甲型H1N1流感病毒感染小鼠的发病机制

目的 甲型H1N1 流感病毒A/California/7/2009感染BALB/c小鼠,研究甲型H1N1流感病毒病毒性肺炎发病机制.方法 4～6 周龄雌性BALB/c 小鼠60只,随机分为2组,实验组和对照组,每组30只.CA7 流感病毒滴鼻制备甲流病毒感染小鼠模型.攻毒后第5天解剖实验和对照组小鼠,取肺组织,测定肺组织中IL-2,IL-6,TNF-α含量.结果 结果实验组肺组织中IL-6,TNF-α,水平明显高于对照组,IL-2水平明显低于对照组,差异均有显著性(P<0.05).结论 IL-6、TNF-α、IL-2这3种细胞因子在感染甲流病毒后的显著性变化与病毒感染后的肺组织病理损伤有密切的关系.     

不同品系小鼠感染甲型流感病毒肺小血管内血栓形成

目的本实验旨在观察不同品系小鼠感染甲型流感病毒后肺组织内血栓形成的情况。方法使用H1N1病毒A/California/7/2009(CA7)株和H3N2病毒A/Brisbane/10/07株,对BALB/C小鼠、Scid小鼠、NOD/LTJ小鼠、BALB/C-nu小鼠、NOD-Scid小鼠和icosl-KO小鼠经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒。检测小鼠感染后肺组织病毒拷贝数并观察肺组织病理学改变。结果 H1N1和H3N2滴鼻攻毒的各组小鼠均染毒,病理表现为程度略有差异的间质性肺炎。13只H1N1病毒感染小鼠和6只H3N2感染小鼠在肺组织中观察到多个小血管内有血栓形成,血栓成分主要为纤维素和血小板。结论各品系小鼠感染H1N1和H3N2流感病毒后均可能出现肺组织内血栓形成。     

H7N9禽流感病毒小鼠感染动物模型的建立

目的 建立H7N9小鼠感染动物模型。方法 1?08,1?07或1?06 TCID50H7N9禽流感病毒原液（A/Anhui/1/2013）滴鼻感染BALB/c小鼠。主要观测指标：临床症状、死亡率、病理变化、病毒载量和血清抗体检测。结果 被感染的小鼠表现为竖毛、弓背、体重下降;病理表现为间质性肺炎,感染后第2天开始在呼吸道脱落细胞中检测到病毒;免疫组化或病毒分离方法在肺、肾、脑、肠、脾等组织检测到病毒;感染后14d在小鼠血清中血凝抑制试验特异性抗体效价达到160;淋巴细胞减少,单核细胞增多。结论 H7N9感染BALB/c小鼠模型与人类禽流感感染疾病的基本特征相似,为研究该病的发病机制及药物疫苗的研发提供了工作基础。     

甲型H1N1流感病毒感染不同免疫缺陷小鼠的比较

目的宿主免疫系统的功能状态在病毒的感染中起着至关重要的作用,本实验观察了不同免疫缺陷小鼠感染甲型H1N1流感病毒的差异。方法使用六个品系的近交系小鼠,经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒,分析其在病毒感染后存活率、体重变化和肺组织病理改变的异同。结果感染H1N1病毒的6种小鼠在观察的14 d内,野生型的C57BL/6小鼠感染开始体重缓慢下降,感染后期有所回升,有半数存活;BALB/c小鼠和四种免疫缺陷品系小鼠感染病毒后体重随病情发展快速下降,死亡率均为100%。野生型C57BL/6小鼠感染初期为较弥漫的间质性肺炎,后期病变逐渐局限;BALB/c小鼠和四种免疫缺陷品系小鼠感染病毒后出现弥漫的中重度间质性肺炎,细支气管上皮有变性坏死,但炎症细胞明显少于C57BL/6小鼠。结论在甲型H1N1流感病毒的初次感染中固有免疫和特异性免疫分别在感染的初期和后期起主要作用,宿主免疫系统的功能状态影响着甲型H1N1病毒感染和预后。     

禽流感H5N1亚型病毒感染BALB/c小鼠的疾病动物模型

【目的】建立H5N1禽流感病毒感染BALB/c小鼠的疾病动物模型。【方法】将100μLH5N1禽流感病毒原液(ELD50为10-9/0.2mL)鼻腔接种BALB/c小鼠,设正常尿囊液组对照,接毒后14d内每隔24h观察一次,主要观测指标有:临床症状、体质量和体温变化、死亡率、病理变化、病毒分离。【结果】被感染的BALB/c小鼠的病程可以划分为前驱期(1～2d)、发作期(第3～7天)、恢复期(第8～14天),发作期接毒小鼠出现各种严重的临床症状,表现出极度消瘦,触之发凉,闭目,鼠尾苍白,出现大批死亡;接毒后第1d体温开始下降,第3～7天体温低于34℃,第8天体温开始缓慢恢复;接毒后第1天体质量开始下降,第6天体质量停止下降,开始缓慢增加;接毒组BALB/c小鼠累计的死亡率为73%;发作期接毒BALB/c小鼠病变最严重,小鼠各个脏器(肺、脑、心、肝、肾)出血、淤血、水肿、坏死等病理改变严重,同时伴有大量炎性细胞浸润,;接毒后可在小鼠的肺、心、肝、脾分离到病毒。【结论】本实验室建立的H5N1禽流感病毒感染BALB/c小鼠的模型在临床症状、体质量变化、死亡率、病理变化、病毒复制指标能达到禽流感病毒疾病模型的造模要求,...     

雪貂感染流感病毒H3N2动物模型的建立

目的建立甲型流感病毒H3N2感染的雪貂动物模型。方法按实验要求筛选出流感抗体反应阴性的雪貂,经兽用氯胺酮轻度麻醉后进行滴鼻感染H3N2流感病毒株A/Brisbane/10/07,设立两个稀释度106和107 TCID50,每个稀释度接种3只雪貂,感染后第5天安乐处死。感染前采集鼻甲骨活检,感染后1～5 d鼻甲骨活检检测病毒载量,每天记录雪貂一般临床变化。处死时取雪貂肺、肝、脾、小肠、脑组织作病毒滴度检测,肺组织做病理检查。结果 106和107TCID50的H3N2病毒分别感染雪貂,没有雪貂死亡。雪貂感染后都出现一过性的体温升高,体重的下降,流涕、打喷嚏等症状。在鼻甲骨活检物中可测到病毒载量,肠组织可分离到病毒。肺组织以轻度性间质性肺炎为主要病理变化。结论雪貂感染H3N2病毒株A/Brisbane/10/07后,临床表现、病毒学、分子生物学、病理学方面的检测都可以证实雪貂感染H3N2病毒动物模型已建立,其中106 TCID50病毒滴度的是一个建立感染动物模型比较合适的剂量。     

PB2 E627K对A/H6N1亚型禽流感病毒的致病性的影响分析

目的 本研究利用A/H6N1亚型禽流感病毒的反向遗传平台,评估PB2 E627K对A/H6N1亚型禽流感病毒的致病性,探究A/H6N1流感病毒的致病性分子基础。方法 通过A/H6N1亚型禽流感病毒A/Mallard/SanJiang/275/2007株反向遗传操作系统和点突变技术拯救病毒rA/H6N1和PB2 E627K位点发生突变的 rA/H6N1-627,两株拯救病毒分别以101EID50~106EID50的攻毒剂量人工感染BALB/c小鼠,通过体重变化、死亡率、病毒滴定等方面进行致病性分析。结果 成功构建A/H6N1亚型禽流感病毒的反向遗传平台,rA/H6N1的8个基因片段完全源于A/H6N1的基因组,核苷酸序列及生物学特性与A/H6N1完全一致。rA/H6N1能够人工感染BALB/c小鼠,但不致死,对BALB/c小鼠呈现低致病性(MLD50>106.5EID50),病毒在小鼠体内的分布情况及各个脏器中的病毒滴度与A/H6N1保持一致; rA/H6N1-627能感染小鼠,引起小鼠体重下降,但不能引起所有106EID50组小鼠死亡,病毒能在小鼠的肺脏和脑部进行增殖。结论 实验结果表明,在H5N1禽流感中发挥重要作用的PB2-E627K位点并非A/H6N1流感病毒的毒力决定因子。A/H6N1流感病毒致病性的分子基础还有待继续研究,该反向遗传操作系统和点突变技术的建立为研究该亚型流感病毒致病机制、传播机制及病毒基因功能奠定了基础,同时也为A/H6N1亚型禽流感病毒新型疫苗的研制开辟了新途径。     

H1N1流感与H7N9禽流感感染BALB/c小鼠发病特点初步研究

目的本实验旨在初步探讨A/Shanghai/4664T(H7N9)和A/Puerto Rico/8/34(H1N1)病毒感染BALB/c小鼠的发病特点,为H7N9致病机制与防治的研究提供数据支持。方法将同等剂量(5×103TCID50)流感病毒滴鼻感染BALB/c小鼠,分析其在感染后体重、肺指数、病毒载量和肺组织病理的变化情况。结果 H1N1PR8感染组和H7N9感染组小鼠在7 d内体重均持续减低,H1N1 PR8组较H7N9组降低更为明显;在感染后3 d H7N9组与PBS组肺指数无显著差异(P0.05),但感染后7d H7N9组与PBS组相比显著增高(P0.05);H1N1PR8组比H7N9组感染后3 d肺指数显著增高(P0.05),但感染后第7天无显著差异(P0.05)。H1N1 PR8组和H7N9组病毒载量在感染后第3天均显著升高,但两组无显著差异;第7天两组病毒载量均有所降低,但H7N9组病毒载量显著高于H1N1 PR8组(P0.05)。H1N1 PR8在感染后3 d主要病理变化为炎症细胞浸润和水肿,而H7N9组主要轻度炎症细胞浸润;在感染后7 dH1N1 PR8组可见大量炎症细胞浸润,出现大面积肺水肿;H7N9组表现为大量炎症细胞浸润。结论 H7N9和H1N1 PR8感染BALB/c小鼠均可发病,但发病特点有所差异,H7N9病毒对鼠的适应性比H1N1 PR8差。     

建立H5N1流感病毒感染雪貂动物模型

目的建立甲型H5N1流感病毒感染雪貂动物模型[1-3]。方法 H5N1流感病毒株A/Vietnam/1203/2004病毒以103和104 TCID50滴度分别感染雪貂。对4～10月龄去势雪貂经兽用氯胺酮轻度麻醉后进行滴鼻感染,每个稀释度接种3只雪貂,感染后第5天安乐处死。感染后每天记录雪貂一般临床变化。感染前0 d采集鼻甲骨活检,感染后1～5 d鼻甲骨活检检测病毒载量和病毒滴度。处死时取雪貂气管、肺、心、肝、脾、肾、小肠、脑组织作病毒滴度检测和病理检查。结果 H5N1103和104 TCID50的病毒分别感染雪貂,雪貂死亡都率在33%。103TCID50和104 TCID50病毒分别感染雪貂,动物都出现持续3 d体温升高,104 TCID50组出现超过20%的体重下降。上呼吸道排毒呈现上升趋势,并可在除呼吸系统以外的组织器官中分离到病毒。感染的雪貂病理表现为重度肺炎。结论雪貂感染H5N1病毒株后在临床表现、病毒学、分子生物学、病理学方面的检测都可以证实雪貂感染H5N1病毒动物模型已建立,104 TCID50病毒滴度是一个建立感染动物模型比较合适的剂量。     

小鼠在柯萨奇病毒A组16型活病毒免疫原性评价中的应用

目的 评价小鼠在柯萨奇病毒A组16型(CA16)活病毒感染中免疫原性的应用,为减毒活疫苗研究提供实验数据.方法 以不同剂量的CA16活病毒通过皮下、腹腔和肌肉途径接种不同年龄的ICR和BALB/c小鼠,采集初次免疫7d、21d、28d以及加强免疫7d后的血样;通过微量细胞病变中和法检测中和抗体效价,细胞因子ELISA检测试剂盒检测6种细胞因子含量.结果 初次免疫后28 d,肌肉、腹腔和皮下途径免疫的小鼠血清抗体阳转率分别为83.33％、40.00％和0.00％,抗体几何平均效价(GMT)分别为1∶169、1∶32和0;加强免疫后,肌肉、腹腔和皮下途径免疫的小鼠血清抗体阳转率均达100％,抗体GMT分别为1∶813、1∶609和1∶32,肌肉和腹腔途径免疫的小鼠血清抗体GMT平均增长4.8倍和19.0倍;加强免疫7d的抗体阳转率达100％;明显高于初次免疫28 d和21 d;BALB/c小鼠与ICR小鼠相比,前者的中和抗体效价和抗体阳转率明显高于后者,而小鼠年龄对中和抗体效价和抗体阳转率的影响不显著(P＞0.05);免疫剂量对中和抗体效价和抗体阳转率的影响显著(P＜.05),高剂量病毒免疫小鼠后中和抗体效价和抗体阳转率明显比低剂量高(P＜0.05);细胞因子检测结果显示加强免疫7d后的白细胞介素10(IL-10)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量与初次免疫7d的相比显著增加.结论 BALB/c和ICR小鼠可做为CA16活病毒免疫原性评价的动物模型,以4～6周龄的BALB/c小鼠最为敏感.     

Effect of aluminum hydroxide adjuvant on the immunogenicity of the 2009 pandemic influenza A/H1N1 vaccine: multi-level modeling of data with repeated measures

Objective To evaluate the effect of the aluminum hydroxide (AI-OH) adjuvant on the 2009 pandemic influenza A/H1N1 (pH1N1) vaccine.Methods In a multicenter,double-blind,randomized,placebo-controlled trial,participants received two doses of split-virion formulation containing 15 μg hemagglutinin antigen,with or without aluminum hydroxide (AI-OH).We classified the participants into six age categories (＞61 years,41-60 years,19-40 years,13-18 years,8-12 years,and 3-7 years) and obtained four blood samples from each participant on days O,21,35,and 42 following the first dose of immunization.We assessed vaccine immunogenicity by measuring the geometric mean titer (GMT) of hemagglutination inhibiting antibody.We used a two-level model to evaluate the fixed effect of aluminum AI-OH and other factors,accounting for repeated measures.Results The predictions of repeated measurement on GMTs of formulations with or without AI-OH,were 80.35 and 112.72,respectively.AI-OH significantly reduced immunogenicity after controlling for time post immunization,age-group and gender.Conclusion The AI-OH adjuvant does not increase but actually reduces the immunogenicity of the split-virion pH1N1 vaccine.     

江门市新会区居民甲型H1N1流感病毒抗体水平调查

目的了解新会区居民对甲型H1N1流感的免疫水平。方法采用多阶段分层随机抽样方法,三次分别在新会区的城镇和农村对不同年龄人群进行问卷调查并采集血清检测甲型H1N1流感病毒抗体。结果三轮调查共抽样480人,抗体阳性107人,阳性率为22.29%。不同年龄组中4~6和7~19岁阳性率分别为30.00%和31.77%,高于其他年龄组（χ2=26.75,P〈0.05）。疫苗接种组抗体阳性率高于未接种疫苗组。有症状和无症状者的抗体阳性分别为25.72%和18.83%,差异无统计学意义（χ2=3.47,P〉0.05）,抗体阳性者中42.06%没有出现过任何流感症状。结论新会区已经有22.29%人群具有甲型H1N1流感病毒抗体,人群中已经建立一定的免疫屏障。     

解读GB/T1.1-2009《标准化工作导则》与2000版的标准内容差别

学习了GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》,针对修改和增删的内容与2000版作了分析和对比,目的是提供给广大标准化工作者参考,希望能起到学习提速的作用。     

广州市荔湾区2009年首起职业学校甲型H1N1流感暴发疫情流行病学分析

目的分析广州市荔湾区首起职业学校甲型H1N1流感暴发疫情的流行病学特征,评估防控措施,为控制学校甲型H1N1流感暴发疫情提供科学依据。方法按照《甲型H1N1流感监测方案(第一版)》附录的甲型H1N1流感病例个案调查表,对每1病例进行现场流行病学调查;对发病3d内的现症患者采集咽拭子标本,送广州市疾病预防控制中心进行甲型H1N1流感病毒核酸检测;对密切接触者进行7d的医学观察。结果疫情持续7d,共确诊36例病例,罹患率为1.68%;男女性别比0.5∶1;住宿生走读生比3.5∶1。结论此次疫情为广州市荔湾区首起职业学校甲型H1N1流感暴发疫情,感染来源为社区。及时隔离病例以及规范对密切接触者的管理是控制甲型H1N1流感疫情的有效措施。     

21例危/重症甲型H1N1(2009)流感患者临床特征治疗及转归

目的探讨危/重症甲型H1N1流感的临床特征、治疗和转归情况。方法设计调查表,了解安徽医科大学第一附属医院甲流专病病房21例危/重症甲型H1N1流感病例（研究组）的人口学特征、临床症状和体征、实验室检测、治疗及转归,同时使用曹彬等关于中国2009大流行甲型流感（H1N1）病毒感染最初病例的研究样本作为对照,其中危/重症诊断按照卫生部颁布的诊断标准进行,对不同时间点的相关指标也进行比较分析,采用SPSS17.0软件进行统计学分析。结果两组间性别、年龄分布差异无统计学意义,研究组发热持续时间较长,肝功能不良事件发生率也明显高于对照组（P〈0.01）;研究组入院时高热、咳嗽、咳痰、疲乏、腹泻/腹痛、呼吸困难、咽充血、扁桃体肿大发生率均明显高于对照组（P〈0.05）;与对照组相比,研究组更容易出现白细胞升高（P〈0.01）及C反应蛋白升高（P〈0.01）,血清CK、CK-MB、LDH、ALT、AST以及胸部X线检查异常均明显增加（P〈0.05）,血清钾、血清钠也较对照组低（P〈0.05）;随治疗时间延长,患者氧分压有所升高、心率降低、血小板增加;痊愈出院20例,死亡1例。结论危/重症甲型H1N1流感病例与普通感染者有较大差异,体温高、热期长,容易出现多器官系统损害及继发感染,经良好治疗,大多数可以痊愈。     

实时RT-PCR方法和快速抗原检测方法(Dot-Elisa)检测甲型流感的比较

目的探讨实时逆转录聚合酶链扩增反应（real-time RT-PCR）和快速抗原检测方法（Dot-Elisa）在检测甲型流感中的应用。方法随机选择2009年5～10月在我院门诊就诊的318例流感样症状病例,采集咽拭子标本。采用real-time RT-PCR和Dot-Elisa同时检测咽拭子标本的甲型流感病毒核酸或甲型流感病毒抗原。结果在318例流感样病例中,real-time RT-PCR方法检测152例（47.8%）为甲型流感患者,其中118例（37.1%）为甲型H1N1流感（2009）,34例（10.7%）为普通甲型流感。快速抗原检测方法检测113例患者为甲型流感患者。与real-time RT-PCR方法比较,快速抗原检测方法检测甲型流感的敏感性为61.8%,特异性为88.5%,阳性预测值PPV为83.2%,阴性预测值为71.7%,总符合率为75.8%,一致性KAPPA检验κ=0.509（P〈0.01）。采用两种不同方法检测甲型流感阳性率的差异不受患者病程、年龄的影响（P均﹥0.05）。Ct值≤35的标本其抗原阳性检测率大于Ct值在35～37之间的抗原阳性率（U=0.00,P〈0.01）。结论快速抗原检测方法检测甲型流感的敏感性低于real-timeRT-PCR方法,其敏感性可能受标本的病毒量影响。     

甲型H1N1流感病毒在季流病毒、禽流感病毒共感染时变异可能性的验证

目的 甲型H1N1流感病毒A/California/7/2009分别与A/Brisbane/10/07和A/ShenZhen/406H/06共感染小型香猪,预测甲流病毒在与季流H3N2病毒/甲流病毒与禽流感病毒共感染时是否会发生变异.方法 分别将A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2),A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)对5～6月龄小型猪共感染,小型猪经复方氯胺酮0.1 mL/kg麻醉后进行滴鼻感染,感染后第5天安乐死动物,取动物肺组织作病毒测序分析.结果 A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2)共感染后,A/California/7/2009病毒PB1基因993位G→A突变,PA基因1659位G→A突变,没有氨基酸的变异.A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)共感染后A/California/7/2009病毒PB2基因1711位T→C突变.碱基的突变未引起氨基酸的变异.结论 A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2),A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)共感染后在猪的体内没有发生病毒重组、变异.     

2009年新型甲型H1N1流感流行特征及防控措施

自2009年3月墨西哥发现首例甲型H1N1流感病例以来,截至2009年5月29日已有53个国家和地区正式报告15 510例确诊病例,2009年4月29日,世界卫生组织（WHO）已将全球流感大流行警告级别从4级提升到5级,并且还有进一步升级的可能。引发此次疫情的病原体是一种之前从未在人和猪身上出现过的新型甲型H1N1流感病毒。该新病毒对奥司他韦（达菲）和扎那米韦较敏感,但对金刚烷胺和金刚乙胺具有抗药性。人群对该病毒普遍易感,经由人-人形式传播。甲型流感在潜伏期内有传播能力,因此必须对密切接触者进行严格检疫;民众应做到勤洗手,咳嗽、喷嚏、吐痰时使用纸巾掩住口鼻等预防措施以减少传播机会。公共场所良好的通风条件、个人良好的卫生习惯和健康状况是预防该病的关键。     

2型糖尿病与糖耐量受损人群Lp(a)、ApoB/A1与胰岛素抵抗相关性分析

目的 探讨2型糖尿病(T2DM)、糖耐量受损(IGT)患者脂蛋白a[Lp(a)]、载脂蛋白A1、B(ApoAl,ApoB)水平变化及其与胰岛素抵抗(IR)之间的关系.方法 536例老年患者按诊断标准分为T2DM、IGT、糖耐量正常(NGT)3组,分别测定其空腹血糖(FPG)、Lp(a)、ApoA1、ApoB水平及相关指标,同时测定空腹胰岛素(FINS)并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)作为胰岛素敏感的指标.结果 T2DM、IGT组ApoB/A1显著高于NGT组,T2DM组Lo(a)水平显著低于NGT组;HOMA-IR与Lp(a)、ApoA1水平呈负相关(r=-0.141,P=0.043;r=-0.179,P=0.003),与ApoB呈正相关(r=0.190,P=0.002).多因素回归分析显示,ApoB/A1对于胰岛素抵抗(IR)的影响高于其他脂代谢指标.结论 T2DM患者体内Lp(a)水平低于NGT人群,不应作为T2DM人群心血管疾病(CVD)的发病危险评估指标;ApoB/A1与IR显著相关.