检测X线照射肝癌细胞株HepG2可溶性肿瘤坏死因子受体-p75的临床意义

目的 研究X线照射在体外培养人肝癌细胞株HepG2后sTNFR-p75变化情况.方法 ELISA法检测培养上清中sTNFR-p75水平,流式细胞仪分析细胞凋亡率,光镜及透射电镜观察细胞形态变化.结果 X线照射后肝癌HepG2细胞培养上清sTNFR-p75水平显著低于照射前sTNFR-p75水平(P<0.01);光镜及透射电镜发现细胞体积缩小,变圆,胞浆浓缩,核固缩深染凋亡小体形成;流式细胞仪分析细胞凋亡率显著增高(P<0.05).结论 X线可通过抑制sTNFR-p75脱落到上清中,诱导细胞凋亡,增强照射肿瘤的杀伤作用.     

乙肝病毒X基因对人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响

目的 探讨乙肝病毒X基因(hepatitis B virus,HBX)对人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响.方法 采用脂质体转染法将HBX真核表达载体pcDNA3.1-X转人人肝癌细胞HepG2中,建立表达HBX的HepG2/HBX细胞模型;以转染空载体pcDNA3.1的HepG2/pcDNA3.1细胞为对照,于转染后24、48、72、96 h收集细胞标本,行流式细胞术分析肝细胞凋亡率变化情况,RT-PCR、Western blot分别检测肝癌细胞内HBX和凋亡相关基因Fas、FasL表达以及JNK、c-Jun蛋白磷酸化水平情况.结果 转染24 h后HepG2/HBX细胞中即检测出HBX表达,且其表达量随时间延长而逐渐增高(P＜0.05);对照组细胞中各时间点均无HBX的表达.转染后各时间点,HepG2/HBX细胞与对照组细胞相比,细胞凋亡率均升高(P＜0.05),Fas、FasL表达量和JNK、c-Jan蛋白磷酸化水平亦均增高(P＜0.05);且HBX mRNA表达量与细胞凋亡率、Fas和FasL表达量以及JNK、c-Jun的磷酸化水平均呈正相关(P＜0.05).结论 HBx可通过上调JNK、c-Jun蛋白磷酸化水平而促进FasL蛋白的表达,从而诱导HepG2细胞凋亡.     

奥沙利铂处理人肝癌细胞株HepG2、QGY后凋亡相关基因蛋白的表达

目的观察抗肿瘤药物奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2、QGY凋亡相关基因蛋白表达的影响,探讨奥沙利铂诱导HepG2、QGY细胞发生凋亡的机制.方法采用人肝癌细胞株HepG2、QGY作为研究对象,免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关基因蛋白的表达.结果奥沙利铂作用72h后,免疫细胞化学表明Bax表达增强,突变型P53蛋白(MTP53)、Bcl-2、Myc表达减弱,Fas表达无差异.结论奥沙利铂诱导肝癌细胞凋亡的作用与上调Bax蛋白表达及下调MTP53、Bcl-2、Myc蛋白表达有关,该药可能不是通过Fas途径诱导细胞凋亡.     

两株人肝癌细胞放射敏感性的体外研究

目的用体外实验方法探讨人肝癌细胞株HepG2和BEL-7402的放射敏感性.方法人肝癌细胞HepG2和BEL-7402体外培养,应用集落形成法测定6MVX线不同剂量照射后细胞的存活率,计算细胞放射敏感性参数;应用HE染色和流式细胞术测定细胞受5Gy照射后细胞凋亡率.结果HepG2的D0为1.5Gy,Dq值为0.8Gy,n为1.8,SF2为0.45±0.05;BEL-7402的D0为1.6Gy,Dq为1.3Gy,n为2.4,SF2为0.63±0.05.两株细胞受照后出现凋亡现象,照射后24h内随时间延长细胞凋亡率逐步升高.结论HepG2和BEL-7402具有较高的放射敏感性,可能与其受照后发生凋亡有关.     

一氧化氮诱导肝癌细胞凋亡过程bcl-2和bax mRNA表达水平的变化

目的 探讨在一氧化氮(NO)诱导肝癌细胞凋亡过程bcl-2和bax mRNA表达水平的动态变化。方法 用NO供体硝普钠(SNP)诱导SMMC-7721和HepG2肝癌细胞株凋亡，RT-PCR的方法检测bcl-2、ba xmRNA表达水平，并采用凝胶分析系统进行半定量分析。结果 1．0mmol/L可降低SMMC-7721和HepG2细胞bcL2、bax mRNA的表达水平，提高bax/bc1-2 mRNA的比值并呈时间依赖性。HepG2细胞bcl-2和bax mRNA降低的幅度较SMMC-7721细胞小(P＜0．05)，开始变化的时间也较SMMC-7721细胞迟。结论 NO诱导肝癌细胞株的凋亡，可能与其bcl-2、bax mRNA表达水平变化导致bax/bc1-2 mRNA比值上升有关。     

干扰素对人肝癌细胞株HepG2.2.15凋亡的影响

目的：探讨肝癌细胞株HepG2.2.15通过低表达Fas逃避免疫监视，以及干扰素α(IFN-α)通过上调Fas 表达对细胞凋亡的影响。方法：用流式细胞术检测肝癌细胞株HepG2.2.15的 Fas表达及IFN-α对其Fas表达的影响；用激活性Fas单克隆抗体CH11诱导细胞凋亡的方法，研究肝癌细胞对Fas介导凋亡的抵抗以及IFN α对肝癌细胞凋亡的影响。结果：① HepG2.2.15细胞低表达Fas，经浓度分别为2000、1000、　500U/ml的IFN-α作用后，Fas表达均显著增加(P均<0.001)，且Fas表达率随IFN-α浓度的增加而增加；②CH11不能诱导HepG2.2.15细胞凋亡，IFN-α上调细胞Fas表达后，由CH11诱导的细胞凋亡增加(P均<0.01)，且凋亡率随IFN-α浓度的增加而增加。结论：肝癌细胞HepG2.2.15能抵抗Fas介导的凋亡，IFN-α可通过上调细胞Fas表达，促进CH11诱导的肝癌细胞凋亡。     

光动力作用对人肝癌细胞HepG2的影响及其机制探讨

目的 研究血卟啉衍生物光动力作用诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及其机制.方法 应用流式细胞仪分析光动力作用后细胞凋亡及免疫组化染色检测凋亡相关蛋白bcl-2蛋白、bax蛋白表达水平.结果 血卟啉衍生物光动力组人肝癌细胞HepG2凋亡率达(25.28±1.52)%,与对照组相比,差异有极显著意义(P＜0.01);并且光动力作用后凋亡相关蛋白bcl-2表达显著高于对照组(P＜0.05).结论 血卟啉衍生物光动力作用具有诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的生物学效应,而凋亡调控蛋白bcl-2表达水平的降低可能是血卟啉衍生物光动力作用诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的一个重要机制.     

放疗对人肝癌细胞株HepG_2凋亡的诱导作用

目的:探讨放疗对人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡的影响,为放疗的临床应用提供依据。方法:不同剂量的X射线分别照射体外培养的HepG2细胞,照射后48h收集细胞,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法和透射电镜分别检测各组细胞的凋亡情况。结果:TUNEL染色显示,2Gy、4Gy、6Gy、8Gy剂量组AI高于假照射组,细胞经4GyX射线照射后具有细胞凋亡的形态学特征。结论:X射线可诱导肝癌细胞HepG2细胞凋亡。     

青藤碱诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨青藤碱诱导HepG2细胞凋亡的作用及其分子机制.方法:应用形态学方法、AnnexinV荧光染色和流式细胞仪(FCM)检测HepG2细胞凋亡的发生,定量检测Apo2.7及凋亡相关基因bcl-2和Fas的表达.结果:青藤碱对HepG2细胞的生长有明显的抑制作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡.凋亡细胞表现为细胞固缩,核染色质碎裂;细胞停在G1和G2期.AnnexinV标记的方法检测凋亡时发现,坏死与凋亡共存.与未用药细胞相比,用药后肝癌细胞的Apo2.7表达升高,凋亡相关基因Fas、bcl-2转录水平比用药前增强.结论:凋亡为青藤碱抑癌的机制之一,青藤碱诱导HepG2细胞凋亡可能与bcl-2和Fas基因表达,改善线粒体功能有关.     

放疗对人肝癌HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:探讨放疗对人肝癌HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:采用6MV-X射线照射细胞,提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳,观察细胞发生凋亡的情况,并采用免疫组织化学染色观察人肝癌细胞株中Bax和Bcl-2蛋白的表达。同时观察细胞周期改变情况。结果:照射后48h,2Gy、4Gy和6Gy出现明显DNA降解("梯形结构"),但对照组及8Gy和10Gy无"梯形结构"出现。Bax和Bcl-2蛋白的表达在时间和剂量之间存在交互作用(F=1.733,P=0.042;F=1.700,P=0.048)。4Gy照射剂量作用细胞48h后,HepG2细胞中Bax表达显著上调,而Bcl-2表达明显降低。4GyX线照射后培养6h,即可观察到G2/M期、S期阻滞,G2/M期阻滞峰值为正常的56倍,在6~48h阻滞"崩溃",细胞被释放,再度进入细胞周期或死亡。结论:6MV-X射线照射HepG2细胞,可诱使其产生凋亡,其机制可能通过促进Bax蛋白表达和抑制Bcl-2蛋白的表达来诱导肝癌细胞凋亡。4Gy照射引起的G2期阻滞释放可能与凋亡水平上调有关。     

雄黄对白血病细胞bcl-2和Fas蛋白的表达影响的研究

目的:检测雄黄诱导白血病细胞凋亡的能力,并探讨其分子机制。方法:应用形态学观察检测细胞凋亡,应用检测流式细胞仪白血病细胞bcl-2和Fas蛋白的表达。结果:雄黄可诱导白血病细胞发生典型的凋亡,白血病细胞有bcl-2强表达,同时雄黄可使白血病细胞bcl-2蛋白表达呈时间依赖性的下降。白血病细胞有较弱的Fas蛋白表达,随着雄黄与白血病细胞作用时间的延长,未见Fas蛋白表达有明显改变。结论:雄黄通过影响白血病细胞bcl-2蛋白的表达从而导致白血病细胞发生凋亡是其治疗白血病的重要分子机制。     

RMP在γ射线诱导的肝癌细胞凋亡中的表达

目的研究RPB5调节蛋白RMP在γ射线诱导的SMMC-7721肝癌细胞凋亡过程中的表达,探讨RMP在细胞凋亡及维系细胞DNA稳定性中的作用。方法不同剂量60Coγ射线照射SMMC-7721肝癌细胞和HL-7702正常肝细胞,观察细胞形态变化;PI染色观察细胞凋亡;流式细胞技术检测肝癌细胞周期变化及细胞凋亡;半定量RT-PCR法检测RMP基因在肝癌细胞及正常肝细胞中的表达以及凋亡相关基因bax、bcl-2在肝癌细胞中的表达。结果随着照射剂量增加,肝癌细胞形态发生明显改变;PI染色观察细胞凋亡增多;流式细胞仪检测结果显示随着照射剂量增加,细胞凋亡明显增多,差异有统计学意义（P〈0.05）,细胞周期G1期增高,而S期降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;RMP基因相对表达量增加,bax/bcl-2增加,与未照射组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论γ射线照射可诱导人肝癌细胞凋亡,RMP基因可能在提高细胞DNA稳定性中起重要作用。     

Effects of the Extract of Ammopiptanthus mongolicus cheng f. （JA1） on Induction of Apoptosis of HepG2 in vitro and Its Molecular Mechanisms

Objective To study the effects and the mechanisms of extract from a leguminous plant （Ammopiptanthus mongolicus cheng f.） （JAl ） in northwest China on inducing apoptosis and inhibiting proliferation of HepG2 hepatocarcinoma cell in vitro. Methods The HepG2 cell line was used as target cells. The effect of 3A 1 on HepG2 cell growth was detected by microculture tetrazolium assay （MTr）, flow cytometry assay, DNA agarose gel electrophoresis and transmission electronic microscopy. The expressive effect of the wt-p53 in HepG2 cells was analyzed with p53 protein test-reagent. Results JAl not only had significant anti-proliferative effects depending upon time and dosage, but also induced apoptosis of HepG2 cells. Apoptotic typical morphological changes were observed in JAl-treated HepG2 cells under transmission electronic microscope, ＂Sub-G 1＂ phase peak occurred in flow cytometry and DNA ＂ladder＂ was found in DNA agarose gel electrophoresis. The expression of the wt-p53 increased in vitro, and 3Al-treated HepG2 and the positive cell percentage of the wt-p53 protein also increased. Conclusions JAl could obviously induce apoptosis and inhibit proliferation of HepG2 cells in vitro, and these effects are closely related with the increase of wt-p53 expression. JAl can be used as a good source of medicinal plant for the treatment of hepatocarcinoma.     

三氧化二砷抑制人乳腺癌细胞生长及其作用机制的初步研究

目的观察三氧化二砷(As2O3)对人乳腺癌MDA MB231细胞的生物学效应及其作用机制。方法采用MTT法观察细胞毒性;膜联蛋白V(AnnexinV)异硫氰酸荧光素(FITC)+碘化丙啶(PI)双参数检测细胞凋亡;流式细胞术测定细胞周期、增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白Fas和bcl2阳性细胞百分率及细胞内钙离子(IECa2+)含量变化。结果As2O3可显著抑制MDA MB231细胞生长,且剂量效应关系差异有统计学意义(r=0.99,P<0.01),其IC50为6.65μmol/L;MDA MB231细胞经As2O3处理后可观察到凋亡;As2O3能上调Fas蛋白表达和IECa2+含量(P<0.01),下调PCNA蛋白表达(P<0.01),并使细胞周期阻滞在S+G2/M期,但对bcl2表达无影响(P>0.05)。结论As2O3在体外可显著抑制MDA MB231细胞生长并引起凋亡,其机制可能与上调Fas表达和IECa2+含量、降低PCNA表达及阻滞细胞周期有关。     

EGFP-Apoptin融合蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的 观察EGFP-Apoptin融合蛋白在肿瘤细胞中的分布和亚细胞定位，探讨Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法 构建EGFP-Apoptin融合蛋白真核表达载体，用脂质体转染技术将其导入人肝癌细胞株HepG2中，在荧光显微镜下观察Apoptin在肿瘤细胞中的分布、亚细胞定位；用TUNEL法检测其在体外诱导肿瘤细胞凋亡的效应。结果 转染细胞中EGFP-Apoptin在肿瘤细胞中得以高表达，转染24h后逐渐从细胞质迁移至细胞核，最后定位于细胞核内。转染4～5d后逐渐诱导肿瘤细胞凋亡。结论 EGFP-Apoptin融合蛋白在肿瘤细胞中具有核定位效应，并诱导肿瘤细胞凋亡；EGFP-Apoptin可以作为研究Apoptin在肿瘤细胞中分布和亚细胞定位的有效工具，用以探讨Apoptin在体外诱导肿瘤细胞凋亡的机制。     

氧化砷诱导人肝癌细胞凋亡相关基因的实验研究

目的：探讨氧化砷（As2O3)对人肝癌细胞诱导凋亡作用的分子机制。方法：以As2O3作用于体外培养的人肝癌细胞株HepG2，通过免疫组化技术对bcl-2,bax,p53,Fas及c-myc五种基因编码蛋白的表达进行检测。结果：经As2O3作用的人肝癌细胞bcl-2基因编码蛋白表达减少，bax,Fas基因编码蛋白表达增加，p53,c-myc基因编码蛋白表达改变不明显，结论：As2O3诱导肝癌细胞凋亡分子机制可能是下调bcl-2基因编码蛋白表达，增强box,Fax基因编码蛋白表达。     

硒对镉转化人支气管上皮细胞系16HBE凋亡和癌基因表达的影响

目的研究在体外染毒条件下硒对镉转化人支气管上皮细胞系16HBE凋亡和癌基因表达的影响。方法用0.625、1.25、2.5和5.0μmol/L亚硒酸钠染毒镉转化16HBE细胞24h,用流式细胞术检测凋亡,用RT-PCR检测p53,bcl-2和bax表达。结果 0.625、1.25、2.5和5.0μmol/L亚硒酸钠染毒镉转化16HBE细胞后,随硒剂量升高细胞凋亡率增高,相关系数r=0.987 9(P<0.01),并且在1.25、2.5和5.0μmol/L亚硒酸钠剂量组的凋亡率与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。亚硒酸钠可以抑制镉转化16HBE细胞p53和bcl-2的表达(P<0.05或P<0.01),bax表达虽有所增强但P>0.05。进行相关性分析,细胞凋亡与p53和bcl-2表达呈负相关,相关系数r分别为-0.923 6(P<0.01)和-0.862 1(P<0.05),而细胞凋亡与bax表达呈正相关,相关系数r=0.781 8(P<0.05)。p53表达和bcl-2表达呈正相关,相关系数r=0.894 1(P<0.05)。p53、bcl-2表达和bax表达之间呈显著负相关,相关系数分别为-0.822 2(P<0.05)和-0.961 3(P<0.01)。结论亚硒酸钠处理镉转化16HBE细胞,通过使p53和bcl-2表达下调、bax表达上调,诱导细胞凋亡从而起到抑制细胞恶性转化的作用。