0.75%罗哌卡因腰硬联合麻醉在阑尾手术中的应用

目的 观察0.75%罗哌卡因腰硬联合麻醉在阑尾手术中的应用.方法 随机选取急诊阑尾手术患者60例,分为罗哌卡因(A组)和布比卡因(B组),腰硬联合麻醉下蛛网膜下腔给药.A组蛛网膜下腔注入0.75%罗哌卡因2ml,B组注入0.75%布比卡因2ml.结果 B组感觉阻滞起效时间为(1.5±0.5)min、最高感觉阻滞平面为(9±1.5),明显低于A组的明显低于A组的(4±1.5)min和(11.8±0.8),(P＜0.05);B组运动阻滞起效时间为(3±1.4)min明显低于A组的(12±3)min,(P＜0.05);B组最大运动阻滞程度为(3±0)mg、运动阻滞持续时间为(207±67)min,明显高于A组的(1.8±1.4)mg和(118±36)min,(P＜0.05);两组感觉阻滞持续时间比较无显著差异(P＞0.05).结论 0.75%罗哌卡因腰硬联合麻醉是阑尾手术安全可靠的麻醉选择.     

ABO血型不合孕妇外周血B淋巴细胞PD-1表达与血清IgG类血型抗体效价的相关性

目的 探讨母儿ABO血型不合孕妇外周血B淋巴细胞上程序性死亡受体-1(PD-1)的表达与血清IgG抗A(B)效价的相关性.方法 采用微柱凝胶法检测50例母儿ABO血型不合孕妇的血清 IgG抗A(B)效价,流式细胞术检测外周血B淋巴细胞PD-1的表达.统计学方法分析两者的相关性.结果 IgG类血型抗体高效价组[IgG抗A(B) ≥1:128]孕妇外周血B淋巴细胞PD-1表达频率为(3.38±1.25)%,显著低于低效价组孕妇的(6.35±3.49)%,Pearson相关分析显示外周血B淋巴细胞PD-1的表达与血清IgG类血型抗体效价呈负相关(r=-0.355,P＜0.05).结论 PD-1/PD-L信号通路对B淋巴细胞产生IgG类血型抗体可能具有重要的调节作用.     

Tim-1+CD19+调节性B细胞在肾移植受者外周血的鉴定与功能研究

目的 观察肾移植受者外周血中T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子1 (Tim-1)+ CD19+B细胞比例,研究调节性B细胞的功能特性.方法 2009年12月至2010年6月解放军第三○九医院全军器官移植中心所行亲属活体肾移植供者和受者35对,肾移植受者移植术前(术前组,n=35)及术后4周(术后组,n =35)采集外周血,以健康供者作为对照组(n=35),采用流式细胞术分析各组外周血CD19+B细胞数并分选各组Tim-1+ CD19+B细胞.分离供、受者外周血淋巴细胞进行混合培养后,分别加入Tim-1+ CD19+和Tim-1 - CD19+B细胞,并以此分为Tim-1+组和Tim-1 -组,不加B细胞作为空白组,Annexin V-FITC/PI双染法观察各组细胞凋亡情况,流式细胞术分析各组细胞因子含量.结果 术前组、术后组和对照组CD19+B细胞绝对值分别为(170 ±90)、(202 ±99)、(155±71)个/μl,术后组高于对照组且差异有统计学意义(P =0.0300);3组Tim-1+ CD19+B细胞比率分别为(2.20±0.98)％、(35.46±10.66)％、(1.95±0.95)％,术后组高于对照组和术前组(均P＜0.01).混合淋巴细胞培养中,Tim-1+组、Tim-1 -组和空白组细胞早期凋亡率分别为(45.31±12.37)％、(10.92±2.14)％、(1.93±0.26)％,Tim-1+组高于Tim-1 -组和空白组(均P ＜0.05);3组细胞晚期凋亡率分别为(21.32±5.67)％、(2.32±0.31)％、(1.27±0.19)％,Tim-1+组高于Tim-1 -组和空白组(均P ＜0.05).Tim-1+组培养上清液中白细胞介素10的水平显著高于Tim-1 -组[(5.32±0.37)pg/ml比(2.46±0.25) pg/ml,P=0.0001],干扰素γ水平低于Tim-1 -组[(1.51±0.22) pg/ml比(4.69±0.32)pg/ml,P=0.0015].结论 肾移植受者外周血中存在Tim-1+ CD19+B细胞,具有促进淋巴细胞凋亡的功能.Tim-1+ CD19+B细胞作为一群新的调节性B细胞亚群,在移植免疫反应中发挥重要作用.     

低氧时NF-кB和P53在大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡中的变化

对培养的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)用免疫细胞化学、western blot和原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)进行检测.免疫细胞化学染色发现无血清培养基(SFM)组中PASMC核因子-кB(NF-кB)阳性指数明显低于低氧48 h(H48h)组(P＜0.05),H48h组P53阳性指数与SFM组相比有增高趋势.增殖细胞核抗原阳性指数(PI)在SFM组明显低于H48h组(P＜0.05),SFM组抑制性-кBα(I-кBα)的含量是H48h组的2.5倍,SFM组的凋亡指数(AI)明显高于H48h组(P＜0.05);NF-кB阳性指数与AI呈负相关(r=-0.737,P＜0.05)而与PI呈正相关(r=0.802,P＜0.05).提示:低氧时PASMC中NF-кB活性明显增加,表明NF-кB可能抑制PASMC的凋亡并促进其增殖;低氧时P53有增高的趋势,其对PASMC增殖和凋亡的影响可能被激活的NF-кB抑制.     

Sertoli细胞诱导异基因T淋巴细胞凋亡的研究

目的 探讨大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)在体外与同种异体来源T淋巴细胞共同培养能否诱导T淋巴细胞凋亡.方法 用SABC法检测T淋巴细胞Fas和Sertoli细胞FasL的表达率.Sertoli细胞和异基因T淋巴细胞共同培养实验分为,A组(对照组)只有T淋巴细胞培养,B组为T淋巴细胞与经过FasL单克隆抗体处理过的等量Sertoli细胞共同培养;C组T淋巴细胞与培养Sertoli细胞24 h的培养液上清共同培养;D组为T淋巴细胞与等量Sertoli细胞共同培养;用TUNEL法检测各组淋巴细胞的凋亡指数.结果 T淋巴细胞Fas的表达率为(91.67±2.08)%;Sertoli细胞FasL的表达率为(90.43±3.52.)%.C组和D组淋巴细胞的凋亡指数显著大于A组和B组(P＜0.01);D组T淋巴细胞的凋亡指数显著大于C组(P＜0.01).结论 T淋巴细胞高表达Fas,Sertoli细胞高表达FasL;在体外共同培养的条件下,Sertoli细胞能够诱导异基因T淋巴细胞的凋亡,T淋巴细胞凋亡原因可能与Sertoli细胞产生FasL有关.     

抑制核因子-κB对糖尿病大鼠肾组织MT3-MMP mRNA表达的影响

[目的]研究抑制NF-κB活性对糖尿病大鼠肾组织膜3型基质金属蛋白酶(MT3-MMP)mRNA表达的影响.[方法]纯种雄性Wistar大鼠分为3组:A组为正常对照组(11只),B组为糖尿病大鼠未干预组(11只),C组为吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC,NF-κB活性抑制剂)干预组(9只).以链脲佐菌素制备糖尿病模型.大鼠饲养18周后取出肾脏,以电泳迁移率变动分析技术检测NF-κB活性,RT-PCR检测MT3-MMP mRNA表达,以透射电镜检测肾小球基底膜厚度及系膜基质密度,并收集24 h尿检测尿白蛋白排泄(UAE).[结果]NF-κB活性在B组大鼠肾组织(1.85±0.54)×106明显高于A组(0.07±0.11)×106,P＜0.01,C组(0.25±0.25)×106明显低于B组,P＜0.01.肾组织MT3-MMP mRNA表达B组大鼠(1.37±0.96)明显高于A组(0.75±0.34),P＜0.01,C组(0.75±0.36)明显低于B组(P＜0.01).与A组大鼠比较,肾小球基底膜厚度(531.6±107.6)nm vs (312.4±25.4)nm,P＜0.01)及系膜基质密度(56.41±6.78) vs (33.95±5.22),P＜0.01,均显著增高,C组肾小球基底膜厚度(315.8±21.4)nm及系膜基质密度(37.97±7.37)均显著低于B组,均P＜0.01.UAE在B组大鼠(2.18±1.98)显著高于A组(0.41±0.47),P＜0.05,以及C组(0.56±0.72),P＜0.05.[结论]糖尿病大鼠肾组织NF-κB活性及MT3-MMP mRNA表达增加,抑制NF-κB活性可使肾组织MT3-MMP mRNA表达降低.     

人重组p53腺病毒感染p53突变mBGC-823细胞对顺铂敏感性的影响

目的:观察人重组p53腺病毒(rAd-p53)感染含突变型p53基因胃癌BGC-823细胞(mBGC-823)对顺铂(CDDP)敏感性的影响.方法:采用免疫细胞化学和Western Blot法检测rAd-p53(5×1010vp/L)感染mBGC-823细胞48 h后P53蛋白的表达;MTT法测定rAd-p53单药组(5×109、5×1010、5×1011vp/L)、CDDP单药组(3.125、6.25、12.50 mg/L)及联合用药组(5×109/3.125、5×1010/6.25、5×1011/12.5vp,mg/L)作用后mBGC-823细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测其细胞周期与凋亡率.结果:rAd-p53感染mBGC-823细胞48 h,P53蛋白的阳性表达率为(63.74±4.21)%,显著高于对照组的(30.80±5.32)%(t=-13.039,P＜0.001);rAd-p53、CDDP单药及联合用药均可抑制细胞生长,其作用呈剂量依赖性(P均＜0.001).rAd-p53单药产生以G2/M期为主的阻滞,凋亡率为(11.76±2.33)%;CDDP单药产生以G1期为主的阻滞,凋亡率为(24.70±2.42)%;联合用药组产生G2/M期为主阻滞,凋亡率为(51.88±2.03)%;各组凋亡率比较差异有统计学意义(F=1 620.595,P均＜0.001).结论:腺病毒介导p53基因感染mBGC-823细胞改变了细胞内在突变的p53状态,诱导凋亡并增加对CDDP的敏感性.     

白细胞介素-17对中性粒细胞凋亡的影响

目的:研究白细胞介素(interleukin,IL)-17对中性粒细胞凋亡的影响并探讨其可能的内在机制.方法:分离培养健康人外周血中性粒细胞,分别加入IL-17、热灭活IL-17(X-IL-17)和地塞米松,并设立对照组.通过形态学观察和DNA片段化的检测分析凋亡情况;利用免疫细胞化学方法检测中性粒细胞Bax蛋白的表达.结果:培养中对照组中性粒细胞呈现出凋亡极具特征性的形态学改变;随时间延长,凋亡指数(apoptosis index,AI)呈上升趋势,0 h为(1.54±0.08)%,12 h为(11.48±1.80)%(与0 h比较,P＜0.05),24 h为(34.19±1.92)%(与0 h比较,P＜0.01).在50μg/L质量浓度时IL-17促进中性粒细胞凋亡,0,12,24h的AI分别为(1.43±0.17)%(与对照组0 h比较,P＞0.05),(20.47±6.22)%(与对照组12 h比较,P＜0.01)和(40.74±3.48)%(与对照组24 h比较,P＜0.05);而IL-17在质量浓度为5μg/L和0.5μg/L浓度时可抑制凋亡,24 h的AI分别为(14.24±4.26)%和(19.86±4.39)%,与对照组24 h比较,P均＜0.01.50μg/L X-IL-17组24h的AI为(33.22±1.61)%(与对照组24h比较,P＞0.05).中性粒细胞凋亡的同时伴有DNA的片段化.免疫化学染色显示同期中性粒细胞Bax蛋白表达量与AI呈强正相关(r=0.932,P＜0.01).结论:体外IL-17对中性粒细胞的凋亡有调节作用,在较高浓度下加速凋亡,在较低浓度下延缓凋亡.IL-17对Bax蛋白表达的调控可能是其内在机制之一.     

二硫代氨基甲酸吡咯烷联合卡铂对U251神经胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)联合卡铂(CBP)对U251神经胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响.方法 将传代生长状态良好的U251神经胶质瘤细胞随机分为4组:对照组加常规培养液,实验A组加PDTC(0.1 mg/mL)0.01mL,实验B组加CBP(1 mg/mL)0.01 mL,实验C组加PDTC(0.1 mg/mL)0.01 mL+CBP(1 mg/mL)0.01 mL.比较4组U251神经胶质瘤细胞的增殖和凋亡的细胞形态.结果培养12、24、36 h,对照组U251神经胶质瘤细胞的抑制率[(4.28±0.021)%、(9.34±0.023)%、(13.86±0.025)%]、实验A组[(10.63±0.019)%、(15.06±0.041)%、(28.34±0.032)%]、实验B组[(24.16±0.025)%、(33.71±0.053)%、(39.42±0.041)%]和实验C组[(32.15±0.016)%、(40.82±0.046)%、(45.27±0.031)%]比较差异有统计学意义(P＜0.05);对照组细胞凋亡率(0.8±0.3)%、实验A组(29.1±1.5)%、实验B组(38.7±3.2)%、和实验C组(61.3±2.7)%比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PDTC联合CBP可抑制U251神经胶质瘤细胞增殖,并诱导其凋亡.     

细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Bak mRNA在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其意义

目的:探讨细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Bak mRNA在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其意义.方法:采用RT-PCR方法测定36例正常足月妊娠妇女(A组)、24例轻度子痫前期患者(B组)和17例重度子痫前期患者(C组)胎盘组织中Bcl-2、Bax、Bak mRNA表达水平.结果:(1)与B组(1.563±0.398)和A组(1.723±0.300)相比,C组Bcl-2 mRNA表达水平(0.642±0.288)明显降低(q=12.41,P＜0.05;q=15.69,P＜0.05),B组与A组之间无明显差异(q=2.6,P＞0.05).(2)与A组(0.347±0.191)相比,B、C组BaxmRNA表达水平(分别为0.745±0.260、1.335±0.308)明显升高(q=8.79,P＜0.05;q=19.54,P＜0.05),C组较B组升高更为显著(q=10.83,P＜0.05).(3)与B组(0.875±0.322)和A组(0.809±0.381)相比,C组BakmRNA表达水平(2.197±0.546)明显升高(q=14.52,P＜0.05;q=16.42,P＜0.05),B组与A组之间无明显差异(q=0.87,P＞0.05).结论:细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Bak mRNA在子痫前期患者胎盘组织中的差异表达参与了子痫前期的病理生理过程.     

系统性红斑狼疮患者血浆降低间充质干细胞对B淋巴细胞的抑制作用

目的研究系统性红斑狼疮（SLE）患者血浆对健康人骨髓来源的间充质干细胞（MSCs）免疫抑制作用的影响。方法采用 SLE患者富集血浆替代胎牛血清,共培养MSCs与SLE患者的B淋巴细胞,检测MSCs对B淋巴细胞增殖能力与成熟的影响。 设置胎牛血清作为对照组。数据采用SPSS12.0软件进行学生t检验统计学分析,P<0.05认为差异有统计学意义。结果正常 MSCs能抑制脂多糖刺激的SLE患者来源B细胞增殖,降低B细胞表面表达的CD27与CD38。SLE患者富集血浆能抵制MSC 对B淋巴细胞增殖与成熟的抑制作用。结论正常MSCs能抑制SLE患者B淋巴细胞增殖与成熟,改变B淋巴细胞亚群所占比 例。SLE患者血清能抑制MSCs对B淋巴细胞的免疫抑制作用,或将负向影响间充质干细胞对SLE的疗效。联合应用双膜过滤 血浆置换术,有望提高间充质干细胞移植对SLE的疗效。     

携带TRAIL的骨髓间充质干细胞联合吉西他滨对人胰腺癌细胞Panc-1的杀伤作用

目的研究TRAIL基因修饰的骨髓间充质干细胞(MSC)联合吉西他滨对人胰腺癌细胞的杀伤作用。方法构建重组腺病毒Ad-CMV-TRAIL,体外转染人骨髓间充质干细胞。通过观察绿色荧光的表达强度,确定最佳转染条件。MTT法检测Ad-CMV-TRAIL转染对MSC细胞生长状态的影响。Transwell小室共培养携带TRAIL的MSC和胰腺癌细胞Panc-1,联合应用吉西他滨,AnnexinⅤ-FITC双标法检测凋亡的发生。Western blot法检测Caspase凋亡相关蛋白的表达变化。结果 Ad-CMV-TRAIL以MOI=10体外感染MSC 24h,显微镜下观察80%以上的MSC表达绿色荧光,转染组细胞高表达TRAIL。Ad-CMV-TRAIL转染之后的MSC仍然可以增殖,活力无明显改变。携带TRAIL的MSC与Panc-1细胞共培养之后,可诱导部分Panc-1细胞发生凋亡,凋亡率达(13.38±3.42)%。而携带TRAIL的MSC与Panc-1细胞共培养之后可以增强吉西他滨的杀伤效果,与单独吉西他滨处理组相比差异显著[(52.10±3.41)%vs.(29.68±1.71)%,P=0.002]。Western blot检测结果显示MSC-TRAIL和吉西他滨共同处理可以诱导凋亡相关的Caspase-8和Caspase-3蛋白活化。结论 MSC可能作为TRAIL的肿瘤靶向载体在胰腺癌的治疗中发挥作用。     

大鼠间充质干细胞对BALB/c小鼠体外淋巴细胞实验的影响

目的 研究大鼠间充质干细胞(MSC)对BALB/c小鼠淋巴细胞增殖和CD4+CD25+调节性T细胞亚群的变化。方法 分离、扩增SD大鼠MSCs,流式细胞术检测表面标志以鉴定。取第5代MSC与分离的小鼠淋巴细胞在刀豆蛋白(ConA)刺激下共培养5天 ,流式细胞仪测定细胞增殖,CD4+CD25+调节性T细胞亚群比例的变化。结果 当淋巴细胞: MSCs在1:10及1:50时均可抑制ConA刺激下可抑制小鼠淋巴细胞增殖,淋巴细胞: MSCs在1:10 时CD4+CD25+调节性T细胞亚群比例明显升高。结论 大鼠MSC具有异种基因免疫抑制作用     

HAX-1对MRL/lpr小鼠狼疮活动性影响的研究

目的 观察抗凋亡蛋白HAX-1对MRL/lpr狼疮鼠狼疮活动性的影响.方法 重组腺病毒AdHAX-1经腹腔注射MRL/lpr小鼠,每周2次,连续注射4周.分别在注射前、注射2周后及4周后检测小鼠血清中抗核抗体(ANA)、循环免疫复合物(CIC)、抗双链DNA抗体(抗dsDNA抗体)、抗组蛋白抗体和干扰素γ(IFN-γ)水平,并检测注射前及注射后外周血的白细胞计数及尿蛋白水平;经RNAi使HAX-1表达下调后,观察脾脏淋巴细胞的增殖以及IFN-γ的分泌水平.结果 HAX-1可使MRL/lpr小鼠的尿蛋白以及抗dsDNA抗体、ANA、抗组蛋白抗体、CIC明显升高,且产生IFN-γ水平升高,除抗组蛋白抗体及CIC外,其余指标与磷酸盐缓冲液对照组(PBS组)及对照腺病毒组(AdEGFP组)相比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).重组腺病毒组(AdHax-1组)小鼠肾小球内免疫复合物沉积强度明显较强且阳性肾小球数目较多,与对照组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).AdHax-1组肾小球的平均病变积分达1.50±0.34,与对照组(PBS组:0.67±0.14;AdEGFP组:0.81±0.26)比较差异均有统计学意义(均P＜0.01).pGenesil-HAX-1可使淋巴细胞的增殖率明显降低(P＜0.05),IFN-γ分泌水平明显下降(P＜0.01).结论 HAX-1是调节系统性红斑狼疮淋巴细胞凋亡的一个重要因素,重组AdHAX-1可使MRL/lpr小鼠狼疮样症状加重,下调HAX-1表达可使病情减轻.     

骨髓间充质干细胞对高氧暴露新生大鼠肺损伤的干预作用

目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)对高氧引致新生大鼠肺组织损伤的干预作用.方法 采用贴壁选择法分离、培养、扩增大鼠骨髓MSC,并以5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)进行标记,注射前以磷酸盐缓冲液(PBS)稀释;32只3日龄SD大鼠随机分为4组:A、C组高氧(95%)暴露7 d后,腹腔分别注射含和不含5×104MSC的PBS各50μl;B、D组空气暴露7 d后,腹腔分别注射含和不含5×104MSC的PBS各50μl.于注射后72 h(13日龄)腹腔注射10%水合氯醛后放血处死,肺组织病理学检测辐射状肺泡计数(RAC);支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数检测白细胞及其中性粒细胞;ELASA法检测肺组织匀浆肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β含量.免疫组化双染法检测BrdU和肺泡表面活性物质结合蛋白a(sP-A)表达情况.结果 (1)RAC(个):4组比较差异有统计学意义(11.0±1.0、13.9±1.1、9.6±0.7、14.0±1.1,P=0.000);A、C组均明显低于D组(均P<0.05),A组高于C组(P<0.05).(2)BALF细胞计数:4组白细胞(105/ml:0.85 ±0.21、0.18±0.10、1.44±0.69、0.21±0.06)和中性粒细胞(105/ml:0.32±0.12、0.06±0.02、0.73±0.35、0.07±0.02)计数比较,差异均有统计学意义(均P=0.000);A、C组均明显高于D组(均P<0.05);A组均低于C组(均P<0.05).(3)肺组织匀浆TNF-α及IL-1β含量:4组肺组织匀浆TNF-α(pg/ml:173±20、34±4、224 ±42、35±4)及IL-1β含量(pg/ml:530±74、210±33、948±82、216±30)比较,差异均有统计学意义(均P=0.000);A、C组均明显高于D组(均P<0.05),A组低于C组(均P<0.05).(4)免疫组化:A、B组均有BrdU及SP-A阳性细胞,A组还可见免疫双染阳性细胞;C、D组仅见SP-A阳性细胞.结论 腹腔注射Msc对高氧暴露新生大鼠的肺损伤起保护作用,其保护作用涉及多种机制.     

B7-H4对宫颈癌患者外周血活化T细胞增殖、凋亡和分泌细胞因子的影响

目的：观察重组人 B7-H4蛋白对宫颈癌患者外周血 T 细胞增殖周期、凋亡及分泌细胞因子的影响。方法B7-H4分别与15例宫颈癌患者外周血活化淋巴细胞混合培养48 h 后,采用流式细胞术分析 T 细胞增殖、细胞周期、凋亡及各亚群 T 细胞的变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)芯片检测培养上清液细胞因子含量。结果宫颈癌患者外周血 T 细胞与 B7-H4混合培养48 h 后,G1、G2和 S 期的 T 细胞分别占90.59%、8.55%和0.87%,空白对照组 T 细胞各期占92.83%、6.09%和1.13%;B7-H4组 CD4+ T 和 CD8+ T 细胞的 Ki67阳性率分别为2.13%±0.13%和1.03%±1.33%,空白对照组为2.74%±0.98%和1.71%±1.32%。B7-H4组较空白对照组 CD8+ T 和 CD4+ T 细胞占 T 细胞的比例下降,但 CD4+ T/CD8+ T 比值增高,CD4+ CD25+Foxp3+ T 细胞增多;B7-H4组混合培养上清液中 TGF-β1含量为(259.25±32.78)pg/mL,空白对照组为(202.75±20.17)pg/mL。B7-H4对宫颈癌患者外周血活化 T 细胞凋亡无明显影响。结论B7-H4使宫颈癌患者外周血活化 T 细胞被阻滞于 G2期, S 期细胞明显减少;B7-H4抑制 CD4+ T 和 CD8+ T 细胞增殖,但对 Foxp3+ T 细胞增殖和分泌 TGF-β1可能有促进作用;B7-H4对T 细胞凋亡无明显影响。B7-H4在抑制宫颈癌抗肿瘤细胞免疫中发挥作用,它可能成为宫颈癌免疫治疗的潜在靶点。     

人胎盘间充质干细胞对脐血淋巴细胞转化的影响

目的从人胎盘中分离间充质干细胞(MSC),研究胎盘MSC在脐血移植中的免疫调节作用。方法分离人胎盘组织灌流液中单个核细胞(MNC)贴壁培养、集落筛选,鉴定表面标志及纯度,向脂肪、成骨诱导鉴定多向分化潜能。应用3HTdR掺入法,观察胎盘MSC对成人外周血淋巴细胞及脐血淋巴细胞的免疫抑制作用。将不同数量胎盘MSC分别与成人外周血和脐血淋巴细胞共培养,加入植物血凝素(PHA)刺激淋巴细胞增殖,观察胎盘MSC对淋巴细胞转化的影响。结果从人胎盘组织中分离获得的贴壁细胞,具有同骨髓MSC相同的细胞表型及多向分化能力,可以显著抑制成人外周血和脐血淋巴细胞转化,抑制作用与MSC的数量呈正相关。与无MSC作用相比,当MSC为2×105/孔时对成人外周血和脐血淋巴细胞转化的抑制率分别为79.97%和64.06%,而当MSC为1.25×104/孔时抑制率则分别为46.83%和12.19%。结论从人胎盘中可以成功地分离出MSC,利用其对脐血淋巴细胞的免疫调节作用,除了可以作为与脐血造血干/祖细胞相适应的培养基质,还有望降低脐血移植中困扰已久的移植物抗宿主疾病(GVHD)问题,促进脐血移植的广泛应用。     

Cell multiplication, apoptosis and p-Akt protein expression of bone mesenchymal stem cells of rat under hypoxia environment

Objective :To elucidate whether cell multiplication, apoptosis, glucose intake and p-Akt protein expression of bone Mesenchymal Stem Cells(MSCs) of rats is influenced by a hypoxic environment ex vivo. Methods:Passage 3 of bone marrow MSCs taken from Wistar rats, were cultured in a culturing chamber with 94%N2,1%O2, 5%CO2 at 37℃. At different hypoxia time points, 0,0.5,1,4 and 8 h, glucose uptake was assayed by using radiation isotope 3H-G, Apoptotic Rate(AR) and dead rate(DR) were analyzed by flow cytometry(FCM) after Annexin V/PI staining, cell multiplication(by MTT methods) and p-Akt protein by immunocytochemistry and western blot. Results:Assay for CD29 ,CD44 ,CD71 ,CD34-, Tn T (after 5-azacytidine agent inducing) and ALP (after bone differentiation agent inducing) suggested these bone-derived cells were MSCs. The 3H-G intaking ratio (CPM/flask value:157 ± 11,110 ± 11,107 ± 13,103 ± 10,100 ± 9 and 98 ± 10) of MSCs at different hypoxia time points, significantly decreased compared to that of normoxia(P ＜ 0.01) and tended to descend slowly with hypoxia time duration, for which there was no statistical significance(P ＞ 0.05). The AR(0.09 ± 2.03%,12.9 ± 1.72%,13.7 ± 2.26%,13.8 ± 3.01% ,14.1 ± 2.78% and 14.7 ±4.01% at 0,0.5,1,4 and 8 h,respectively,P ＜ 0.01) and DR (0.04 ± 1.79% ,0.93 ± 1.85% ,3.11 ± 2.14%,4.09 ± 2.36% ,4.72 ±2.05% and 4.91 ± 3.72% at 0,0.5,1,4 and 8 h, respectively, P ＜ 0.05) at different hypoxia time points significantly increased compared to those time in normoxia; The AR further went up with time (P ＜ 0.05), however there was no statistical significance(P ＞ 0.05) for the DR. Optical absorption value of MTT methods at different hypoxia time points significantly decreased compared to those with a corresponding normoxia time (P ＜ 0.01 ) and degraded with time (in an hypoxic environment -P ＜ 0.01 ).IOD of p-Akt protein of MSCs at different hypoxia time points significantly increased (0.367 ± 0.031,0.556 ± 0.023,0.579 ±0.013, 0.660 ± 0.024, 0.685 ± 0.039 and 0.685 ± 0.011, respectively) compared to their equivalents in normoxia (P＜0.05), however, there was no statistical significance (P ＞ 0.05) for different hypoxia time points. Hypoxia may result in ultramicrostructure changes, such as defluvium of Microvilli, apoptotic body, "margination" and so on and are further aggravated with hypoxia time stretching. Conclusion: Hypoxia may lead to a depression of MSCs intaking glucose, creep of cell multiplication, upregulation of p-Akt protein and apoptosis of MSCs ex vivo.     

骨髓间质干细胞对B细胞免疫调节作用的影响

目的研究骨髓间质干细胞(MSCs)对B淋巴细胞免疫调节的影响。方法体外分离培养骨髓MSCs,流式细胞仪分选出B细胞,共培养,CpG+CD40L刺激48 h后,收集B细胞,再与分选的CD4+CD25-T细胞共培养,流式细胞术检测B细胞对T细胞炎性因子分泌功能的影响;B淋巴细胞与MSCs共培养,CpG+CD40L刺激72 h后,检测B细胞胞内抑炎因子IL-10的表达;分别加入不同调控通路的抑制剂,观察其对MSCs诱导B细胞产生IL-10的影响。结果与MSCs共培养后,B细胞对T细胞炎性因子IFN-γ分泌的抑制作用增强,IL-10表达水平显著增高;加入COX/PGE2信号通路的抑制剂Indomethacin预处理MSCs后,与其共培养的B细胞表达IL-10显著减少。结论 MSCs能诱导高表达IL-10的调节性B淋巴细胞的产生,该机制可能与COX/PGE2信号通路有关。     

高糖减弱肾组织干细胞条件培养液对缺氧损伤肾小管上皮细胞的修复作用

目的： 评估高糖对肾组织干细胞（kidney stem cells,KSC）条件培养液修复缺氧损伤肾小管上皮细胞（renal tubular epithelium cells,RTEC）作用的影响。方法： 分离肾乳头处的KSC,分别用正常糖浓度（简称“正糖”,5.6 mmol/L）和高糖（30 mmol/L）培养基对KSC进行预处理后制备KSC条件培养液。建立大鼠RTEC缺氧/复氧模型,比较高糖与正糖刺激后KSC条件培养液对缺氧/复氧RTEC修复作用的差异。结果： （1）缺氧4 h/复氧2 h为RTEC缺氧/复氧模型的最佳时间。（2）缺氧后,RTEC早期凋亡率和晚期凋亡率均升高,采用KSC条件培养液干预12 h和24 h后,与缺氧/复氧对照组相比,正糖缺氧/复氧组和高糖缺氧/复氧组RTEC的凋亡率均明显降低（P<0.01）。正糖组和高糖组比较,干预24 h后,正糖组RTEC的总体凋亡率显著低于高糖组（P=0.02）。（3）缺氧后,RTEC上清液的乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平明显升高（P<0.01）,超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）水平明显降低（P<0.01）。采用KSC条件培养液干预12 h和24 h后,与缺氧/复氧对照组相比,正糖缺氧/复氧组和高糖缺氧/复氧组的LDH和MDA水平均显著降低（P<0.01）,SOD水平均显著升高（P<0.01）。正糖组和高糖组比较,高糖组的LDH和MDA水平要显著高于正糖组（P<0.05）,SOD水平要显著低于正糖组（P<0.01）。结论： KSC条件培养液对缺氧损伤的RTEC有修复作用,这种作用主要是通过减少氧化应激、抑制细胞凋亡来实现的,而经高糖预处理的KSC条件培养液的抗氧化应激、抗凋亡作用减弱。