剥苔基因分子机理的研究

目的:从舌上皮细胞凋亡及凋亡相关基因bax、TGF-β3表达的角度研究剥苔(舌黏膜剥脱)的基因分子的病理生理机制.方法:运用TUNEL技术、原位杂交、免疫组化和图像分析技术,进行定性和定量分析.结果:与正常薄苔比较,剥苔细胞凋亡增加,同时凋亡相关基因bax表达水平升高,而TGF-β3表达水平降低.结论:促凋基因bax表达上调可能是引起舌苔上皮细胞凋亡增加从而导致舌黏膜剥脱的重要病理机制.     

一种血管内皮生长因子变异体的结构与功能的初步探讨

目的针对发现的一种血管内皮生长因子变异基因(h′VEGF),利用计算机软件模拟预测其空间结构,并对其功能进行初步探讨。方法将pCD-hVEGF165及pCD-h′VEGF165重组真核表达载体导入CHO细胞,收集培养上清,进行ELISA分析、血管通透性实验(Miles实验)、内皮细胞增殖实验(MTT法)。结果h′VEGF165能使豚鼠的血管通透性增高,并促进ECV-304细胞增殖,但ELISA实验结果显示h′VEGF165与抗hVEGF165单抗未发生抗原抗体反应。结论h′VEGF165与hVEGF165在空间结构上可能存在差异,但现有的实验结果未见两者在功能上的明显差异。     

人心肌肌钙蛋白I第2和第4个密码子同义突变对其在大肠埃希菌中表达的影响

目的 对人心肌肌钙蛋白I（cTnI）基因实行定点突变并进行原核表达，观察此突变对cTnI表达量的影响。方法 利用RT-PCR方法从人心肌细胞的总RNA中克隆出编码人心肌肌钙蛋白I的cDNA片段，设计引物将其第2和第4个密码子突变后插入原核表达载体形成重组体，并导人宿主菌BL21（DE3）中，经IPTG诱导表达，Ni-NTA树脂纯化后行Western blot鉴定，观察突变对cTnI表达的影响。结果 突变后的cTnI基因与对照组相比在大肠埃希菌中得到高效表达，经纯化可获得电泳单点纯的cTnI蛋白。结论 成功克隆了cTnI基因，所设计的同义突变可促进cTnI在大肠埃希菌中的高效表达。     

Lipofectin介导转移的外源性ADA基因在反复上感儿T淋巴细胞的表达

本文对４１例健康儿童和１７例反复上呼吸道感染患儿外周血淋巴细胞腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）活性进行了检测。在此基础上筛选出２例反复上感伴ＡＤＡ活性低下患儿。在体外对这２例患儿的外周血Ｔ淋巴细胞进行培养后，以Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（脂质体）介导的方法对其进行了外源性ＡＤＡ基因的基因转移。结果显示：２例患儿体外培养淋巴细胞ＡＤＡ活性较转基因前升高。同步进行的标志基因ｐＢＬａｃＺ的基因转移的检测结果也直观地证实了Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导的基因转移是成功的。该研究为ＡＤＡ－ＳＣＩＤ淋巴细胞基因治疗的研究提供了初步的体外实验资料。     

ADA活性紫外吸收测定法的改良及复感儿淋巴细胞该酶活性的检测

检测了42例健康儿童和17例反复上呼吸道感染患儿（复感儿）的血淋巴细胞腺苷脱氨酶（ADA）活性，结果表明：复感儿的血淋巴细胞中ADA活性较健康儿童低下，且大多同样伴有不同程度的免疫功能低下；从复感儿组中筛选了两侧ADA活性和免疫功能明显低下的患儿，拟采用这两例患儿的血淋巴细胞进行ADA－SCID基因治疗的实验研究。     

LR8与疾病

Ｌ Ｒ8是低密度脂蛋白受体 (Ｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｒｅ ｃｅｐｔｏｒ,ＬＤＬＲ)家族第三个被发现的成员[1] 。 1992年和 1994年Ｙａｎａｍｏｔｏ和他的同事们分别克隆了兔和人ＬＲ8的互补ＤＮＡ(ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｌＤＮＡ ,ｃＤＮＡ)。最初 ,转染该ｃＤＮＡ的中国仓鼠卵巢细胞能结合极低密度脂蛋白(Ｖｅｒｙｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ,ＶＬＤＬ)和具有 β迁移率的极低密度脂蛋白 (β ｍｉｇｒａｔｉｎｇｖｅｒｙｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ,β ＶＬＤＬ)而不能结合低密度脂…     

Cloning and identification of a novel variant of human vascular endothelial growth factor

Vascular endothelialgrowth factor ( VEGF) is amultifunctional cytokine thatexerts in vivo a key rolein physiologicalneoangiogenesisduring embryonicde-velopmentor the female cycle and pathologicalneoan-giogenesis of many diseases including hypervascular-ized tumors,rheumatoid arthritis,and retinopathiesdiseases[1— 3] by stimulating endothelial cell prolifera-tion and vessel hyperpermeability.VEGF exists asone of five different isoforms,VEGF1 2 1 ,VEGF1 65 ,VEGF1 83,VEGF1 89and VEGF2 …     

鸡贫血病毒VP 3基因的克隆及其体外凋亡诱导效应的研究

用PCR方法扩增了鸡贫血病毒标准株的vp3基因,并将其克隆于真核表达载体pcDNA3上,构建了重组体pcDNA-vp3.经酶切鉴定及测序分析表明,该片段和预期相符.在体外利用LipofectAMINETM介导的基因转染,将pc-DNA-vp3、pcDNA3分别转入肝癌细胞系HepG2和二倍体肝细胞系L-02中,转染后的RT-PCR结果证实vp3基因在细胞中得到了表达.同时利用筛选稳定表达细胞株的技术和原位细胞凋亡检测法,证明了鸡贫血病毒是以凋亡的方式诱导细胞死亡,并且只诱导癌细胞的凋亡,而不诱导正常或二倍体细胞死亡.表明鸡贫血病毒vp3基因很可能成为一种极具潜力的抗肿瘤生物制剂.     

电针对大鼠颈肌慢性损伤模型肌电活动及细胞凋亡的影响

目的：观察电针对大鼠颈肌慢性损伤模型肌电活动、颈后肌细胞凋亡的影响。方法：34只Wistar大鼠选取7只为空白对照组,其余大鼠复制颈肌慢性损伤模型备用。（经超声诊断仪检测,6只大鼠模型复制不成功,剔除。）将模型大鼠随机分为模型组、电针组、美洛昔康组,每组7只。电针组针刺双侧“风池穴”,1次/d,25 min/次,连续治疗10 d为1个疗程,疗程之间间隔2 d,共2个疗程。使用超声诊断仪检测大鼠颈后肌组织的形态学变化,电生理记录大鼠颈后肌肌电变化,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL法）检测细胞凋亡率,免疫组织化学法标记B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、Caspase-9蛋白的表达情况。结果：超声检测结果显示：与模型组比较,电针后肌纤维排列较整齐,肌厚度增粗。肌电生理检测结果显示：模型组肌电波幅及频率明显发生了衰减,电针后肌电波幅和频率明显高于模型组。TUNEL结果显示：与模型组比较,电针组凋亡细胞数目明显减少,差异有统计学意义（均P<0.05）。免疫组织化学结果显示：与空白对照组比较,模型组Bcl-2的阳性细胞数少于空白组,Bax、Caspase-3、Caspase-9的阳性细胞数增多（P<0.05）;与模型组比较,电针组中的Bcl-2的阳性细胞数增多,Bax、Caspase-3、Caspase-9的阳性细胞数减少（P<0.05）。结论：电针干预可修复颈肌慢性损伤,其机制可能与提高慢性颈肌损伤大鼠颈肌肌电振幅及抑制细胞凋亡相关,其途径可能通过抑制线粒体通路的活性而实现。     

Experimental study on the antitumor effect of mouse B7-1 gene

ＴｗｏｓｉｇｎａｌｔｈｅｏｒｙｆｏｒＴｃｅｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎｐｒｏｖｉｄｅｄａｎｅｗａｐｐｒｏａｃｈｆｏｒｔｕｍｏｒｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙ［１－２］．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｍｏｌｅｃｕｌｅｇｅｎｅｉｎｔｒａｎｓｆｅｃｔ...