DLX4基因酵母双杂交系统的构建及自激活检测

目的 构建DLX4酵母双杂交系统并鉴定其自激活作用。方法 构建人胎盘酵母双杂交cDNA文库,并行PCR鉴定;构建3条DLX4诱饵质粒,包括pDEST32-DLX4(4-1C)、pDEST32-DLX4(4-1N)和pDEST32-DLX4(4-2);将DLX4诱饵质粒转入酵母MaV203菌株,并检测其在酵母细胞中有无自激活作用。结果 PCR证实成功构建了人胎盘酵母双杂交文库;3条DLX4诱饵质粒中,pDEST32-DLX4(4-2)和pDEST32-DLX4(4-1C)没有自激活作用,可用于文库筛选。结论 成功构建了酵母双杂交文库和DLX4诱饵质粒,可用于筛选与DLX4相互作用的蛋白。     

DLX4基因酵母双杂交系统的构建及自激活检测

目的构建DLX4酵母双杂交系统并鉴定其自激活作用。方法构建人胎盘酵母双杂交cDNA文库,并行PCR鉴定;构建3条DLX4诱饵质粒,包括pDEST32-DLX4（4-1C）、pDEST32-DLX4（4-1N）和pDEST32-DLX4（4-2）;将DLX4诱饵质粒转入酵母M aV203菌株,并检测其在酵母细胞中有无自激活作用。结果 PCR证实成功构建了人胎盘酵母双杂交文库;3条DLX4诱饵质粒中,pDEST32-DLX4（4-2）和pDEST32-DLX4（4-1C）没有自激活作用,可用于文库筛选。结论成功构建了酵母双杂交文库和DLX4诱饵质粒,可用于筛选与DLX4相互作用的蛋白。 更多还原     

产几丁质酶真菌菌株的筛选及产酶抑菌活性的检测

目的：分离真菌菌株,筛选出几丁质酶高产菌株,检测其粗酶液对临床常见假丝酵母的抑菌作用,为抗真菌药物的开发提供研究基础。方法：利用刚果红几丁质平板法和3,5-二硝基水杨酸（DNS）法筛选出几丁质酶高产菌株,并用纸片法检测粗酶液的抑菌作用。结果：从环境中分离的47株真菌菌株中得到产几丁质酶菌株6株,其中高产菌2株（烟曲霉JLC 50134和木霉JLC 31235）;JLC 50134粗酶液对白假丝酵母、热带假丝酵母的抑制作用强于JLC 31235,抑菌圈直径分别为4~5 cm和约2 cm;JLC 31235粗酶液对克柔假丝酵母、光滑假丝酵母的抑制作用强于JLC 50134,抑菌圈直径分别为约2 cm和1 cm。结论： 烟曲霉JLC 50134和木霉JLC 31235是几丁质酶高产菌株,两种粗酶液对临床常见假丝酵母有抑制作用。     

物姜中的致突和抗致突物

<正> 植物的成分作为化学致突变物质许多实验室已积极地进行了检测和评价,表明许多成分是强烈地致突变的,而且其中某些对高等动物是致癌的(Kada,1977)。另一方面,Kada 等(1978)和 Morifa 等(1978)报告了姜和洋白菜的汁中含有对抗蛋白质和氨基酸热解时色氨酸热解产物致突性的抗致突变因子。作者发现姜的汁中含有促进和抑制细菌突变作用的两种因子。作者以2(2-呋喃基)-3-(5-硝基-2-呋喃基)丙烯酰胺(简称 AF2)和 N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(简称 NTG)为阳性致突变物。以有遗传标志 uvrB(DNA 紫外线损伤修复有缺陷的)和 argFam(需要精氨酸的琥珀突变)的大肠埃希菌 B/r 的 Hs30菌株作为致突作用的指示菌株。并用 H/r30菌株(uvr~+arg Fam)作为 Hs30的参考。将 Hs30菌株接种于按 Komdo 和 Ichikawa-Ryo(1973)的方法制备的选择培养基 E 上,37℃培养48小时,测     

Huntington舞蹈症的一个新遗传标记

在Huntington舞蹈症患者中发现了一种新的遗传标记,这对Huntington舞蹈症的早期诊断及致病基因的研究具有重要意义。该遗传标记被称为D_4S_(95),它位于4号染色体短臂末端一个DNA片段。加利福尼亚大学的J.Wasmuth于9个月前首次分离出这种D_4S_(95)遗传标记;此后,哥伦比亚大学的研究者确定了D_4S_(95)在染色体上的位置     

应用酵母测试系统对83-1除草剂的遗传毒性检测

本文报道以多终点的酵母D61·M和D7测试系统对83-1除草剂(DCNPA)的遗传毒性检测。检测结果:经DCNPA处理的D61·M菌对放线菌酮的抗性频率明显高于阴性对照(P<0.01),在该菌有丝分裂交换的检测终点为阳性反应,其余检测终点为阴性反应。以上结果表明,DCNPA是一种对真核生物酵母DNA的损伤剂,提示应重视它在肿瘤发生中的作用。     

微生物和丝裂霉素C对大鼠骨髓嗜多染红细胞的影响

微核与染色体损伤有关,凡能使染色体发生断裂或使染色体与纺锤体连结遭到破坏的遗传损伤,都可用微核试验检测。该方法自Evans等(1959)之后,被广泛用于检测各种理化因子对染色体损伤的影响。由于实验材料的限制,至今未见国外有关生物因子——微生物对实验动物微核率,即对实验动物遗传物质稳定性影响的报道,本实验不仅对无菌(GF)     

用于“野生小家鼠来源一号染色体替换系”构建的PCR-LDR分型系统

目的 建立用于“野生小家鼠来源一号染色体替换系”构建的PCR-LDR (polymerase chain reaction and ligase detection reaction,PCR-LDR)分型系统.方法 采用易于判断的二元性遗传标记单核苷酸多态性位点( single nuclear polymorphism point,SNP),应用连接酶检测技术(ligase detection reaction,LDR),建立PCR-LDR分型方案.结果 三组多重PCR-LDR分型方案适用于覆盖整条一号染色体的29个SNP遗传位标的分型,位点间平均遗传距离在6.25厘摩(centimorgan,cM).结论 实现了后代小鼠快速、高通量的基因分型,可准确检测1号染色体各区段的重组事件.     

贵州省少数民族百越系统的分子人类学分析

目的: 分析贵州省少数民族百越系统父系遗传结构,探讨其起源及迁徒.方法: 采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测贵州省百越系统7个少数民族10个单核苷酸位点(SNPs)构成的Y染色体单体型,并以省内苗族为对照分析其父系遗传结构.结果: 侗族、水族集中于Y染色体-SNP中H11单体型,H11的频率分别为92.5%及58.7%,布依族、仡佬族、仫佬族、毛南族、壮族5个民族集中于Y染色体-SNP中H8单体型,苗族样本集中于Y染色体-SNP中的H8、H11与H12单体型.结论: 贵州省从江侗族、三都水族父系遗传构成相对简单.通过主成分分析,证明贵州省从江侗族、三都水族与其他的壮侗语族人群相聚,而布依族、仡佬族、仫佬族、毛南族、壮族5个民族之间有密切联系,且与国内其他地域百越系统有较大的遗传差异,是一个相对独立的群体.     

家族性肌萎缩硬化症酵母研究模型的探索

目的 构建铜-锌超氧化物歧化酶(SOD1)基因缺失的酿酒酵母菌株, 为进一步以酵母为模型开展家族性肌萎缩硬化症发病机制及防治研究奠定基础.方法 运用LFH-PCR构建了带有遗传霉素抗性基因(KanMX4)的SOD1基因中断框,转化酿酒酵母BY5677,以添加G418的平板筛选出SOD1基因缺失菌株,并经PCR鉴定.结果 PCR扩增证实SOD1基因已被成功敲除;与野生菌株相比,SOD1基因缺失菌株生长缓慢.结论 成功构建了SOD1基因缺失的酿酒酵母菌株.     

COL4A4基因新突变致常染色体显性遗传Alport综合征一例并文献复习

Alport综合征（AS）是慢性肾脏病和终末期肾脏病（ESRD）的重要病因之一,是继常染色体显性遗传性多囊肾后第二常见的遗传性肾脏疾病。常染色体显性遗传是AS中非常少见的遗传方式,既往报道常染色体显性遗传AS(ADAS)患者进展至ESRD年龄较晚。本文报道1例因发现尿检异常4年于2019-09-05就诊于河南中医药大学第一附属医院儿科肾脏病区确诊为ADAS患者的临床资料及基因检测结果并复习相关文献。报道了COL4A4基因新发变异c.3506-3528del(p.G1169Efs*13)所致ADAS家系（该家系中1名成员在31岁时已进展至ESRD）的临床、肾脏病理及基因突变情况,并总结了中国ADAS的文献报道,对该病的基因和临床表型、预后之间的关系做了较全面地分析。由于ADAS发病率低,此家系报道扩展了AS的基因突变谱,有助于提高临床医生对罕见发病的ADAS的认识和及时诊治。     

不同条件下人乳白蛋白YAC的高效定点打靶修饰

目的:对人乳白蛋白酵母人工染色体(HLA-YAC)进行定点改造,以便进一步利用该载体作与基因表达调控相关的研究.方法:借助kar1突变使YPH925菌株与异交配型菌株交配时丧失核融合的能力,把HLA-YAC由酵母AB1380转移到his3缺陷的YPH925菌株.分别以HIS3(对YPH925菌株)和G418R(对YPH925和AB1 380两种菌株)为选择标记,用含HLA-YAC的酵母基因组为模板,PCR克隆人乳白蛋白(HLA)基因的5'和3'端非翻译区各684 bp和940 bp为同源臂,构建打靶载体,线性化的打靶载体经电转化或醋酸锂转化转入酵母内,以菌落PCR为鉴定方法,辅以测序验证.结果:HLA-YAC在目的位置完成了定点打靶修饰,G418R的筛选效率高于HIS3,醋酸锂转化方法的打靶效率稍高于电转化.结论:对YAC的成功修饰为在动物体内的表达及调控研究打下了基础.     

视网膜色素变性视紫红质基因突变的检测

近年来，对原发性视网膜色素变性病因和发病机制的研究中发现，视紫红质(rhodopsin，RHO)基因第23、58、347密码子等40余种突变，可引起常染色体显性遗传视网膜色素变性。目前用于RHO基因检测主要是酶切方法。该法所用酶受点突变的严格限制，一种酶只能用=p--种点突变。为此我     

整合素β3亚基不同片段在酵母双杂交系统中的表达及对报告基因激活作用的检测

目的:为建立用于筛选人血小板整合素蛋白αⅡbβ3拮抗剂的高通量药物筛选模型,对其β3亚基不同片段在酵母双杂交系统中的表达及对报告基因的激活作用进行初步研究.方法:通过PCR扩增得到6个不同长度的整合素β3亚基基因片段,包括片段A1(55E-199Q)、A2(235K-385S)、A3(4I-454T)、A4(4I-77S)、A5(4I-147S)和A6(4I-284S),分别克隆到酵母双杂交诱饵载体pAS2-1中,然后将重组质粒导入酵母双杂交菌株Y190中,检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因的激活作用.结果:6个片段对酵母均无毒性作用,片段A1、A2、A3、A5、A6不能激活报告基因HIS3和LacZ的表达,而片段A4和一个A3的缺失突变体可以激活报告基因的表达,β3亚基N末端存在一个转录激活区.结论:在建立模型时可以使用A1、A2、A3片段,但转录激活是否是β3亚基的生理功能仍有待进一步研究确证.     

淀粉/琼脂糖混合凝胶电泳检测GLOI表型

GLOI即乙二醛酶Ⅰ(Glyoxalase Ⅰ,Ec 4.4.1.5)广泛分布于人的红细胞、精液、肌肉,毛根鞘细胞等二十余种不同组织中。它在红细胞中的活性较高。该酶以还原型谷胱甘肽作辅酶,使甲基乙二醛转变为S-乳酰谷胱甘肽。利用还原型谷胱甘肽可抑制淀粉遇碘液呈蓝色的反应,使酶活性带显现。Kompf等于1975年最先发现它具有遗传多态性,表型有2-2;2-1和1-1型三种,分别受第6号染色体短臂上一对共显性等位基因GLOI~1和GLOI~2控制,因而作为一种检测系统应用于法     

苯乙腈类化合物对体外微核率及SCE影响的研究

本文采用体外微核试验、姐妹染色单体交换试验的检测方法,研究了五种苯乙腈类有机污染物的遗传毒性。结果表明:五种苯乙腈类化合物中除苯乙腈无明显的致突变性外,其它四种化合物即:2-对氯苯基-3-甲基丁腈,2-(4′-硝基苯基)-3-甲基丁腈,2-(4′-甲氧基苯基)-3-甲基丁腈和对-甲氧基苯乙腈均具有致突变性,微核率及SCE频率明显高于对照组。同时证明,苯乙腈类化合物的诱变活性与其化学结构有密切关系。     

vasostatin在毕赤酵母中的表达及其抗血管生成的研究

目的:用酵母表达系统表达具有生物活性的vasostatin,并检测其抗血管生成活性.方法:将vasostatin基因克隆入酵母诱导型表达载体pPIC9K中,经过Sac Ⅰ线性化、电转化毕赤酵母蛋白酶缺陷菌株Pichia pastoris KM17、筛选阳性克隆、PCR鉴定和DNA序列分析,获得了vasostatin基因重组到酵母染色体中的阳性重组子,阳性重组子经甲醇诱导和分离纯化,获得了重组vasostatin蛋白,CAM实验检测重组蛋白抑制血管新生活性.结果:酵母表达的重组vasostatin产量达12 mg·L-1,CAM实验表明重组vasostatin能够显著抑制新生血管生成.结论:酵母表达系统能高效表达具有抑制新生血管生成活性的重组vasostatin蛋白.     

氰戊菊脂与辛硫磷混合杀虫剂对小鼠骨髓细胞染色体畸变率的影响

目的:探讨氰戊菊脂与辛硫磷混合杀虫剂(农满忆)对小鼠骨髓细胞染色体畸变率的影响情况.方法:小鼠染毒该杀虫剂后,取其骨髓细胞进行染色体畸变的检测.结果:杀虫剂高、中剂量组染色体畸变率分别为4.2%和2.6%,与阴性对照组(0.5%)比较差异有显著性(P＜0.05),剂量组之间染色体畸变率差异也有显著性.结论:该杀虫剂在一定剂量下能使小鼠骨髓细胞染色体畸变率增加,主要引起染色体结构畸变,提示它是一种可能致突变物.     

定量分析铁代谢基因在血浆铜蓝蛋白缺陷小鼠中的表达

Aceruloplasminemia是一种常染色体隐性遗传疾患,它是由于血浆铜蓝蛋白(CP)基因突变引起的,以罕有的神经内脏铁超负荷合并缺铁性贫血为特征。 日本的Yamamoto K等培养出CP缺陷[CP(-/-)]小鼠,用来研究CP在铁代谢过程中的作用。这种小鼠表现有明显的肝脏铁负荷过重和轻度缺铁性贫     

新型维甲酸衍生物体外诱导白血病细胞分化

目的 观察新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基依曲替酸酯(ATPA)对白血病NB4细胞株生长和分化的影响.方法 ATPA作用于NB4细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,检测细胞的生长抑制率;硝基四唑氮蓝(NBT)还原实验法分析细胞的分化指标;流式细胞术检测细胞表面分化抗原及细胞周期的变化情况.结果 ATPA呈...