肝康颗粒对Con A诱导小鼠急性免疫性肝损伤的Caspase-3mRNA表达的影响

目的:观察caspase-3基因在Con A性肝损伤小鼠肝组织中的表达、肝细胞凋亡的情况以及肝康颗粒对其影响.方法:TUNEL法肝细胞凋亡,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量分析肝组织Caspase-3 mRNA表达水平.结果:模型组肝组织中Caspase-3 mRNA的相对单位值最高,说明在模型组动物肝组织Caspase-3 mRNA有明显表达;肝康颗粒低、中、高剂量组小鼠Caspase-3 mRNA的相对单位值均低于模型组.表示肝康颗粒对Con A诱导肝损伤小鼠抑制肝细胞凋亡作用.结论:肝康颗粒能下调或延迟肝细胞Caspase-3 mRNA的表达,影响蛋白酶级联切割过程,进而减轻或抑制Con A肝损伤小鼠肝细胞凋亡.     

四物汤对血虚证小鼠肝细胞凋亡相关分子Caspase 8 mRNA表达的影响

目的:观察四物汤对血虚证小鼠肝细胞凋亡执行分子Caspase 8 mRNA表达的影响。方法:24只C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、给药组。以腹腔注射环磷酰胺建立血虚证模型,采用全自动血液分析仪检测外周血象,TUNEL法检测肝细胞凋亡百分率,荧光定量PCR法检测Caspase 8 mRNA表达。结果:与模型组相比,给药组小鼠外周血红细胞数及血红蛋白含量升高(P0.05),肝细胞凋亡百分率下降(P0.05),Caspase 8 mRNA表达水平下降(P0.05)。结论:四物汤可改善血虚证模型小鼠外周血象,下调凋亡执行分子Caspase 8 mRNA表达,减少肝细胞凋亡。提示四物汤减少血虚证模型肝细胞凋亡的作用机制可能与其抑制Caspase 8激活有关。     

四物汤对血虚证小鼠肝细胞凋亡相关分子Caspase3及Caspase8表达的影响

目的观察四物汤对血虚证小鼠肝细胞凋亡相关分子Caspase3及Caspase8表达的影响。方法 24只C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、给药组。以腹腔注射环磷酰胺建立血虚证模型,采用全自动血液分析仪检测外周血象,TUNEL法检测肝细胞凋亡百分率,荧光定量PCR法检测Caspase3及Caspase8 mRNA表达。Western blot检测Caspase3及Caspase8蛋白表达。结果与模型组相比,给药组小鼠外周血红细胞数及血红蛋白含量升高(P0.01),肝细胞凋亡百分率下降(P0.01),Caspase3及Caspase8 mRNA及蛋白表达水平下降(P0.05,P0.01)。结论四物汤可改善血虚证模型小鼠外周血象,下调凋亡相关分子Caspase3及Caspase8表达,减少肝细胞凋亡。提示四物汤减少血虚证模型肝细胞凋亡的作用机制可能与其抑制Caspase3及Caspase8激活。     

四物汤对环磷酰胺所致贫血小鼠肝细胞凋亡及Caspase3表达的影响

【目的】观察四物汤对环磷酰胺所致贫血小鼠肝细胞凋亡及凋亡执行分子Caspase3表达的影响。【方法】选用48只C57BL/6J小鼠随机分为空白组,模型组,四物汤低、中、高剂量组(剂量分别为5、10、20 g·kg-1·d-1),肌苷(阳性对照,剂量为0.06 g·kg-1·d-1)组。以腹腔注射环磷酰胺(剂量为0.1 g/kg)复制贫血模型,采用TUNEL法检测肝细胞凋亡,Western blot法检测Caspase-3表达。【结果】四物汤可显著升高贫血模型小鼠外周血红细胞计数、白细胞计数以及血红蛋白含量,显著降低肝细胞凋亡百分率,下调Caspase3蛋白表达(均P﹤0.05)。【结论】四物汤补益肝血的作用机理可能与其减少肝细胞凋亡有关。     

微小RNA-30b-3p在肝脏缺血再灌注损伤小鼠肝组织中的表达及意义

目的探讨微小RNA-30b-3p(miR-30b-3p)在肝脏缺血再灌注损伤(IRI)小鼠肝组织中的表达,并阐述可能的机制。方法将40只无特定病原体级雄性健康C57BL/6小鼠随机分为IRI组、假手术组、miRNA阴性对照(miR-NC)组和miR-30b-3p agomir组,每组10只。IRI组、miR-NC组和miR-30b-3p agomir组小鼠建立肝脏IRI模型,假手术组小鼠仅进行开腹及关腹等操作。造模前24 h,miR-NC组和miR-30b-3p agomir组小鼠分别经尾静脉注射10 nmol·L~(-1)的miR-NC或miR-30b-3p agomir 0.3 m L;假手术组和IRI组小鼠术前不进行干预。采用生物化学法检测各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;苏木精-伊红染色法观察小鼠肝组织病理学改变;荧光脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法标记肝细胞凋亡情况;免疫组织化学法检测各组小鼠肝组织中Caspase-3表达与分布;实时荧光定量聚合酶链反应检测小鼠肝组织中miR-30b-3p表达;Western blot法检测小鼠肝组织中Bcl-2、Fas相关死亡域蛋白(FADD)、Bax及Cleave Caspase-3蛋白的表达。结果 IRI组和miR-NC组小鼠血清ALT、AST水平显著高于假手术组(P<0.05),miR-30b-3p agomir组与假手术组小鼠血清ALT、AST水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-30b-3p agomir组小鼠血清ALT、AST水平显著低于IRI组(P<0.05);miR-NC组与IRI组小鼠血清ALT、AST水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-30b-3p agomir组小鼠血清ALT、AST水平均显著低于miR-NC组(P<0.05)。IRI组、miR-NC组小鼠肝组织中miR-30b-3p相对表达量显著低于假手术组(P<0.05),miR-30b-3p agomir组小鼠肝组织中miR-30b-3p相对表达量显著升高(P<0.05);miR-30b-3p agomir组小鼠肝组织中miR-30b-3p相对表达量显著高于IRI组(P<0.05),miR-NC组与IRI组小鼠肝组织中miR-30b-3p相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05),miR-30b-3p agomir组小鼠肝组织中miR-30b-3p相对表达量显著高于miR-NC组(P<0.05)。IRI组和miR-NC组小鼠肝细胞凋亡率显著高于假手术组(P<0.05),miR-30b-3p agomir组小鼠肝细胞凋亡率与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-30b-3p agomir组小鼠肝细胞凋亡率显著低于IRI组(P<0.05);miR-NC组与IRI组小鼠肝细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-30b-3p agomir组小鼠肝细胞凋亡率显著低于miR-NC组(P<0.05)。IRI组和miR-NC组小鼠肝组织中Caspase-3相对表达量显著高于假手术组(P<0.05);miR-30b-3p agomir组与假手术组小鼠肝组织中Caspase-3相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-30b-3p agomir组小鼠肝组织中Caspase-3相对表达量显著低于IRI组(P<0.05),miR-NC组与IRI组小鼠肝组织中Caspase-3相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-30b-3p agomir组小鼠肝组织中Caspase-3相对表达量显著低于miR-NC组(P<0.05)。与假手术组比较,IRI组、miR-NC组小鼠肝组织中FADD、Bax、Cleave Caspase-3相对表达量均显著增加(P<0.05),Bcl-2相对表达量显著减少(P<0.05);miR-30b-3p agomir组与假手术组小鼠肝组织中FADD、Bax、Cleave Caspase-3及Bcl-2相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05);与IRI组比较,miR-30b-3p agomir组小鼠肝组织中FADD、Bax及Cleave Caspase-3相对表达量显著降低(P<0.05),Bcl-2相对表达量显著增加(P<0.05);miR-NC组与IRI组小鼠肝组织中FADD、Bax、Cleave Caspase-3及Bcl-2相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05);与miR-NC组比较,miR-30b-3p agomir组小鼠肝组织中FADD、Bax及Cleave Caspase-3相对表达量均显著降低(P<0.05),Bcl-2相对表达量显著增加(P<0.05)。结论 miR-30b-3p可减轻小鼠肝脏IRI,其机制可能与抑制FADD/Caspase-3信号通路所介导的肝细胞凋亡有关。     

解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭小鼠肝脏TNFRⅠ与TNFRⅡ表达的影响

目的:观察解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭小鼠肝脏TNFRⅠ与TNFRⅡ表达的影响,探讨其拮抗肝衰竭的作用机制。方法:采用D-氨基半乳糖联合内毒素腹腔注射法构建小鼠急性肝衰竭动物模型,并分别予解毒化瘀颗粒、乳果糖、安宫牛黄丸干预治疗,HE染色观察肝脏病理改变,TUNEL法检查肝细胞凋亡率,免疫组化检测小鼠肝脏TNFRⅠ与TNFRⅡ的表达。结果:解毒化瘀颗粒干预组肝组织凋亡、坏死程度轻于模型对照组,免疫组化检测的肝脏TNFRⅠ表达量少于模型对照组(P<0.05),TNFRⅡ表达多于模型对照组(P<0.05)。结论:解毒化瘀颗粒可通过下调肝组织TNFRⅠ的表达、上调TNFRⅡ的表达途径抑制肝细胞凋亡,延缓肝脏坏死的进展。     

HMGB1调控重症急性胰腺炎脾淋巴细胞凋亡的实验研究

目的 研究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在重症急性胰腺炎(SAP)小鼠脾淋巴细胞中的表达及其对SAP小鼠脾淋巴细胞凋亡的影响。方法 成年雄性SPF级BALB/C小鼠30只,随机分为对照组、SAP组、SAP+Ab组,每组10只。实验前BALB/C小鼠禁食12h,自由饮水。SAP组采用腹腔注射雨蛙素和脂多糖诱导,SAP+Ab组于SAP造模成功后立即腹腔注射抗-HMGB1抗体。各组造模后12h取材,胰腺组织HE染色并对胰腺损伤进行评分,ELISA检测小鼠血清HMGB1和Caspase-3表达水平,流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞凋亡率,RT-PCR检测脾淋巴细胞HMGB1、Caspase-3mRNA的表达情况。结果 与对照组比较,SAP组和SAP+Ab组胰腺损伤评分增加,血清中HMGB1和Caspase-3含量升高(P <0.05),脾淋巴细胞凋亡率增高(P <0.05),脾淋巴细胞HMGB1mRNA和Caspase-3mRNA表达升高(P <0.05)。与SAP组比较,SAP+Ab组胰腺的损伤评分降低,血清中HMGB1和Caspase-3含量降低(P <0.05),脾淋巴细胞凋亡率降低(P <0.05),脾淋巴细胞HMGB1mRNA、Caspase-3mRNA表达降低(P <0.05)。SAP组脾淋巴细胞HMGB1mRNA、血清HMGB1水平与脾淋巴细胞凋亡率、脾淋巴细胞Caspase-3mRNA、血清Caspase-3水平呈正相关(P <0.05)。结论 HMGB1与SAP脾淋巴细胞凋亡密切相关,可作为治疗SAP的一个潜在靶点。     

角果木提取物Tagalsin对H22荷瘤小鼠Survivin和Caspase-3表达的影响

目的 探讨角果木提取物Tagalsin对H22肝癌细胞的抑制作用及其机制.方法 将H22肝癌细胞原位接种于小鼠肝脏,建立小鼠原位移植性肝癌模型,建立模型第10天将小鼠随机分为食用油空白对照组、卡莫氟阳性对照组和Tagalsin低、中、高剂量治疗组,末次给药24 h后处死小鼠;观察各组荷瘤小鼠的生存状态及体重变化,并计算各组小鼠的肿瘤近似体积和脾脏指数;观察肿瘤组织病理学变化;免疫组化方法检测各组Caspase-3、Survivin蛋白的表达;逆转录-酶链聚合反应(RT-PCR)技术检测Caspase-3、Survivin基因的表达.结果 Tagalsin能有效抑制H22肝癌细胞的生长,高剂量可使荷瘤小鼠的脾脏指数降低(P<0.01).Tagalsin低、中、高剂量治疗组的抑瘤率分别为17.89%、63.1%、71.78%,卡莫氟组的抑瘤率为63.12%;阳性对照组及Tagalsin中、高剂量治疗组Caspase-3蛋白的表达高于空白对照组(P均<0.05),而Survivin蛋白的表达低于空白对照组(P均<0.05);与空白对照组相比,Tagal-sin各治疗组及阳性对照组Caspase-3基因水平显著上调(P<0.05或P<0.01),而高剂量组及阳性对照组Survivin基因水平下调(P均<0.01).病理变化:Tagalsin高剂量组及阳性对照组肿瘤细胞体积缩小,胞浆浓染,核固缩,核仁不清,肿瘤细胞可见破碎,有较多凋亡细胞分布.结论 Tagalsin对H22肝癌细胞具有明显抑制作用,其机制可能与上调Caspase-3基因表达而下调Survivin基因的表达有关.     

巴豆生物碱对Lewis小鼠肺腺癌细胞生长和凋亡的影响及机制研究

目的 通过研究巴豆生物碱（CA）对Lewis小鼠肺腺癌细胞生长及对凋亡相关蛋白（Survivin、Caspase-3、Bax）、YAP蛋白的调控作用,探讨CA对肺腺癌细胞生长和凋亡的影响及其具体的作用机制。方法 培养Lewis鼠源性肺腺癌细胞（LLC）,复制小鼠皮下成瘤模型,分为5组,每组10只,分别为对照组、低剂量CA组、中剂量CA组、高剂量CA组及顺铂组。皮下成瘤1周后给予药物干预,第22天对5组小鼠取瘤称重,计算抑瘤率并通过光学显微镜观察各组病理形态学的变化,判断CA对瘤体生长的抑制作用;Western blotting检测Survivin、Caspase-3、Bax及YAP蛋白相对表达量;qRT-PCR法检测Survivin、Caspase-3、Bax及YAP mRNA相对表达量。结果 中剂量CA组和高剂量CA组小鼠的一般生存状态较对照组、低剂量CA组及顺铂组好。低剂量CA组、中剂量CA组、高剂量CA组及顺铂组肿瘤细胞出现不同程度细胞凋亡现象,对照组肿瘤细胞多为坏死细胞。低剂量CA组、中剂量CA组、高剂量CA组及顺铂组的抑瘤率分别是13.91％、14.83％、27.84％和68.45％,4组抑瘤率比较,差异有统计学意义（P <0.05）,各组抑瘤率依次升高,顺铂组肿瘤生长最慢。不同剂量CA组中Survivin mRNA相对表达量低于对照组（P <0.05）,CA剂量越高,Survivin mRNA相对表达量越低;而不同剂量CA组中Caspase-3和Bax mRNA相对表达量高于对照组（P <0.05）,CA剂量越高,Caspase-3和Bax mRNA的相对表达量越高;各组YAP mRNA的相对表达量比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 CA对Lewis肺腺癌小鼠瘤体生长有抑制作用,并引起细胞凋亡。CA通过促进Bax和Caspase-3表达及抑制Survivin表达来调控Lewis小鼠肺腺癌细胞凋亡;其调控机制可能是通过下调Survivin的表达,从而使得Survivin对Caspase-3的抑制作用减弱,而Bax上调可进一步激活Caspase-3,从而诱导Caspase级联效应促进细胞凋亡,为肺腺癌治疗提供了新思路。     

抑郁对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响

目的:探讨抑郁对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3的影响。方法:大鼠随机分为四组,各组8只,A组为假手术组,B组为抑郁大鼠假手术组,C组为心肌梗死组,D组为抑郁大鼠心肌梗死组。用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应方法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的基因表达。结果:各组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达的差异有统计学意义(P<0.01),C、D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达均高于A组和B组,差异有统计学意义(P<0.01),D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bax、Caspase-3 mRNA表达高于C组,而心肌细胞Bcl-2蛋白及mRNA表达低于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑郁可以加重心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡,其机制可能与上调促凋亡基因Bax及Caspase3表达、下调抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。     

郁金水煎剂对四氯化碳致急性肝损伤小鼠肝细胞p53和caspase-3表达的影响及其对肝损伤的保护作用

目的：探讨单味郁金水煎剂对四氯化碳（CCl4）致急性肝损伤小鼠肝细胞凋亡基因p53和caspase-3蛋白表达的影响,阐明郁金对肝损伤保护作用的机制。方法:ICR小鼠60只,随机分为空白对照组（等体积生理盐水）、模型组（等体积生理盐水）、郁金低剂量组（2.5 g/kg）、郁金中剂量组（5.0 g/kg）、郁金高剂量组（10.0 g/kg）和阳性药组 (甘利欣 22.5 mg/kg);连续给药7 d后,除空白对照组外各组小鼠均通过CCl4复制小鼠急性肝损伤模型。计算肝指数,测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,HE染色观察肝组织形态学变化;RT-PCR法检测肝细胞p53基因转录情况;免疫组织化学法检测肝细胞caspase-3蛋白表达。结果：与空白对照组比较,模型组小鼠肝指数明显增加（P<0.05）;与模型组比较,各给药组小鼠肝指数明显降低（P<0.05）。与空白对照组比较,模型组小鼠血清ALT增高（P<0.01）;与模型组比较,阳性药组及郁金高、中剂量组小鼠血清ALT明显降低（P<0.05）。肝脏形态学变化,肉眼观察,空白对照组小鼠肝脏呈现粉红色,质软而富有弹性,模型组小鼠肝脏明显肿大、呈微黄色,表面可见散在点状及片状黄褐色斑点,质脆,各给药组小鼠肝脏大小、颜色及质地均界于空白对照组与模型组之间,且表面无明显黄褐色斑点;镜下观察,空白对照组小鼠肝脏结构正常,模型组小鼠细胞呈明显局灶性气球样变、水样变性和死亡,而阳性药组和郁金中、高剂量组小鼠与模型组比较肝组织上述病灶数量减少。与空白对照组比较,模型组小鼠肝细胞p53基因转录明显增强（P<0.05）;与模型组比较,郁金高剂量组小鼠肝细胞p53基因转录显著减弱 （P<0.05）。与模型组比较,郁金给药组小鼠肝细胞caspase-3蛋白表达减弱。结论：郁金对CCl4致小鼠急性肝损伤有一定的拮抗作用,其机制之一可能与下调凋亡基因p53和caspase-3蛋白的表达、阻碍肝细胞凋亡有关。     

创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织凋亡相关基因的动态表达及抗菌药物干预效应

目的 探讨创伤弧菌（W）脓毒症大鼠肝组织凋亡相关基因Fas mRNA、细胞色素C（CytC）mRNA、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspases）-9 mRNA、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA和Bcl-2 mRNA的动态表达及头孢哌酮钠联用乳酸左氧氟沙星的干预效应.方法 制作大鼠W脓毒症模型（W组）和W脓毒症抗菌药物干预模型（AA组）,并设正常对照组（NC组）,同时采用RT-PCR法检测各组各时点肝组织Fas mRNA、CytC mRNA、Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达量的动态变化.结果 W组各时点肝组织Fas mRNA、CytC mRNA、Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA和Bax mRNA的表达量均较NC组增高.而各时点Bcl-2 mRNA表达量均较NC组下降（均P〈0.05）;AA组染菌后9、12h时肝组织Bcl-2 mRNA表达量及9h时的Caspase-3 mRNA表达量仍高于NC组（均P〈0.05）;AA组染菌后9、12、16h时的肝组织Fas mRNA、CytC mRNA、Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA表达量均较同时点W组降低（均P〈0.05）,染菌后12、16h时的Bax mRNA表达量均较同时点W组降低（均P〈0.05）,而染菌后9、12、16h时的Bcl-2 mRNA表达量则较同时点W组增高（均P〈0.05）.结论 外源性、内源性凋亡途径均参与了W脓毒症肝细胞损伤过程;促/抗凋亡调节基因（Bax/Bcl-2）表达失衡可促进肝细胞凋亡;而抗菌药物则可有效抑制肝细胞凋亡,从而维持促/抗凋亡调节基因表达的平衡.     

Bcl-2蛋白及caspase-3基因表达与暴发性肝衰竭肝细胞凋亡关系的研究

目的：研究Bcl-2蛋白与caspase-3基因表达在实验性暴发性肝衰竭（FHF）中对肝细胞凋亡的作用。方法：用脂多糖和D-氨基半乳糖制备FHF小鼠模型；免疫组化法检测肝组织内Bcl-2蛋白表达；原位杂交法检测肝组织内ccqspcqse-3基因表达；缺口原位末端标记技术检测肝细胞凋亡。结果：模型组用药后2h Bcl-2有较多表达，4h表达最多，以后逐渐减少，4h与2h比较差别显著（P〈0．05），与8h、12h比较差别十分显著（P〈0．01）。模型组用药后2h caspase-3开始少量表达，8h达最高峰，并出现典型的肝细胞凋亡改变。12h表达下降，且同时存在肝细胞凋亡和坏死。Bcl-2与caspase-3表达及肝细胞凋亡均呈负相关。结论：在FHF中，肝细胞凋亡与caspase-3的激活有关；Bcl-2可能通过抑制caspase-3的活性而抑制肝细胞凋亡。     

郁金水煎剂对四氯化碳致急性肝损伤小鼠肝细胞p53和caspase-3表达的影响及其对肝损伤的保护作用

目的:探讨单味郁金水煎剂对四氯化碳(CCl4)致急性肝损伤小鼠肝细胞凋亡基因p53和caspase-3蛋白表达的影响,阐明郁金对肝损伤保护作用的机制。方法:ICR小鼠60只,随机分为空白对照组(等体积生理盐水)、模型组(等体积生理盐水)、郁金低剂量组(2.5g·kg-1)、郁金中剂量组(5.0g·kg-1)、郁金高剂量组(10.0g·kg-1)和阳性药组(甘利欣22.5mg·kg-1);连续给药7d后,除空白对照组外各组小鼠均通过CCl4复制小鼠急性肝损伤模型。计算肝指数,测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,HE染色观察肝组织形态学变化;RT-PCR法检测肝细胞p53基因转录情况;免疫组织化学法检测肝细胞caspase-3蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠肝指数明显增加(P<0.05);与模型组比较,各给药组小鼠肝指数明显降低(P<0.05)。与空白对照组比较,模型组小鼠血清ALT增高(P<0.01);与模型组比较,阳性药组及郁金高、中剂量组小鼠血清ALT明显降低(P<0.05)。肝脏形态学变化,肉眼观察,空白对照组小鼠肝脏呈现粉红色,质软而富有弹性,模型组小鼠肝脏明显肿大、呈微黄色,表面可见散在点状及片状黄褐色斑点,质脆,各给药组小鼠肝脏大小、颜色及质地均界于空白对照组与模型组之间,且表面无明显黄褐色斑点;镜下观察,空白对照组小鼠肝脏结构正常,模型组小鼠细胞呈明显局灶性气球样变、水样变性和死亡,而阳性药组和郁金中、高剂量组小鼠与模型组比较肝组织上述病灶数量减少。与空白对照组比较,模型组小鼠肝细胞p53基因转录明显增强(P<0.05);与模型组比较,郁金高剂量组小鼠肝细胞p53基因转录显著减弱(P<0.05)。与模型组比较,郁金给药组小鼠肝细胞caspase-3蛋白表达减弱。结论:郁金对CCl4致小鼠急性肝损伤有一定的拮抗作用,其机制之一可能与下调凋亡基因p53和caspase-3蛋白的表达、阻碍肝细胞凋亡有关。     

萱草花黄酮对酒精性肝损伤氧化应激及肝细胞凋亡机制的探讨

目的 探讨萱草花黄酮对急性酒精性肝损伤小鼠肝细胞凋亡及相关蛋白表达的影响.方法 40只小鼠分为4组,分别为空白对照组、模型对照组和萱草花黄酮低、高剂量组,每组各10只.连续灌胃给药7d,末次给药1h后,造模组小鼠一次性灌胃50％乙醇12 mL/kg,空白对照组给予同体积蒸馏水.测定各组小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)活性;肝组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;HE染色观察肝脏病理学改变;利用流式细胞仪检测肝细胞悬液中细胞凋亡率;Western blot检测肝细胞caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 萱草花黄酮各组可降低血清AST、ALT活性;还可降低肝组织匀浆MDA水平,提高SOD的活性;肝组织病理学检查可见,萱草花黄酮高剂量组可使肝细胞变性、坏死的程度明显减轻,缓解肝组织的病理学改变;与模型组比较,萱草花黄酮各组肝细胞的凋亡率均有明显下降;Western blot结果显示萱草花黄酮各组caspase-3蛋白水平降低,Bcl-2蛋白表达增加,而Bax蛋白表达减少,Bax/Bcl-2比值降低.结论 萱草花黄酮对小鼠急性酒精性肝损伤具有明显的保护作用并且能够抑制肝细胞凋亡,其作用机制可能与其抗氧化作用及调节凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2和Bax的表达有关.     

内质网应激介导滋养细胞凋亡在妊娠期肝内胆汁淤积症中的作用及机制

目的探讨内质网应激介导滋养细胞凋亡在妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）中的作用及机制。方法收集2015 年12 月~ 2016年12月在南方医科大学南方医院住院分娩的ICP孕妇20例为病例组,另以同期因社会因素行择期剖宫产术的20例无合 并症的正常孕妇为正常对照组。利用HE染色计量观察正常对照孕妇及ICP孕妇胎盘合体细胞结节数量;RT-PCR法检测正常 孕妇及ICP孕妇胎盘组织中GRP78、CHOP、caspase-3及caspase-7的mRNA表达;建立不同浓度胆酸（0、10、50、100 μmol/L）体 外刺激HTR-8/SVneo人早孕滋养细胞株模型,利用RT-PCR法检测HTR-8/SVneo细胞GRP78、CHOP、caspase-3及caspase-7的 mRNA表达及利用蛋白印迹法检测GRP78、CHOP蛋白的表达;caspase-3、caspase-7活性检测试剂盒分别检测其活化程度;电镜 观察细胞凋亡形态。结果ICP 组较对照组孕妇胎盘组织中合体细胞结节数明显增多（P<0.01）;GRP78、CHOP、caspase-3 及 caspase-7的mRNA表达明显上调（P<0.05）;不同浓度（0、10、50、100 μmol/L）去氧胆酸作用细胞24 h后,GRP78、CHOP、caspase-3 及caspase-7 mRNA的表达水平较对照组显著增高（P<0.05）,GRP78、CHOP蛋白的表达水平较对照组也显著增高,且均存在浓 度依赖效应;50 μmol/L去氧胆酸作用细胞24 h后检测caspase-3及caspase-7活性增高（P<0.05）;50 μmol/L去氧胆酸作用细胞 12 h后电镜观察HTR-8/SVneo细胞呈现凋亡小体。结论ICP孕妇胎盘组织中存在滋养细胞过度凋亡及内质网应激激活的现 象。去氧胆酸可以呈浓度依赖性地促进滋养细胞内质网应激相关基因mRNA和蛋白的表达,引起细胞凋亡,提示内质网应激介 导的滋养细胞凋亡在ICP的发病机制中可能起着重要的作用。     

As2O3诱导NB4、HL-60细胞凋亡的机制研究

目的探讨三氧化二砷(As₂O₃)在体外抑制急性早幼粒白血病(acute promyelocyticleukemia, APL)细胞NB4、HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡的分子机制。方法 通过WST-8法检测上述两个细胞株的增殖抑制曲线;用AnnexinV/PI流式细胞术检测细胞的凋亡;用Real time PCR检测凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2、Bax、p53、C-myc、Survivin在As₂O₃处理前后的表达变化,同时用Westernblot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2、Bax、P53在As₂O₃处理前后的表达变化。结果 As₂O₃能够显著抑制两种细胞增殖, Westernblot检测及Realtime PCR结果显示,As₂O₃处理引起了两种细胞中Bax、Caspase-3、Caspase-8 、Caspase-9基因表达水平增加,且蛋白表达水平上都出现了活性形式的Caspases。NB4细胞中Survivin、C-myc、Bcl-2的基因表达水平都显著降低,突变型p53蛋白在细胞内的量同样显著下降;HL-60细胞的C-myc表达水平显著降低,但Survivin、Bcl-2表达水平无明显变化。结论 As₂O₃能在药物临床浓度范围内有效抑制急性早幼粒白血病细胞HL-60、NB4的细胞增殖, 但方式不同;1.5μmol/L浓度的As₂O₃对NB4细胞生长的抑制体现在诱导细胞分化并诱导细胞凋亡,对HL-60细胞生长的抑制只体现在诱导细胞分化。HL-60细胞中高表达的Survivin、Bcl-2抑制了细胞的凋亡。NB4、HL-60细胞株中P53基因的细胞遗传学变异的不同可能是As₂O₃对这两种细胞增殖抑制机制差异的主要原因之一。     

一贯煎对CCl4诱导肝纤维化大鼠肝细胞凋亡及其调控基因表达的影响

目的:研究一贯煎对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝细胞凋亡及其调控基因表达的影响。方法:用50%CCl4橄榄油溶液(1 ml/kg)大鼠腹腔注射造模,每周2次,共9w。于造模3w和6w末,随机抽取正常及模型大鼠处死作动态观察。从第7w始模型大鼠随机分为模型对照组和药物干预组,药物干预组给予一贯煎灌胃,共计3w。9w末检测肝组织Fas、Bax、Bcl-xL、细胞色素(Cyt)C、Caspase-12、Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡情况。结果:①与正常组大鼠比较,3w、6w及9w时模型大鼠肝组织Fas、Bax和Caspase-12蛋白表达逐渐升高(P<0.05,P<0.01)。与9w模型组比较,一贯煎组Fas、Bax和Caspase-12蛋白表达显著降低(P<0.01),而Cyt C和Bcl-xl蛋白表达在各组之间无显著差异(P>0.05)。②与正常组比较,造模3w时肝组织Caspase-3蛋白表达达到高峰(P<0.01),肝细胞凋亡数量亦达到高峰;6w、9w模型组大鼠Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡较3w有降低的趋势。与9w模型组大鼠比较,一贯煎组大鼠Caspase-3蛋白表达显著降低,肝细胞凋亡显著减少。结论:一贯煎抑制CCl4诱导大鼠肝纤维化肝细胞凋亡的作用机制可能与干预Fas和内质网凋亡通路有关。     

海藻色素糖蛋白对肝癌细胞Caspase-3和Bax蛋白表达影响

目的研究麒麟菜海藻色素糖蛋白(SPG)对肝癌细胞Caspase-3和Bax蛋白表达的影响。方法将50只皮下接种H22肝癌细胞株的小鼠随机分为5组,每组10只。高、中、低剂量SPG组分别每天经口灌胃给予100、50、10 mg/kg的SPG,灌胃体积0.5 mL;肿瘤对照组灌胃给予等体积生理盐水;环磷酰胺组隔天腹腔注射环磷酰胺20 mg/kg,连续10 d。于末次给药后第2天将全部小鼠处死,取肝癌组织,用MTT法测定各组肝癌细胞增殖活性,免疫组织化学法检测Caspase-3和Bax蛋白表达水平。结果中、高剂量SPG组Caspase-3和Bax蛋白阳性表达率高于肿瘤对照组,肝癌细胞增殖活性明显低于肿瘤对照组,差异均有显著性(F=344.264～19 266.181,q=14.88～185.56,P<0.05)。结论 SPG可促进肝癌细胞Caspase-3和Bax蛋白表达,进而诱发肝癌细胞凋亡。     

薤白总皂苷对人宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响

目的观察薤白总皂苷对宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响,并探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度的薤白总皂苷(25、50、100、250、500、1000μg/ml)于不同作用时间(24、48、72 h)处理宫颈癌HeLa细胞后,采用MTT法检测不同浓度的薤白总皂苷在不同作用时间下对HeLa细胞增殖率的影响;用100和200μg/ml的薤白总皂苷处理宫颈癌HeLa细胞48 h后,Annexin V-FITC/PI染色测定细胞凋亡率,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测HeLa细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果薤白总皂苷对HeLa细胞的生长抑制作用呈明显的时间一剂量依赖性;薤白总皂苷(100和200μ/ml)处理能显著降低HeLa细胞线粒体膜电位,抑制HeILa细胞增殖,促进其凋亡(P<0.05,P<0.01);上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性(P<0.05,P<0.01)。结论薤白总皂苷有显著的抑制HeLa细胞增殖和诱导凋亡作用,其作用机制可能与其降低HeLa细胞线粒体膜电位,上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性有关。