褐藻胶对肝豆状核变性小鼠肝脏的保护作用机制研究

[摘要] 目的：研究褐藻胶对肝豆状核变性（HLD）小鼠肝脏的保护作用机制。方法：健康雄性昆明小鼠，应用铜负荷饮食法建立HLD模型。治疗组每天给予褐藻胶灌胃，对照组动物同步给予等体积的生理盐水灌胃，每日1次，连续4周。电感耦合等离子体质谱法检测尿铜含量；生化法检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性、血清总蛋白和白蛋白含量；HE染色观察肝细胞病理变化；Masson染色观察肝纤维化程度；TUNEL检测肝细胞凋亡；免疫组化检测肝细胞铜蓝蛋白（CER）表达水平。结果：经褐藻胶治疗后，高剂量组小鼠的尿铜含量较模型组显著降低（P<0.05），血清ALT、AST活性较模型组显著降低（P<0.05）。肝细胞变性指数、肝纤维化程度和凋亡细胞指数较模型组均显著减少（P<0.05），肝细胞CER表达水平较模型组显著升高（P<0.05）。结论：褐藻胶可能通过增强肝细胞CER的表达和促进Cu2+的排泄，减轻肝细胞变性凋亡和肝纤维化损害，改善HLD小鼠的肝功能。     

补阳还五汤对大鼠化疗相关外周神经痛的预防作用及其机制

目的观察补阳还五汤对紫杉醇诱导的大鼠外周神经痛的预防作用,并以脊髓大麻素受体为主要靶点,探讨其作用机制。方法将50只SD大鼠随机分为对照组、模型组、预防组、AM630组、AM251组,每组10只。除对照组外,其余各组于实验第1,3,5,7天分别腹腔注射紫杉醇2 mg/kg;预防组在建模的同时每天予补阳还五汤2.5 g/(kg·d)灌胃干预14 d;AM630组在预防组的基础上于每天灌胃前予3 mg/kg大麻素Ⅱ型受体(CBR2)阻滞剂AM630腹腔注射;AM251组在预防组的基础上于每天灌胃前予1.5 mg/kg大麻素Ⅰ型受体(CBR1)阻滞剂AM251腹腔注射。每7 d记录1次各组大鼠体质量,并使用von fery纤维丝测试各组大鼠机械缩足阈值(MWT),共观察28 d;实验观察28 d后使用RT-PCR检测各组大鼠脊髓组织中CBR1、CBR2、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达水平。结果实验第7,14,21,28天,各组大鼠体质量增量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。模型组实验第7,14,21,28天的MWT均显著低于同期对照组(P均<0.05);预防组、AM251组实验第14,21,28天的MWT均显著高于同期模型组(P均<0.05),但AM630组与模型组比较、预防组与AM251组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。模型组CBR2、CBR1、GFAP mRNA表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),IL-1β、TNF-αmRNA表达水平明显高于对照组(P均<0.05);预防组和AM251组CBR2 mRNA表达水平明显高于模型组(P均<0.05),IL-1β、TNF-αmRNA表达水平均明显低于模型组(P均<0.05);AM630组与模型组比较、预防组与AM251组比较各相关蛋白mRNA表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论补阳还五汤可以预防紫杉醇诱导的外周神经痛,机制可能与其激活脊髓CBR2,并进一步抑制脊髓IL-1β、TNF-α等炎症细胞因子的表达有关。     

脑缺血后神经细胞黏附分子和生长相关蛋白-43的表达与神经功能恢复的关系

目的 观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞黏附分子-43（NCAM）和生长相关蛋白（GAP-43）基因表达在神经功能恢复过程中的作用。方法 应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）再灌注模型。采用Bederson神经功能评分法评价脑缺血90min再灌注2h、12h、1d、2d、3d、7d和14d等时间点大鼠神经功能情况，采用原位杂交技术检测NCAM mRNA和GAP-43 mRNA的表达。结果 大鼠脑缺血再灌注后，神经功能评分于再灌注2d开始降低，神经功能逐渐恢复。在皮质区和纹状体区，脑缺血侧GAP-43 mRNA表达于再灌注12h和2d出现峰值，以后逐渐降低，至14d恢复至假手术组水平。皮质区NCAM mRNA的表达于再灌注2h后开始增强，12h后达高峰；纹状体区NCAM mRNA的表达于再灌注后2h时开始增强，1d后达高峰，以后逐渐减少，14d降至基础水平。结论 脑缺血再灌注后，NCAM的表达可能参与了脑细胞的修复过程，GAP-43 mRNA的表达增强可能与损伤神经的功能恢复有关。     

运动训练对大鼠脑缺血再灌注后肢体功能恢复及微管相关蛋白含量的影响

目的　研究运动训练对局部脑缺血再灌注大鼠的肢体功能恢复是否具有促进作用 ,并同时从分子角度探讨其相关机制。方法　将大鼠随机分为运动组、对照组、假手术组及正常对照组 ,采用线栓法制作Wistar大鼠大脑中动脉闭塞 (middlecerebralarteryocclusion ,MCAO)再灌注模型。运动组大鼠术后每天进行游泳训练 ,采用前肢放置实验及平衡实验观察各组大鼠肢体功能恢复情况 ,并同时采用免疫组化法观察脑缺血周边区微管相关蛋白 2 (MAP 2 )的免疫活性强度。结果　大鼠局部脑缺血再灌注后 ,运动组大鼠前肢放置实验评分及平衡实验评分均优于对照组 ,运动组大鼠前肢放置实验评分在术后第 9,11,13 ,15,17,19,2 1,2 3及 2 5天时 ,较对照组差异均有极显著性意义 (P均 <0 .0 1) ;平衡实验评分在第 7,9,11,13 ,17及 19天时较对照组差异均有显著性意义 (P <0 .0 1或 0 .0 5) ;运动组大鼠皮层缺血周边区MAP 2表达水平亦高于对照组 ,在术后第 14 ,2 8天时较对照组差异具有显著性意义 (P均 <0 .0 5)。结论　运动训练能促进缺血再灌注大鼠的肢体功能恢复 ,其相关机制可能与上调缺血周边区MAP 2的表达有关     

肌苷对大鼠脑缺血再灌注后血管内皮生长因子表达的影响

背景肌苷参与机体多方面的代谢过程,对缺血性脑损伤具有一定的保护作用,但其机制还没有彻底阐明.目的研究肌苷对大鼠脑缺血再灌注后血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)表达的影响,探讨肌苷的神经保护作用机制.设计随机对照的实验研究.地点和材料本实验在青岛大学医学院脑血管病研究所和山东省脑血管病防治重点实验室完成.成年健康雌性SD大鼠68只,体质量230～270 g,清洁级,由中国科学院上海实验动物中心提供.干预措施成年健康雌性SD大鼠68只,应用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,随机分为治疗组32只和对照组32只,每组再随机分为缺血1.5 h再灌流2,6,12,24 h,2,3,7,14 d组(n=4),另外4只作假手术组.应用免疫组织化学方法检测脑缺血再灌流后脑组织VEGF的表达.结果假手术组脑组织未见VEGF阳性表达.对照组在皮层区和纹状体区VEGF在脑缺血再灌注2 h开始表达,12 h达高峰,持续24 h,随即迅速降低.VEGF阳性细胞主要位于Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ层神经元和血管内皮细胞,尤其神经细胞核周细胞浆和树突染色最深.肌苷治疗组VEGF表达于缺血再灌注2 h～2 d较对照组显著增高,经统计学处理,差异有非常显著性意义(t=3.78～22.62,P＜0.01).结论肌苷可上调脑缺血再灌注后VEGF的表达,可能是其缺血后神经保护作用的机制之一.     

运动训练对大鼠脑梗死后肢体功能和GAP-43、MAP-2表达水平的影响

目的:研究运动训练能否促进大鼠局部脑缺血再灌注后的功能恢复并从神经可塑性角度探讨其机理。方法:线栓法制作Wistar大鼠大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO)模型,随机分为运动组、对照组、假手术组及正常组,运动组术后24h起每天游泳10min,采用行为测试试验评分观察肢体功能恢复情况,免疫组化法观察脑缺血周边区生长相关蛋白-43(GAP-43)和微管相关蛋白-2(MAP-2)的免疫活性强度。结果:大鼠局部脑缺血再灌注后,运动组前肢放置试验和平衡试验评分优于对照组,前肢放置试验在第9、11、13、15、17、19、21、23、25天差异具有显著性(P均<0.01),平衡试验在第7、9、11、13、17、19天差异具有显著性(P<0.01—0.05)。运动组皮层缺血周边区GAP-43和MAP-2表达水平高于对照组,前者在第7天、14天、28天差异有显著性(P<0.05),后者在第14天、28天差异有显著性(P<0.05)。结论:运动训练能促进大鼠MCAO后的肢体功能恢复,其机制可能与缺血周边区GAP-43和MAP-2的表达上调有关。     

肌苷对大鼠脑缺血再灌注后血管内皮生长因子表达的影响

背景：肌苷参与机体多方面的代谢过程，对缺血性脑损伤具有一定的保护作用，但其机制还没有彻底阐明。目的：研究肌苷对大鼠脑缺血再灌注后血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)表达的影响，探讨肌苷的神经保护作用机制。设计：随机对照的实验研究。地点和材料：本实验在青岛大学医学院脑血管病研究所和山东省脑血管病防治重点实验室完成。成年健康雌性SD大鼠68只，体质量230～270g，清洁级，由中国科学院上海实验动物中心提供。干预措施：成年健康雌性SD大鼠68只，应用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型，随机分为治疗组32只和对照组32只，每组再随机分为缺血1．5h再灌流2，6，12，24h，2，3，7，14d组(n=4)，另外4只作假手术组。应用免疫组织化学方法检测脑缺血再灌流后脑组织VEGF的表达。结果：假手术组脑组织未见VEGF阳性表达。对照组在皮层区和纹状体区VEGF在脑缺血再灌注2h开始表达，12h达高峰，持续24h，随即迅速降低。VEGF阳性细胞主要位于Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ层神经元和血管内皮细胞，尤其神经细胞核周细胞浆和树突染色最深。肌苷治疗组VEGF表达于缺血再灌注2h～2d较对照组显著增高，经统计学处理，差异有非常显著性意义(t=3．78～22．62，P＜0．01)。结论：肌苷可上调脑缺血再灌注后VEGF的表达，可能是其缺血后神经保护作用的机制之一。     

红光激光对内皮细胞一氧化氮分泌及表达的影响

目的研究红光激光对血管内皮细胞一氧化氮（NO）分泌及表达的影响。方法应用红光激光分别照射体外培养的血管内皮细胞10min、20min和30min后，分别于照射后15min、30min、1h、3h和6h检测培养上清液中NO的含量，并应用免疫组化方法检测内皮细胞内诱生型一氧化氮合酶（iNOS）和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达。结果2mW红光激光分别照射10min、20min、30min可使内皮细胞内eNOS表达增强，分泌NO水平上升，并于1h后达峰值，随后逐渐降低，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），其中照射30min组作用最明显；红光激光照射对内皮细胞内iNOS的表达各组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论红光激光可通过增强内皮细胞内eNOS的表达来促进NO的分泌；红光激光对内皮细胞内iNOS的表达无明显影响。     

碱性成纤维细胞生长因子对脑缺血再灌注后功能恢复的影响

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF) 对大鼠局部脑缺血再灌注后神经功能恢复的影响和机理。方法：应用线栓法制作Wistar大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型（MCAO），采用行为测试评分离缺血MCAO后的功能恢复情况。结果：脑缺血MCAO后1d大鼠患肢感觉运动功能降至最低点，随时间延长功能逐渐恢复，功能恢复曲线在术后约5d陡直上升，以后缓慢上升，至第27d仍未达到正常水平。脑室注射bFGF各时间点行为功能恢复水平高于自然恢复组。前肢试验的恢复高峰在术后第9d，前，后肢放置试验到27d与对照组比较差异无统计学意义。后肢试验与平衡木试验在4周末显示了第2个恢复高峰。结论：脑缺血MCAO后肢体功能有自然恢复的趋势，外源性bFGF能促使脑缺血MCAO后的肢体功能恢复。     

肾血管性高血压大鼠模型的建立和评测

背景：建立一种有效并简便可靠的高血压动物模型，对研究高血压的机制和治疗有重要的意义。目前，国内外常利用犬、大鼠、兔等实验制作高血压动物模型，其中肾动脉狭窄性高血压模型由于简便可靠被广泛应用于人类高血压及其并发症的研究。 目的：建立简便、可靠的大鼠实验性肾动脉狭窄性高血压模型。 设计：随机分组设计、动物实验。单位：青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所。 材料：实验于2005-09／2006-02在山东省脑病防治重点实验室完成。选择健康Wistar大鼠81只，随机数字表法分为单侧肾动脉狭窄组18只，双侧肾动脉狭窄组17只，单侧肾动脉结扎组15只，双侧肾动脉结扎组15只，单侧肾动脉狭窄假手术组6只，双侧肾动脉狭窄假手术组4只，正常对照组6只。 方法：单侧肾动脉狭窄组，微型银夹夹闭右侧肾动脉，12d后手术切除左侧肾脏。双侧肾动脉狭窄组，微型银夹夹闭右侧肾动脉，12d后左侧做同样处理。单侧肾动脉结扎组，丝线结扎右侧肾动脉，12d后手术切除左侧肾脏。双侧肾动脉结扎组，丝线结扎右侧肾动脉，12d后左侧做同样处理。单侧肾动脉狭窄假手术组，手术暴露右侧肾脏，不做处理放回原位。12d后切除左侧肾脏。双侧肾动脉狭窄假手术组，手术暴露右侧肾脏，不做处理放回原位，12d后左侧做同样处理。正常对照组6只，不作任何处理。应用RBP-2大鼠血压计测量鼠尾血压和心率。 主要观察指标：造模成功率、大鼠血压、心率。结果：纳入动物81只，死亡61只，均进入结果分析。①血压：单侧肾动脉狭窄组、双侧肾动脉狭窄组、双侧肾动脉结扎组血压明显高于正常对照组、双侧肾动脉狭窄假手术组[分别为（138．0&;#177;36．5）,（154．2&;#177;11．6），（160．5&;#177;0．7），（101．3&;#177;17．6），（108．3&;#177;5．7）mmHg]。②心率：各肾动脉狭窄组动物心率变化不稳定，单侧肾动脉狭窄组、双侧肾动脉狭窄组、双侧肾动脉结扎组、正常对照组、双侧肾动脉狭窄假手术组分别为[（367．5&;#177;47．2），（420．2&;#177;47．8），（386．0&;#177;4．2），（390．3&;#177;42．4），（417．3&;#177;27．5）次／min]。（参存活率：肾动脉狭窄组存活率（单侧22％，双侧29％）显著高于肾动脉结扎组（单侧0，双侧12％），以双侧肾动脉狭窄组存活率最高。 结论：双侧肾动脉夹闭法可建立稳定的肾动脉狭窄性高血压大鼠模型。