。KIF21A基因突变筛查发现患者在第21外显子携带c.C2860T杂合性突变,正常成员没有,临床表型与基因型呈共分离。该突变为一个已知突变,可导致KIF21A蛋白第954位的精氨酸变为色氨酸(p.R954W)。结论 KIF21AR954W突变是导致该家系患者眼外肌纤维化致病的遗传基础,是否与少年白发相关尚待进一步研究。     

Molecular and immunohistochemical study of the inactivati on of the p16 gene in primary hepatocellular carcinoma

Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓｏｆｐ16ｇｅｎｅａｒｅｋｎｏｗｎｔｏｏｃｃｕｒｉｎｍａｎｙｐｒｉｍａｒｙｔｕｍｏｒｓ ,ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｍｅｌａｎｏｍａ ,ｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｓ ,ｅｓｏｐｈａｇｅａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ ,ｂｒａｉｎｔｕｍｏｒｓａｎｄｔｈｅｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ 1 5　Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｐ16ｇｅｎｅｏｃｃｕｒｓｖｉａｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ,ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓｄｅｌｅｔｉｏｎ,ｐｏｉｎｔ…     

用聚合酶链反应方法检测人睾丸精原细胞瘤中的P53基因突变

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）、单股构造多态性分析及直接ＤＮＡ测序方法检测１７例人睾丸精原细瘤中的Ｐ５３基因外显子５～８突变。发现有４例肿瘤组织中的Ｐ５３基因有点突变，分别位于外显子５的密码子１４１、外显子７的密码子２３８和２５８以及外显子８的密码子２７０，这些突变均可导致蛋白质氨基酸的改变。结果提示Ｐ５３基因的突变和人类睾丸精原细胞瘤的发生有关。     

中国人遗传性并指畸形家系HOXD13基因突变鉴定

目的:研究一个中国人并指(趾)畸形(synpolydactyly,SPD)家系,检测家系成员中是否存在同源盒D13 基因(homeobox D13,HOXD13 )突变.方法:采集SPD 患者及其家系成员的外周血,提取基因组DNA,设计针对HOXD13 基因特异性引物,进行PCR 扩增,产物经2%琼脂糖凝胶电泳检测,并进行测序鉴定.结果:本家系3代共23人, 6人患病,研究发现患者HOXD13 基因第一个外显子中多聚丙氨酸链由15个延长至22个,第二个外显子基因序列正常.结论:首次揭示中国人并指(趾)畸形家系HOXD13 基因存在多聚丙氨酸延展增加7个丙氨酸的突变形式,表明一定数目的丙氨酸延展可能是导致并指(趾)畸形的重要因素.     

肝豆状核变性基因的一种新型错义突变

了解中国人肝豆状核变性患者基因（ＡＴＰ７Ｂ基因）的突变情况，为该病的诊断和治疗提供依据。方法用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＡＴＰ７Ｂ基因的外显子片段，通过ＤＮＡ单链构象多态（ＳＳＣＰ）寻找突变，以ＤＮＡ测序予以鉴定。结果在１４１例肝豆状核变性患者中发现４例脑型患者的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ电泳带存在相同的异常迁移。ＤＮＡ测序均显示为第６６２密码子（ＴＣＣ）第二碱基发生由Ｃ→Ｇ的颠换，导致其编码的丝氨酸（Ｓｅｒ）变为半胱氨酸（Ｃｙｓ）。结论在４例脑型肝豆状核变性患者中，发现了一个未见报道的新突变类型（Ｓｅｒ６６２Ｃｙｓ）。     

新疆哈萨克族食管癌APC抑癌基因等位基因杂合缺失和点突变研究

目的：探讨抑癌基因在哈萨克族（简称哈族）食管癌发生、发展中的作用,阐明哈族食管癌高发的机理,从分子水平提供依据。方法：应用ＰＣＲ技术并配合限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析和银染的单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析法对４１ 例新疆地区原发性食管癌及正常组织中家族性结肠腺瘤样息肉易感基因（ＡＰＣ）第１１ 外显子杂合缺失（ＬＯＨ）及点突变进行检测。结果：３１ 例信息个体中１３ 例显示杂合缺失,杂合缺失率为４１．９％ ,其中哈族的杂合缺失率为５０．０％ （７／１４）,而汉族的杂合缺失率为３５．３％ （６／１７）。点突变率为２４．４％ （１０／４１）,其中哈族食管癌的点突变率为３０．０％ （６／２０）,汉族食管癌的点突变率为１９．０％ （４／２１）。结论：ＡＰＣ抑癌基因第１１ 外显子的ＬＯＨ 存在于食管癌的各个临床分期,ＬＯＨ不是癌症发生的结果,可能是癌症发生的早期因素,且与食管癌的恶性程度有关。     

FBN1 mutation in Chinese patients with Marfan syndrome and its gene diagnosis using haplotype linkage analysis

Objectives To analyze the FBN1 mutations in Chinese patients with Marfan syndrome (MFS) and to make a genetic diagnosis based on haplotype linkage analysis for MFS.Methods Nine MFS families (17 patients) were analyzed with single strand conformation polymorphism (SSCP) and sequencing. Four primers were designed for the flanking sequences of FBN1 gene and used for haplotype-segregation analysis of MFS (B).Results SSCP band alteration was detected in the PCR products for exon 25 in MFS(A) Ⅱ : 1.Direct sequencing revealed a small 13 bp deletion; the deleted sequence is gccTcTgcaccca at bases 3243 -3456 of the cDNA in exon 25. This mutation was novel. MFS(B) families were analyzed using the haplotype linkage technique. The data suggested that MFS(B) families were linked to the FBN1 gene. The proband‘ s daughter was an asymptomatic patient.Conclusion The combination of mutation detection and chromosome haplotype analysis can provide better evidence for a genetic diagnosis of MFS.     

多发性脂囊瘤患者角蛋白17基因突变的研究

目的 了解多发性脂囊瘤和角蛋白17基因异常的关系。方法 应用逆转录-聚合酶链反应及其产物直接测序,巢式聚酶链反应及限制性片段长度多态性分析。研究多发性脂囊瘤家系中患者患肿组织cDNA及外周血DNA的角蛋白17基因突变。结果 囊肿组织显示角蛋白17基因第94位密码子,428碱基发生C→A的突变,使原编码的氨基酸曲精氨酸变为半胱氨酸,即R94C的杂合突变。巢式聚合酶链反应后Acil限制酶谱多态性分析,显示患者多周血DNA标本均有一条突变等位基因缺乏该酶酶切位点,产生200bp的条带,另有一条野生型等位基因已被切开,形成2条带,分别为108bp,92bp,进一步证实R94C的突变,系杂合性突变,而正常人10人份及2000人份正常人DNAPool标本2条等位基因均有Acil的酶切位点,只显示108bp和92bp3条带。结论 角蛋白17基因R94C的突变,是导致中国人多发性脂囊瘤的遗传学基础之一。这一研究结果为该病的基因诊断及遗传咨询提供了科学依据。     

RET基因Cys 634 Trp突变致多发性内分泌腺瘤2A型

目的 明确一个多发性内分泌腺瘤2A型（MEN2A）家系致病基因PET的基因型。方法 应用PCR技术对RET基因的第10、11、13、14、15和16外显子进行扩增,将扩增产物纯化后双向测序。结果 先证者及其弟弟RET基因第10、13、14、15和16外显子均无异常,第11外显子的第14996位核苷酸存在C-G替代,其反义链测序为14996 G-C替代,这种替代（TGC-TGG）使编码的氨基酸由半胱氨酸突变为色氨酸（Cys 634 Trp,C 634 W）。正常对照RET基因的第10、11、13、14、15和16外显子区域均未见异常。结论 该MEN2A家系的遗传基础是RET基因Cys 634 Trp突变。