人体带绦虫的分子鉴定

目的：对采自云南大理的6条人体带绦虫进行虫种分子鉴定.方法：对云南省大理有排节片史的病人以槟榔-南瓜子法驱虫,对6条人体带绦虫成虫进行形态学鉴定;提取虫体基因组DNA,用亚洲带绦虫和牛带绦虫线粒体cox1基因片段的特异性引物对DNA进行常规PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测;将虫卵喂食2头幼猪（5×105/头）,40d后解剖检查.观察囊尾蚴寄生情况.结果：6条人体带绦虫的形态和牛带绦虫相似,亚洲带绦虫cox1片段PCR为阳性,扩增产物约260 bp,牛带绦虫cox1片段PCR均为阴性;只在感染幼猪肝脏发现有囊尾蚴寄生,其他组织和肌肉内没有囊尾蚴寄生.结论：形态学和分子生物学鉴定6条人体带绦虫标本均属于亚洲带绦虫.     

云贵两省三地牛带绦虫核糖体rDNA-ITS1序列分析

目的: 采用PCR克隆测序方法,对采自贵州省都匀、从江及云南省大理三地牛带绦虫,与台湾桃园牛带绦虫亚洲亚种标本进行比较,为贵州都匀、从江及云南大理牛带绦虫标本鉴别提供分子生物学证据,并进一步探讨牛带绦虫亚洲亚种分类学地位.方法: 取贵州都匀株、贵州从江株、云南大理株和台湾桃园株成虫节片,抽提DNA,PCR扩增rDNA-ITS1区段,克隆测序;结合GenBank中已知猪带绦虫rDNA-ITS1序列,构建系统发育树.结果: 贵州都匀、云南大理牛带绦虫标本、台湾牛带绦虫亚洲亚种标本的ITS1序列基本一致,同源性达98%～99%;贵州从江牛带绦虫标本ITS1序列与前三者有30个碱基差异,与台湾桃园、贵州都匀和云南大理同源性均为97%.系统发育树显示:贵州都匀和云南大理牛带绦虫标本与台湾牛带绦虫亚洲亚种标本的遗传距离最接近,距贵州从江牛带绦虫标本较远,与猪带绦虫则更远.结论: (1)贵州都匀和云南大理牛带绦虫标本属于牛带绦虫亚洲亚种,贵州从江牛带绦虫标本属于传统牛带绦虫.(2)rDNA-ITS1序列分析可以用于牛带绦虫亚洲亚种与传统带绦虫分类学研究.     

云南洱海环湖带绦虫rDNA-ITS2序列测定及分析

目的：对云南洱海环湖地区的带绦虫标本的rDNA-ITS2区段序列进行测定,确定亚洲带绦虫在洱海环湖地区的分布情况,进一步探讨亚洲带绦虫的分类地位。方法：取大理挖色、洱源、喜洲、周城、双廊、贵州都匀、贵州从江和传统牛带绦虫成虫标本,分别提取DNA,PCR扩增rDNA-ITS2片段后做序列测定及分析,并构建系统进化树。结果：根据ITS2测序结果构建系统进化树显示,树共分为两大枝,洱源、挖色和从江标本为第1枝,周城、喜洲、双廊和都匀为第2枝。结论：洱源与挖色存在传统牛带绦虫,周城、喜洲和双廊存在亚洲带绦虫。传统牛带绦虫和亚洲带绦虫在大理地区有分布区域上的重叠性。     

云南兰坪地区带绦虫mtCOXⅠ片段测定分析

目的对云南兰坪地区带绦虫种类进行鉴定。方法选取成虫样本,进行基因组抽提,扩增线粒体细胞色素C氧化酶Ⅰ（mtCOXⅠ）部分基因片段,序列测定后,用生物学软件DNAMAN进行同源性分析并构建系统发育树。结果LP1和LP4同源性达99．8％,LP1-4与BZ2—3的同源性均在95％以上,而与BZ1的同源性较远,低于88％。亚洲带绦虫与牛带绦虫较接近,远离猪带绦虫。结论云南兰坪地区带绦虫株与亚洲带绦虫标准株相似,同属于亚洲带绦虫。mtCOXⅠ片段可用于带绦虫分类鉴定。     

PCR直接测序法在脓肿分枝杆菌鉴定中的应用

目的探讨聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction,PCR）与DNA测序技术鉴定脓肿分枝杆菌的效果。方法利用细菌16S r RNA基因通用引物PCR扩增疑似分枝杆菌的16S r RNA基因的DNA片段并进行DNA测序分析。DNA测序获得序列经生物信息学比对分析获得相关分枝杆菌的信息;针对相关分枝杆菌分别设计非同源区域特异性引物对1 500 bp的克隆DNA片段扩增验证。结果细菌16S r RNA基因通用引物扩增获得约1 500 bp的DNA片段,但DNA测序仅获得其中部分DNA序列约296 bp;部分DNA序列经生物信息学比对分析后获得四种同源性高达98%的分枝杆菌信息,并且四种分枝杆菌的特异性引物对1 500 bp的克隆产物进行扩增后仅在脓肿分枝杆菌中获得特异性PCR产物。结论疑似结核患者体内的抗酸染色阳性菌为非结核分枝杆菌中的脓肿结核分枝杆菌,并且PCR直接测序法可快速鉴定细菌的种属。     

都匀亚洲带绦虫实验感染并同牛带绦虫的比较

目的：全面了解都匀亚洲带绦虫在中间宿主体内的发育情况，与其他带绦虫差异。方法：用两种带绦虫孕节直接灌喂荷尔斯坦乳牛和长白种乳猪，共分四组。A组：都匀亚洲带绦虫感染牛l头；B组：都匀亚洲带绦虫感染猪1头；C组：从江牛带绦虫感染牛1头；D组：从江牛带绦虫感染猪1头。四组实验动物感染后62、67d分别剖检，观察成虫形态特征、囊尾蚴在牛、猪体内分布及发育情况，并利用其14指标，与其他带绦虫进行聚类分析。结果：都匀亚洲带绦虫长度较短，节片数较少、较薄。     

都匀亚洲带绦虫与从江牛带绦虫实验感染家畜的对比研究

目的：全面了解都匀亚洲带绦虫与从江牛带绦虫在中间宿主（猪、牛）体内的发育情况及生化、病理学差异。方法：用两种带绦虫孕节直接灌喂荷尔斯坦乳牛和长白种乳猪，共分四组，A组：都匀亚洲带绦虫感染牛1头；B组：都匀亚洲带绦虫感染猪1头；C组：从江牛带绦虫感染牛1头；D组：从江牛带绦虫感染猪1头。感染后62、67d分别剖检，进行形态特征、病理变化观察及生化指标检测。结果：都匀亚洲带绦虫成虫长度较短，节片数较少，节片较薄，囊尾蚴寄生中间宿主的肝脏，头节有两圈退化的点状小钧结构；而从江牛带绦虫囊尾蚴在牛体内全身分布，头节无小钧结构。四组感染动物肝纤维化HA、LN、IV-C值和肝功能ALT、AST、TBA含量随感染时间而升高。C组感染动物肾功能BUN、Cr值和心肌、肌肉酶CK、CK-MB、LDH值比其他三组各项指标明显升高，有显著差异。A组、C组囊尾蚴结构基本正常，其周围肝组织病理变化轻；而B组、D组囊尾蚴坏死、液化及钙化，其周围肝组织大量纤维增生。D组呈带状纤维组织浸润，B组有典型的肉芽肿形成。结论：根据囊尾蚴分布、大小、发育时间及形态特征，进一步证实都匀牛带带绦虫为亚洲带绦虫，生化、病理结果说明，由于绦虫不同虫种和寄生宿主、囊尾蚴寄生部位或在同一宿主体内环境不同，其生化、病理变化存在不同差异。     

牛带绦虫亚洲亚种核糖体蛋白L10a 基因分析

目的:分析和预测牛带绦虫亚洲亚种成虫核糖体蛋白L10a 基因及其编码蛋白的结构和功能.方法:构建牛带绦虫亚洲亚种成虫cDNA 文库,进行EST测序,将EST序列与GenBank 中登陆的序列进行同源性比对及基因完整性判断;应用NCBI上的BLAST对所筛选基因的保守域进行搜索比对,利用PredictProtein 分析、预测其功能域及二级结构.结果:BLASTX分析该基因为全长基因,全长 698 bp,编码区为24～681,编码218个氨基酸,无跨膜区,具有较稳定的理化性质.结论:从牛带绦虫亚洲亚种成虫cDNA 文库中筛选出核糖体蛋白L10a 基因.     

湖南长沙及湘西泡状带绦虫分离株线粒体cox1基因的克隆及序列分析

目的研究湖南省长沙及湘西泡状带绦虫分离株线粒体细胞色素c氧化酶第I亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)的遗传变异情况,并用pcox1序列重构泡状带绦虫与其他带科绦虫的种群遗传关系。方法应用聚合酶链反应(PCR)扩增泡状带绦虫虫株的pcox1,应用ClustalX1.81程序对序列进行比对,然后用Phylip3.67程序MP法和Mage4.0程序NJ法绘制种系发育树,并用Puzzle5.2程序构建最大似然树;同时利用DNAstar5.0中的Megalign程序进行同源性分析,并与GenBankTM中已知泡状带绦虫相应基因序列进行比较分析。结果所获得的pcox1序列长度一致,均为343bp,与GenBankTM公布的带科绦虫序列进行比较分析表明,湖南长沙分离株1和湘西分离株5与已知泡状带绦虫相应基因的相似性分别为99.4%和99.7%,与其它带科绦虫的相似性均小于90.0%;湖南长沙1和湘西分离株5与已知泡状带绦虫相应基因遗传距离分别为0.006和0.003,与其他带科绦虫的遗传距离均大于0.100。种系发育树表明,2个分离株与已知泡状带绦虫位于同一分枝,Bootstrap值在97%以上。结论由于泡状带绦虫...     

结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因的克隆与序列分析

目的：克隆结核分枝杆菌减毒株H37Ra培养滤液蛋白10（CFP10）基因,并对其进行序列分析。方法：自结核菌H37Ra株抽提基因组DNA为模板,以已知结核菌H37Ra株CFPIO基因设计引物。通过聚合酶链反应（PCR）技术扩增出结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,将其克隆至pTG19-T载体后,经PCR和双酶切鉴定后进行DNA序列测定,并以BLAST在线软件进行序列比对分析。结果：PCR产物电泳显示扩增片段约为300bp,测序获得的片段开放编码框由303bp组成,与H37Rv株CFP10基因同源性为100％,推导出编码氨基酸序列同源性为100％。结论：成功克隆结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,其基因序列与H37Rv株CFPIO基因序列无差异。     

云南部分地区人群亚洲带绦虫感染现状调查与分析

目的 2000—2014年对云南禄丰干海资、牟定蟠猫、昆明远郊农村、兰坪河西等4地区人群进行亚洲带绦虫病流行病学调查,查明流行地区,掌握流行特征、人群感染现状,为制定防治措施提供科学依据。方法 根据亚洲带绦虫病例线索,设病例居住地为调查点。采用访问法进行病史调查及收集近期感染者带绦虫孕节片病原学检查等方法。结果 病史调查共912户5 081人,查出亚洲带绦虫感染者849人,总感染率为16.71%。病原学检查感染者孕节片标本585份,均为亚洲带绦虫。各地区人群感染率分别为：禄丰干海资22.64%（144/636）、牟定蟠猫8.78%（51/584）、昆明远郊农村2.53%（40/1 580）、兰坪河西26.92%（614/2 281）。不同地区人群感染性别差异无统计学意义,不同年龄、民族和职业感染率间差异有统计学意义。流行因素调查,四地居民普遍有生食猪肝的饮食习惯占调查人数的93.11%（4 731/5 081）,未查见有生食猪肉、牛肉的饮食习惯。卫生习惯不良者占调查人数的30.49%（1 549/5 081）;牲畜放养率占其饲养户的55.83%（407/729）;有“连茅圈”的居民户占41.54%（140/337）。结论 云南禄丰干海资、牟定蟠猫、昆明远郊农村、兰坪河西为亚洲带绦虫病流行区,本病的流行系多种因素综合的结果,生食猪肝的饮食习惯是人体感染的重要途径。     

牛带绦虫亚洲亚种感染乳猪肝脏的病理学和组织化学观察

目的: 观察牛带绦虫亚洲亚种感染乳猪后肝脏的病理学和组织化学改变.方法: 以牛带绦虫亚洲亚种虫卵感染乳猪,封闭饲养;采用HE染色及组织化学染色观察不同时期肝组织的病理学变化并测定脂肪、糖原、蛋白质的含量,定量图像分析和SPSS统计学处理.结果: 感染组感染4 d时,肝脏开始有炎性细胞浸润;10～20 d时,炎症反应加剧,Kupffer细胞增生,肝细胞水肿、部分气球样变,肝细胞有点片状坏死,中央静脉、肝血窦扩张和淤血;40～60 d时,肝脏肉芽肿形成,肝脏呈早期肝硬化改变;70～80 d时,部分肝脏呈肝硬化改变,胆管增生;感染不同时期均有不同程度脂肪含量的增多,糖原、蛋白质含量的减少,与正常对照组比较具有统计学意义(P＜0.01);对照组乳猪无感染.结论: 乳猪是牛带绦虫亚洲亚种的适宜中间宿主,牛带绦虫亚洲亚种感染可引起肝组织严重的病理学损害和组织化学改变.     

牛带绦虫成虫谷胱甘肽S-转移酶基因的生物信息学分析

目的:分析牛带绦虫成虫谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因结构并预测其编码蛋白的结构和功能。方法:利用生物信息学网站如NCBI和ExPASY系统中的生物信息学分析工具,并结合其它分析软件,分析该基因的结构并预测其编码蛋白质的结构和功能。结果:该基因全长908 bp,编码区为135～771 bp,编码212个氨基酸,无各种亚细胞定位序列;与猪带绦虫GST的一致性为93%,相似性为96%;预测3个主要的抗原表位33～53 aa,62～68 aa,179～184 aa位于空间结构上相距较远的分子表面。结论:从牛带绦虫成虫cDNA文库中筛选出GST基因,预测为胞浆型蛋白,可能具有较好的免疫学诊断抗原应用前景。     

贵州都匀牛带绦虫亚洲亚种的流行病学调查

目的：了解贵州省都匀市河阳乡牛带绦虫病的流行因素及病原虫种，为防治措施的制定提供依据。方法：对该市河阳乡米秀村等7个村寨进行牛带绦虫病流行病学调查，对106例现症病人(男95例，女11例)的感染原因、临床症状进行分析并作驱虫治疗；对驱出的成虫作形态学鉴定和测量。结果：当地牛带绦虫感染主要是因群众喜吃生的或不熟的猪肝引起，患者的临床表现以排节片、肛门搔痒、腹痛、腹泻等为主；106例有临床症状的成人中，有37例驱出成虫(男35例，女2例)；成虫外形与牛带绦虫极其相似，头节上无顶突及小钩。虫体较短，大小在0．61～4．19m。节片较薄而且数量少(链体节片数：232～828)，孕节子宫分支数每侧为17～28支。结论：贵州省都匀有牛带绦虫病局部流行，患者的感染方式以及感染虫体的形态与牛带绦虫亚洲亚种相似。     

三峡库区上、下游血吸虫病流行区钉螺线粒体cox1基因遗传变异研究

目的 研究三峡库区上、下游血吸虫病流行区钉螺线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚单位1(cox1)基因的遗传变异.方法 采集三峡库区上游四川、云南及下游安徽、湖北4省共7个地、市的钉螺样本,提取基因组DNA,PCR特异性扩增线粒体cox1基因并测序,用ClustalX(1.81)软件进行多序列比对,MEGA(4.0)软件Kimura2-parameter法计算遗传距离,邻接法(NJ)和最大简约法(MP)构建系统发生树.结果 上游与下游不同地域株钉螺问cox1基因差异约为16%,下游地区的肋壳与光壳钉螺cox1基因差异约为3.7%,上游不同地域株钉螺碱基差异约为5.4%.遗传距离显示,上游四川与云南地域株的遗传距离为0.022～0.050,下游安徽与湖北地域株的遗传距离为0.014～0.027,而上游与下游各地区螺群间的遗传距离在0.127～0.138之间,明显大于上游或下游各地区螺群内的遗传距离.进化树结果表明,下游湖北的荆州、石首和安徽的芜湖、宁国钉螺形成一支系,上游四川的绵竹、新都钉螺同属一支系,但两种方法构建的进化树在云南大理钉螺的归属上存在差异,MP法提示大理钉螺从上游的分支中独立出来,单独形成一类.结论 上游与下游不同地域株钉螺cox1基因遗传差异较显著,下游肋壳和光壳钉螺种群内遗传变异较小,而上游光壳钉螺种群内遗传变异较大.