3种酵母样真菌鉴定方法的比较

为综合评价目前我国实验室常规手工发酵鉴定法 (常规法 )、生物梅里埃 ATB Fugus卡鉴定法 (仪器法 )和近年国内开始应用的科玛嘉 (CHRo Magar)酵母样真菌显色培养基鉴定法 (显色法 )等 3种酵母样真菌鉴定方法的优劣。我们同时用这 3种方法对实验室保存的 12 2株酵母样真菌标准菌株进行了鉴定比较 ,报道如下。1　材料与方法1.1　菌株来源 :12 2株实验菌为实验室历年保存的标准菌株 ,其中白假丝酵母菌 5 3株 ,热带假丝酵母菌 31株 ,光滑球假丝酵母菌 18株 ,近平滑假丝酵母菌 11株 ,克柔氏假丝酵母菌 3株 ,季也蒙假丝酵母菌、葡萄牙假丝酵…     

酵母样真菌的培养鉴定及其耐药性分析

目的 对引起感染的酵母样真菌类型及其耐药特性进行研究,以指导临床合理用药.方法 从2005年1月～2007年12月我院临床送检的血液、中段尿、粪便、痰、胸腹水、伤口分泌物、穿刺液等标本中,采用常规方法培养和分离酵母样真菌,用法国生物梅里埃ATB-EXPRESS系统对酵母样真菌进行鉴定,用ATB-FUNGUS药敏试条进行药敏试验.结果 共分离到484株酵母样真菌,其中白色假丝酵母菌占42.4%,热带假丝酵母菌占27.9%,光滑假丝酵母菌占10.5%,清酒假丝酵母菌占7.0%,近平滑假丝酵母菌占2.3%,克柔假丝酵母菌占2.7%,中间假丝酵母菌占4.1%,其他酵母菌占3.1%.酵母样真菌对两性霉素B敏感,对5-氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑存在不同程度的耐药.结论 临床需要加强真菌送检培养,合理使用抗真菌药物,尽量避免单纯经验用药,以减少耐药菌株的出现.     

通过耐受前体或结构类似物筛选提高辅酶Q10产量

 目的 提高热带假丝酵母生产辅酶Q10的能力。方法 将热带假丝酵母通过紫外诱变后耐受生物合成前体物质或结构类似物的实验，从抗性菌株中筛选获得辅酶Q10的高产菌株。结果 通过苯甲酸和对羟基苯甲酸的耐受试验，获得辅酶Q10产量比出发株分别提高84.11%和184%的高产菌株A和B，最高可达120μg/mL。结论 通过发酵产物前体结构类似物的耐受实验，可以提高产物的产量。     

产乳糖酶酵母Kluyveromyces fragilis株培养产酶发酵条件的优化

目的：为进一步提高产乳糖酶酵母Kluyueromyces fragilis(K.fragilis)株的酶产量,对该菌株的培养产酶发酵条件进行优化试验。方法：采用增殖和诱导二步培养法培养酵母K.fragilis株,并采用单因素试验方法分析碳源、氮源对酵母诱导产酶的影响。结果：确定了K.fragilis酵母株诱导培养的较佳配方,当乳糖逍度为120g/L,醋酸铵浓度为5g/L,pH为6.7时,单位酶产量达122.4IU/ml培养液,结论：该菌株生长产酶情况良好,具有较高的应用价值。     

市售川产水豆豉分离株中高产蛋白酶与β-葡萄糖苷酶菌株的菌属鉴定与产酶能力评价

目的 筛选并鉴定72株川产水豆豉分离株中高产蛋白酶及β-葡萄糖苷酶的菌株,为深入研究水豆豉的营养价值及开发其发酵菌株提供实验依据。 方法 采用酪蛋白法和对硝基苯-β-D半乳糖吡喃糖苷(pNPG)法分别测定菌株产蛋白酶和β-葡萄糖苷酶的能力,选出优势菌株,通过形态学、生化特征、16S rRNA和基质辅助激光解析-电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对其进行鉴定。绘制菌株生长曲线和产酶曲线并测得其遗传稳定性。 结果 选择产蛋白酶能力前10名菌株中β-葡萄糖苷酶活力最高者(0.084 U/L)作为优势菌株,表型及分子生物学法鉴定其为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。菌株生长曲线、产酶曲线符合枯草芽孢杆菌特性,遗传稳定性结果显示其产酶能力能稳定遗传至第9代并于第10代开始下降。 结论 从72株川产水豆豉分离株中筛选出的高产蛋白酶和β-葡萄糖苷酶菌株经鉴定为枯草芽孢杆菌。     

产AmpC酶革兰氏阴性杆菌的院内分布与耐药性研究

目的探讨革兰阴性杆菌产诱导性AmpC酶耐药的诱因并监测耐药菌株院内分布情况。方法选择2006年10月~2007年10月我院临床分离的871株革兰阴性菌,采用纸片扩散法进行初筛试验,即以头孢西丁药敏纸片检测受试菌,根据世界药敏协会CLSI(原NCCLS)标准抑菌环直径≤17mm提示对头孢西丁中介或耐药,疑为产AmpC酶菌株,然后利用头孢西丁三维确证试验,对耐药突变菌株进行选择,使用最新版本的WHONET5.4统计软件分析结果。结果头孢他啶和头孢噻肟对持续高产突变株的选择能力最强,头孢比肟选择性较弱,亚安培南无选择性。三代头孢菌素频繁使用的科室,高产AmpC酶菌株所占比例大。结论革兰阴性杆菌处于第三代头孢菌素的选择之下,能筛选出高产AmpC酶突变株,严格控制三代头孢菌素在革兰阴性杆菌所致感染中的使用,可避免治疗过程中发生继发性耐药,止高产AmpC菌株在医院的迅速蔓延。     

纤维素酶系高产菌株的选育

目的：从森林及常年堆放木材的地方采集样本,分离出有较强分解纤维素能力的木霉,变皇使酶活性提高。方法：用选择性培养基进行分离培养,常规方法鉴定,用ＨＮＯ３和ＵＶ进行联合诱变。结果：３５份样品中分离出木霉１２株,其中一株绿色木霉有罗强分解纤维素的能力,诱变处理后ＣＭＣ酶活性提高９０％,ＦＰ酶活性提高７５％,粗酶液１００％崩解滤纸时间由原来的１４小时缩短为４小时,结论：本菌株具有一定实用价值。     

植物内生真菌抗稻瘟病菌活性菌株的筛选

目的筛选具有抗稻瘟病菌活性的植物内生真菌菌株。方法以稻瘟病（Magnaporthe grisea）菌株GUY11为靶标菌,对分离自南方红豆杉的56株内生真菌菌株进行抗稻瘟病菌活性筛选。结果共有16株菌株发酵液对GUY11孢子萌发的ID50在10以上,且对其附着胞形成的ID50在50以上,占总菌株数的28.6%;活性菌株主要分布在拟青霉属（Paecilomyces sp.）和木霉属（Trichoderma sp.）,分别是9株和2株;不同内生真菌的发酵液对孢子萌发和附着胞形成的抑制作用是不同的。结论红豆杉内生真菌对稻瘟病菌具有较高的抑制活性。     

真菌感染肿瘤患者酵母样真菌的分离鉴定及药敏结果分析

目的研究中原油田总医院并发真菌感染肿瘤患者酵母样真菌的感染现状及耐药情况。方法各种临床标本经分离培养，由VITEK32-YBC卡进行酵母样真菌鉴定，分纯菌株采用纸片扩散法对5种抗真菌药物进行药敏试验。结果352份并发真菌感染肿瘤患者的各类标本中有63份分离出酵母样真菌，阳性率为17．9％。分离出菌株66株，其中有3份痰标本分别同时分离出两株真菌。检出率以痰液最高为69．7％，其次咽拭子为13．6％，真菌种类以白色假丝酵母菌和热带假丝酵母菌为主，分别为56．1％和18．2％。分离菌株对制霉菌素、两性霉素B、伊曲康唑的敏感率较高，分别为100％，97％，90．9％。对氟康唑、克霉唑的中介度和耐药率较高，分别为12．1％，6．1％和10．6％，15．2％。结论临床微生物实验室应加强真菌的分离培养和药敏试验，指导临床合理选择抗真菌药物，以减少真菌引起的医院感染。     

申克孢子丝菌和暗色真菌的分离

目的：研究申克孢子丝菌和暗色真菌的分布情况及其生态学。方法： 从吉林地区自然环境中采集腐木、土壤、陈玉米秸、陈麦秸等标本70份,用含放线菌酮的改良沙氏培养基分离菌株,沙氏培养基传代培养,通过观察菌落的外观形态、显微镜下菌丝和孢子的生长形态等方法,鉴定申克孢子丝菌和暗色真菌。结果：70份标本中鉴定出申克孢子丝菌和暗色真菌共37株,分离阳性率为52.86%,其中申克孢子丝菌6株（8.57%）,外瓶霉属14株（20%）,链格孢3株（4.29%）,着色真菌5株（7.14%）,疣状瓶霉4株（5.71%）,待定5株（7.14%）。同时还分离出镰刀菌、念珠菌、曲霉、青霉菌等条件致病菌。结论：研究申克孢子丝菌和暗色真菌、孢子丝菌病、皮肤着色真菌病及暗色丝孢霉病的发病原因及预防具有重要意义。     

Study of a novel antiosteoporosis screening model targeted on cathepsin K

Objective To establish an effective assay to access the effects of natural products on cathepsin K for screening antiosteoporosis drugs. Methods To obtain the purified cathepsin K, we cloned the target fragment from the mRNA of human osteosacoma cell line MG63 and demonstrated its correctness through DNA sequencing. Cathepsin K was expressed in a high amount in E.coli after IPTG induction, and was purified to near homogenetity through resolution and column purification.The specificity of the protein was shown by Western blotting experiment. The biological activity of the components in the fermentation broth was assayed by their inhibitory effects on cathepsin K and its analog papain. Results With the inhibition of papain activity as a screen index, the fermentation samples of one thousand strains of fungi were tested and 9 strains among them showed strong inhibitory effects. The crude products of the fermentation broth were tested for their specific inhibitory effects on the purified human cathepsin K, the product of fungi 2358 shows the highest specificity against cathepsin K. Conclusions The compounds isolated from fungi 2358 show the highest biological activity and are worth further structure elucidation and function characterization.     

碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌的联合药敏研究

目的 评价头孢哌酮/舒巴坦(CFS)与利福平(RFP)、米诺环素(MIN)及左氧氟沙星(LEV)对临床分离碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)的体外联合抑菌作用.方法 采用棋盘法设计,微量肉汤稀释法测定抗菌药物对60株临床分离的CRAB的最低抑菌浓度(MIC),并计算抑菌指数(FIC指数)判断联合抑菌效应.结果 CFS与RFP联用后,80％为协同作用,16.7％为相加作用,3.3％为无关作用,无拮抗作用;CFS与MIN联用后,11.7％为协同作用,45％为相加作用,35％为无关作用,8.3％为拮抗作用;CFS与LEV联用时,6.7％为协同作用,40％为相加作用,53.3％为无关作用,无拮抗作用.上述药物联用后,各药MIC50均明显降低,浓度-累积抑菌率曲线均表现为左移.结论 CFS与RFP、MIN联用对CRAB体外联合抗菌效应主要表现为协同和相加作用.CFS与LEV联用主要表现为无关作用,但仍有近半数菌株表现为协同和相加作用.     

华南毛蕨内生真菌抑菌活性筛选及活性菌株Pestalotiopsis sp.CYC38代谢产物的研究

目的 筛选具有抑菌活性的华南毛蕨内生真菌及分析其中1株活性较强的菌株的代谢产物.方法 以敏感型金黄色葡萄球菌、耐药型金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌为供试指示菌,采用琼脂块法对43株内生真菌进行抑菌活性筛选,以Pestalotiopsis sp.CYC38作为目标菌株,对其次级代谢产物进行分离,并采用波谱学分析手段鉴定化合物结构.结果 43株内生真菌中有19株菌株至少对1种指示菌有抑菌作用,占分离菌株总数的44%;从高活性菌株CYC38的发酵产物中分离到2个化合物,分别鉴定为啤酒甾醇和1-(4-羟基苯基)-2氨基乙醇.结论 华南毛蕨内生真菌具有较好的抗菌活性,且对耐药型金黄色葡萄球菌也表现出良好的抑制作用,该结果为开发新型的抗耐药菌药物提供基础.     

一株产鬼臼毒素内生真菌的分离及其代谢产物抗小鼠S180肉瘤的研究

目的从秦岭濒危药用桃儿七(Sinopodophyllum hexandrum)植株内分离出产鬼臼毒素(podophyllotoxin)的内生真菌,研究其发酵液的抑瘤活性。方法采用组织分离法分离、纯化桃儿七植株根、茎部位的内生真菌,逐一鉴定其代谢产物,筛选出能够产鬼臼毒素的内生真菌。采用动物体内抑瘤实验研究内生真菌发酵液对小鼠S180肉瘤的抑制作用,并对荷瘤小鼠眼眶取血进行白细胞及淋巴细胞计数。结果分离出一株产鬼臼毒素的内生真菌T8,鉴定为Cephalosporium sp.。T8发酵液实验动物组的肿瘤质量低于模型组,大于环磷酰胺组(P<0.05),且其抑制率低于环磷酰胺(P<0.05)。T8发酵液能够促进白细胞和淋巴细胞的增殖。结论 T8发酵液具有一定的抑制肿瘤生长的作用,经减毒处理后可以作为肿瘤治疗的辅助药物。     

应用大鼠肝微粒体筛选对细胞色素P4502D6有抑制作用的中药

目的从17种中药(单体、提取物和注射液)中快速筛选出对细胞色素P4502D6(CYP2D6)亚型有抑制作用的中药,建立高通量筛选对CYP2D6有抑制作用中药的技术平台。方法取大鼠空白肝微粒体,分别加入17种中药,HPLC法测定大鼠肝微粒体中CYP2D6的探针药物右美沙芬(DM)的代谢率,通过代谢率降低的现象初步筛选出能抑制肝微粒体中CYP2D6代谢的药物。结果槲皮素、黄芩苷、厚朴提取物、清开灵注射液、盐酸川芎嗪注射液可明显降低DM的代谢率(P<0.01)。结论初步筛选出槲皮素、黄芩苷、厚朴提取物、清开灵注射液、盐酸川芎嗪注射液这5种中药可抑制肝微粒体CYP2D6酶活性。此方法可作为高通量筛选对CYP2D6活性有抑制作用中药的技术平台。     

不同酶源乙酰胆碱酯酶的抑制剂筛选方法比较

目的：建立一种可靠、快速、便捷、经济的乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AChE）抑制剂的筛选方法,为新药发现阶段AChE抑制剂的筛选提供经济可靠的微量筛选方法,然后对植物提取物样品进行筛选。方法：分别采用电鳗AChE、人源红细胞AChE、大鼠海马区、纹状体匀浆液中的AChE为酶源。以96孔板为载体,利用优化的Ellman方法,在生理pH值和温度的条件下,以他克林和石杉碱甲作为阳性对照,检测对不同酶源AChE的抑制作用,确定最佳酶反应条件（最佳底物浓度、反应时间、显色剂浓度）,并对植物提取物样品的AChE抑制作用进行检测。结果：采用上述四种酶源的AChE进行AChE抑制剂微量筛选方法操作简便快速、可靠经济。其中应用电鳗AChE进行筛选显示灵敏度较高,他克林和石杉碱甲对电鳗AChE的抑制作用相当,而对人源红细胞AChE、大鼠海马区、纹状体匀浆酶源的抑制作用,石杉碱甲明显优于他克林,所筛选植物提取物对AChE均没有抑制作用。结论：本实验中所建立的筛选方法操作简便、快速、可靠经济,可用于纯化合物的筛选。     

Diversity,novelty, antimicrobial activity,and new antibiotics of cultivable endophytic actinobacteria isolated from psammophytes collected from Taklamakan Desert

Three hundred and twenty endophytic actinobacterial strains were isolated from psammophytes collected from Taklamakan Desert and identified. Among them, three strains already had been identified as new species of two genera and sixteen isolates showed relatively low 16S rRNA similarities < 98.6% to validly described species. Seventy-five of the isolates were selected as representative strains to screen antibacterial activity and mechanism. Forty-seven strains showed antagonistic activity against at least one of the indicator bacteria. Two Streptomyces strains produced bioactive compounds inducing DNA damage, and two Streptomyces strains produced bioactive compounds with inhibitory activity on protein biosynthesis. Notably, the strain Streptomyces sp. 8P21H-1 that demonstrated both strong antibacterial activity and inhibitory activity on protein biosynthesis was prioritized for exploring new antibiotics. Under the strategy of integrating genetics-based discovery program and MS/MS-based molecular networking, two new streptogramin-type antibiotics, i.e., acetyl-griseoviridin and desulphurizing griseoviridin, along with known griseoviridin, were isolated from the culture broth of strain 8P21H-1. Their chemical structures were determined by HR-MS, and 1D and 2D NMR. Desulphurizing griseoviridin and griseoviridin exhibited antibacterial activities by inhibiting translation.     

槐耳抗肿瘤活性部位的筛选研究

目的 研究槐耳不同提取分离部位对不同肿瘤细胞的体外增殖抑制作用, 筛选槐耳抗肿瘤有效部位。方法 方法采用溶剂法对槐耳进行不同部位分离,利用CCK-8法检测槐耳不同提取物对肿瘤细胞的抑制作用。结果 槐耳不同提取物对肿瘤细胞均有不同程度的抑制作用,其中,醇水双提部位抗肿瘤活性最高。结论 槐耳中抗肿瘤的有效部位是醇水双提部位,且其对不同肿瘤细胞的体外增殖抑制作用呈一定的浓度依赖作用。     

金银花中酚酸类和黄酮类成分的黄嘌呤氧化酶抑制活性

建立基于紫外分光光度原理的微孔板筛选方法,用于金银花药材中黄嘌呤氧化酶抑制剂的筛选,并进行抑制活性测定。通过对筛选条件优化,建立了可靠的筛选模型,并对从金银花中分离得到的20个单体化合物进行了筛选,发现8个酚酸类成分和4个黄酮类成分具有黄嘌呤氧化酶抑制活性,其中3,4-二咖啡酰奎宁酸甲酯、槲皮素和木犀草素有很好的活性,其IC₅₀分别为8.36,6.46和2.08 μmol/L。筛选结果表明,金银花中黄酮苷元的活性优于黄酮苷,双咖啡酰奎宁酸的活性明显优于单咖啡酰奎宁酸类成分,双咖啡酰奎宁酸甲酯的活性明显优于双咖啡酰奎宁酸,且双咖啡酰奎宁酸的5位取代对化合物的活性贡献最大。     

多药耐药铜绿假单胞菌的体外联合药敏研究

目的评价美罗培南（meropenem,MEM）分别与依替米星（etimicin,ETM）、环丙沙星（ciprofloxacin,CIP）联合用药对临床分离多药耐药铜绿假单胞菌（muhipledrugresistantpseudomonasaeruginosa,MDRP）的体外抑菌作用。方法采用棋盘法设计,琼脂平板稀释法测定抗菌药物对38株临床分离的MDRP的最低抑菌浓度（MIC）,并计算抑菌指数（FIC指数）判断联合抑菌效应。结果MEM与ETM联用后,63．2％为协同作用,36．8％为相加作用,没有无关作用和拮抗作用;MEM与CIP联用后,73．5％为协同作用,21．2％为相加作用,5．3％为无关作用,没有拮抗作用。上述药物联用后,各药MIC50及MIC90均明显降低,浓度一累积抑菌率曲线均表现为左移。结论MEM分别与ETM、CIP联用对MDRP体外联合抗菌效应主要表现为协同和相加作用。