Exendin-4对肿瘤坏死因子-α诱导的单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的观察exendin-4对大鼠肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、纤维连接蛋白（FN）表达的影响。方法试验分
组：对照组、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）组（10 ng/ml）、TNF-α（10 ng/ml）+E1 组（1 nmol/L exendin-4）、TNF-α（10 ng/ml）+E5 组
（5 nmol/L exendin-4）、TNF-α（10 ng/ml）+E10组（10 nmol/L exendin-4）。收集24 h细胞,提取RNA,采用实时荧光定量检测细
胞内MCP-1 mRNA的表达;分别在24、48 h 收集各组细胞培养上清液,采用ELISA检测培养细胞上清中MCP-1、FN的浓度。
结果孵育24 h 时,TNF-α组MCP-1 mRNA和细胞培养上清MCP-1、FN表达较对照组明显增加（P<0.01）;与TNF-α组比较,
TNF-α+E5组、TNF-α+E10组细胞内MCP-1 mRNA和培养上清内MCP-1、FN含量均明显降低;孵育48 h时,TNF-α组细胞培养
上清MCP-1、FN表达较对照组明显增加（P<0.01）;与TNF-α组比较,TNF-α+E1组、TNF-α+E5组、TNF-α+E10组细胞培养上清
内MCP-1、FN含量均明显降低;并且随着时间的延长和exendin-4浓度的增加,培养上清内MCP-1、FN含量降低更加明显。结
论Exendin-4可明显抑制TNF-α诱导的系膜细胞MCP-1 mRNA的表达,并以剂量和时间依赖的方式抑制TNF-α诱导的系膜细
胞培养上清内MCP-1、FN的含量,提示exendin-4可能会对肾脏具有一定保护作用。
     

miR-503-5p对IL-1β诱导的血管内皮细胞增殖、迁移、凋亡和黏附的影响

目的探讨miR-503-5p对白细胞介素1β（IL-1β）诱导的血管内皮细胞增殖、迁移、凋亡和黏附的影响和分子机制。方法将人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）分为NC组、IL-1β组、IL-1β+anti-miR-con组及IL-1β+anti-miR-503-5p组。分别采用噻唑蓝（MTT）法、黏附实验、流式细胞术、Transwell实验检测HUVECs增殖、黏附、凋亡和迁移能力。Western blotting检测细胞间黏附分子1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）表达水平。结果与NC组比较,IL-1β组HUVECs细胞活力、迁移细胞数显著降低,细胞黏附数、凋亡率、ICAM-1和VCAM-1蛋白表达显著升高（P < 0.01）。与IL-1β+anti-miR-con组比较,IL-1β+anti-miR-503-5p组HUVECs细胞活力、迁移细胞数显著升高,细胞黏附数、凋亡率、ICAM-1和VCAM-1蛋白表达显著降低（P < 0.01）。结论抑制miR-503-5p表达可促进血管内皮细胞增殖和迁移,抑制细胞黏附和凋亡,其机制可能与抑制ICAM-1和VCAM-1表达有关。     

PKC介导凝血酶诱导人肺成纤维细胞单核细胞趋化蛋白-1的表达

摘要：目的研究蛋白激酶C（PKC）在凝血酶诱导人肺成纤维细胞(HLF-1)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达信号通路中的作
用。方法分别用几种不同类型的PKC抑制剂预处理HLF-1,再用凝血酶（10 nmol/L）刺激HLF-1,利用ELISA法检测上清液中
MCP-1的蛋白表达;提取细胞裂解液中总RNA并逆转录合成cDNA,利用实时荧光定量PCR检测MCP-1 mRNA表达水平。结
果广谱型PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I 和RO-31-8220 可抑制凝血酶诱导的HLF-1 MCP-1 蛋白释放及mRNA表达,而
Ca2+依赖性PKC抑制剂Gö 6976则没有抑制效果。结论非Ca2+依赖性PKC介导凝血酶诱导HLF-1释放MCP-1。
     

氧化型低密度脂蛋白对人THP1细胞 Notch1表达及分泌细胞因子的影响

探讨氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)刺激人单核细胞株THP1对Notch1表达及分泌细胞因子的影响探讨对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发病的可能作用。方法：将人单核细胞株（THP1）经氟波酯 （P M A）刺激转化为巨噬细胞后给予不同浓度ox-LDL刺激,相差显微镜动态观察细胞形态变化,RT-PCR检测不同浓度ox-LDL刺激后细胞表面Notch1 mRNA水平,用Western-blot测定Notch1蛋白表达,用ELISA法测定上清液中血管细胞黏附分子1（vascular cell adhesive molecule1,VCAM-1）和单核细胞趋化分子1（Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）浓度。结果：ox-LDL诱导48h后巨噬细胞发生树突样细胞形态改变;与对照组相比,OX-LDL能刺激巨噬细胞表面Notch1蛋白和mRNA表达升高(P<0．05),培养上清液中VCAM-1和MCP-1的表达升高(P<0．05),在50ng/ml浓度下诱导最佳。结论：ox-LDL能够刺激THP1细胞诱导Notch1表达增加,同时能增加动脉粥样硬化相关细胞因子VCAM-1和MCP-1的分泌,ox—LDL致动脉粥样硬化作用可能部分由Notch1介导。     

反式激活蛋白-NEMO结合域抑制核因子-κB活化在胆红素诱导大鼠海马神经元凋亡中的作用

目的明确核因子-κB（NF-κB）活化在胆红素诱导大鼠海马神经元凋亡中的作用,及反式激活蛋白-NEMO 结合域
（TAT-NBD）对胆红素神经毒性的干预作用。方法原代培养海马神经元分为对照组、胆红素组、TAT-NBD早期干预组、持续干
预组及晚期干预组。免疫细胞化学法检测NF-κB p65蛋白表达,改良MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法及TUNEL法检测细胞
相对存活率及凋亡率,ELISA法检测原代培养基上清IL-1β水平。结果胆红素组海马神经元NF-κB p65 蛋白平均光密度值
（MOD）明显高于对照组（P<0.01）,6、24 h达高峰。TAT-NBD早期干预组细胞相对存活率为（80.784±9.767）%低于对照组（P<
0.01）、高于胆红素组（P<0.01）,细胞凋亡率为（14.100±2.252）%（Annexin V-FITC/PI双染法）、（12.883±1.629）%（TUNEL法）高
于对照组（P<0.01）、低于胆红素组（P<0.01）,IL-1β水平为15.348±0.812 pg/ml低于胆红素组（P<0.05）。TAT-NBD持续干预及晚
期干预组细胞存活率、凋亡率、IL-1β水平与胆红素组无显著性差异（P>0.05）。结论NF-κB双向调控胆红素诱导的海马神经元
凋亡。TAT-NBD抑制NF-κB早期高峰有神经保护作用,有可能用于胆红素脑损伤的预防。
     

丙酮醛通过降低整合素β3的表达抑制内皮细胞的迁移

目的探讨丙酮醛对内皮细胞迁移的影响。方法浓度梯度的丙酮醛（0、25、50、100和200 μmol/L）刺激体外培养人脐静脉
内皮细胞（HUVECs）24 h,划痕实验和Transwell迁移实验检测丙酮醛对HUVECs迁移的影响;免疫印迹检测整合素β3的表达
变化;并采用β3 的抗体LM609 进行干预,观察LM609 对HUVECs迁移的影响。结果丙酮醛以浓度依赖的方式显著降低
HUVECs 的迁移（P<0.05）;丙酮醛以浓度依赖和时间依赖的方式显著降低了整合素β3 的表达（P<0.05）;β3 的特异性抗体
LM609显著抑制了HUVECs的迁移（P<0.05）。结论丙酮醛通过降低整合素β3的表达抑制了HUVECs的迁移。
     

MiR-590-5p对ox-LDL诱导血管内皮细胞凋亡以及LOX-1表达的影响

目的:研究miR-590-5p对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡过程中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达的调节作用,观察miR-590-5p对HUVECs凋亡的影响。方法:HUVECs经ox-LDL(50μg/mL)作用不同时间(0~48 h)。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-590-5p的表达变化。HUVECs转染miR-590-5p模拟物(miR-590-5pmimics)后ox-LDL继续作用48 h。RT-qPCR和Western印迹分别检测LOX-1 mRNA和蛋白的表达情况。FCM检测HUVECs凋亡率的变化。结果:随ox-LDL作用时间的延长,HUVECs凋亡率逐渐升高,miR-590-5p表达逐渐下调。miR-590-5p模拟物转染后可以降低LOX-1 mRNA和蛋白的表达,并抑制ox-LDL诱导的HUVECs凋亡。结论:miR-590-5p可抑制ox-LDL诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与下调LOX-1基因表达有关。     

硝基酪氨酸对糖尿病肾病大鼠肾脏NF-κB、MCP-1 及TGF-β1表达的影响

目的观察硝基酪氨酸（NT）对糖尿病肾病（DN）大鼠肾脏核因子-κB（NF-κB）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和转化生长
因子-β1（TGF-β1）表达的影响,探讨其在DN发生发展中的作用机制。方法用链脲佐菌素腹腔注射法建立DN大鼠模型,造模
成功的大鼠随机分3组：DN模型组、DN+NT组和DN+NT+Ebselen组（NT抑制剂）,另设正常对照组。各组分别干预8周后,观
察24 h尿蛋白定量变化,采用免疫组织化学染色检测肾脏组织NF-κB、MCP-1及TGF-β1蛋白的表达,实时荧光定量PCR法检
测肾组织NF-κB、MCP-1及TGF-β1 mRNA表达,光镜观察肾脏病理改变。结果与DN模型组比较,DN+NT组大鼠24 h尿蛋
白定量、肾脏组织中NF-κB、MCP-1和TGF-β1的蛋白及mRNA水平均显著增加,肾脏病理改变加重;NT抑制剂Ebselen可明显
减轻这些变化。结论硝基酪氨酸可上调DN大鼠肾脏组织NF-κB、MCP-1及TGF-β1 蛋白及其mRNA的表达,加重炎性反应,
促进DN的进展。
     

脱氢表雄酮对氧化低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞表达VCAM-1的影响

目的探讨雄激素脱氢表雄酮（DHEA）对氧化低密度脂蛋白（ox—LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）表达血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）的影响。方法体外培养HUVECs，采用免疫细胞化学、Western blot、原位杂交等方法，观察不同浓度DHEA（1，5，50μmol／L）对ox—LDL诱导的HUVECs表达VCAM-1的影响。结果ox—LDL诱导培养HUVECs后，HUVECs VCAM-1表达明显升高，预先用DHEA处理HUVECs可使VCAM-1的表达降低（P〈0．01），且这种降低呈浓度依赖性。结论DHEA能浓度依赖性地抑制ox-LDL诱导的HUVECs VCAM-1的表达。     

瑞舒伐他汀强化治疗对外周动脉粥样硬化患者粘附分子的影响及上游机制

目的探讨瑞舒伐他汀强化治疗对外周动脉粥样硬化患者细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）
的作用及可能机制。方法入选无症状的外周动脉粥样硬化患者20例,服用瑞舒伐他汀5~20mg/d,治疗3个月,观察患者治疗
前后血脂情况及血浆VCAM-1水平;流式细胞学检测单个核细胞ICAM-1表达;实时荧光定量PCR及Western blotting检测单个
核细胞过氧化物酶体增殖激活受体γ（PPARγ）的mRNA及核内蛋白表达。结果与基线时比较,瑞舒伐他汀治疗后淋巴细胞表
面ICAM-1表达明显降低,单个核细胞核内PPARγ蛋白表达增加。血浆VCAM-1水平、单核细胞表面ICAM-1表达则无明显变
化。结论瑞舒伐他汀抑制外周动脉粥样硬化患者单个核细胞ICAM-1的表达,上游机制可能与PPARγ途径有关。
     

脱氢表雄酮对血管内皮细胞损伤后单核细胞与内皮细胞相互作用的影响

目的脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)是成人体内最为丰富的来源于肾上腺的甾体激素,文中探讨DHEA对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)所致血管内皮细胞损伤后单核细胞与内皮细胞相互作用的影响。方法以培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入ox-LDL或在试验体系中加入不同浓度的DHEA,测定人单核细胞系U937与HUVEC的黏附,检测内皮细胞条件培养基中一氧化氮(nitric oxide,NO)及单个核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)的含量,应用流式细胞仪检测内皮细胞表面黏附分子细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(vascularcell adhesion molecule-1,VCAM-1)及E-选择素的表达。将内皮细胞条件培养基作用于U937细胞,应用RT-PCR检测U937细胞CCR2、LFA-1以及VLA-4 mRNA的表达。结果 DHEA可明显抑制单核U937细胞与内皮细胞之间的相互黏附,明显促进内皮细胞NO合成,抑制MCP-1分泌,降低内皮细胞表面ICAM-1、VCAM-1的表达,且经DHEA作用后的内皮细胞条件培养基可明显抑制单核U937细胞CCR2、淋巴细胞功能相关抗原(lymphocyte function-associated antigen,LFA)-1以及非常晚期抗原(very late antigen,VLA)-4 mRNA的表达。结论 DHEA可通过抑制内皮细胞分泌趋化因子、下调内皮细胞表面黏附分子的表达,抑制内皮细胞对单核细胞的趋化及相互黏附,据此认为DHEA可能对血管内皮细胞具有保护作用。     

健脾清化方调节局灶节段硬化大鼠炎症信号通路的机制

目的从阻断炎症细胞生物功能角度,探讨健脾清化方对局灶节段硬化（FSGS）模型大鼠肾纤维化的影响。方法左侧肾切
除加尾静脉注射阿霉素致大鼠肾脏FSGS,观察健脾清化方对模型大鼠白细胞介素6（IL-6）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、细胞
间黏附分子（ICAM-1）表达的影响。结果大鼠肾小管间质IL6表达,健脾清化方组、健脾方组、清化方组、尿毒清组明显低于模
型组（P<0.01）。大鼠肾小管间质MCP-1 表达,健脾清化方组、健脾方组、清化方组、尿毒清组较模型组明显下降（P<0.01）;
健脾清化方组较尿毒清组下降（P<0.05）。大鼠肾小管间质ICAM-1表达,与模型组相比,健脾清化方组、清化方组、尿毒清组明显下降
（P<0.01）,健脾方组较模型组下降（P<0.05）;健脾清化方组较尿毒清组下降（P<0.05）。大鼠肾小管间质MCP-1、ICAM-1荧光强
度,与模型组相比,健脾清化方组、健脾方组、清化方组、尿毒清组明显减弱（P<0.01）,与尿毒清组比较,健脾清化方组、清化
方组荧光强度明显减弱（P<0.01）。健脾清化方能显著降低IL6、MCP-1、ICAM-1表达,且对MCP-1、ICAM-1的效果优于尿毒清
组。结论健脾清化方对FSGS模型大鼠肾脏的炎症损伤和肾纤维化有一定的改善作用,该机制可能与健脾清化方终止IL-6的信
号通路有关。
     

外源性胍丁胺抑制脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞活化及损伤

目的研究胍丁胺对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞活化及损伤的影响,并探究其与NF-κB、MAPK通路及活性氧（ROS） 的产生是否相关。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）。MTT法检测0~4 mmol/L胍丁胺作用24 h对HUVECs细胞 活力的影响。HUVECs细胞机分为：①空白对照组;②脂多糖（10 μg/mL）组;③胍丁胺干预组：脂多糖（10 μg/mL）+胍丁胺 （0.125、0.5、1 mmol/L）。ELISA 法检测24 h 细胞上清中可溶性细胞间粘附分子-1（sICAM-1）、可溶性血管间粘附分子-1 （sVCAM-1）、可溶性E-选择素（sE-selectin）及单核细胞趋化因子-1（MCP-1）水平,确定胍丁胺最适干预浓度（1 mmol/L）。后续 实验中HUVECs细胞随机分为：对照组、脂多糖（10 μg/mL）组、胍丁胺（1 mmol/L）组及脂多糖（10 μg/mL）+胍丁胺（1 mmol/L） 共同组,作用1、6、24 h;抑制剂组即在脂多糖刺激前1 h,用10 μmol/L NF-κB（PDTC）、ERK1/2（PD98059）及p38（SB203580）抑 制剂进行预处理。qRT-PCR法检测ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、MCP-1、血红素氧合酶（HO-1）、醌氧化还原酶（NQO1）mRNA 表达水平;DCFH-DA作为荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）水平;Western blot 法检测细胞VCAM-1、ICAM-1、p65、磷酸化- p65（p-p65）、IκBα、p-IκBα、ERK、p-ERK、p38、p-p38、JNK、p-JNK蛋白表达水平。结果（1）HUVECs经10 μg/mL脂多糖刺激24 h 后,上清sVCAM-1、sICAM-1、sE-选择素、MCP-1 含量明显升高（P<0.05）,细胞内ROS明显增加（P<0.05）;刺激6 h 后各因子 mRNA水平升高（P<0.05）;（2）胍丁胺（1 mmol/L）干预后上述指标显著下调（P<0.05）,这与p38、ERK及NF-κB信号通路抑制剂 预处理细胞后的抑制效应相似;（3）胍丁胺干预组6 h HO-1 mRNA表达较脂多糖组明显增加（P<0.05）,而NQO-1无明显变化; （4）胍丁胺明显抑制脂多糖刺激引起的细胞内p38、ERK、核内p65（Ser536）与胞浆IκBα磷酸化,并上调胞浆IκBα蛋白水平。结 论胍丁胺可能通过抑制NF-κB、MAPK通路的激活下调粘附分子及趋化因子水平,并增强HO-1表达以减少活性氧产生对抗脂 多糖诱导的人脐静脉内皮细胞活化及损伤。     

复方丹参滴丸联合阿托伐他汀对经皮冠状动脉腔内血管成形术后内膜增生的影响

目的探讨复方丹参滴丸和阿托伐他汀联用对经皮冠状动脉腔内血管成形术（percutaneous transluminal coronary
angioplasty, PTCA）后内膜增生的影响。方法建立新西兰兔腹主动脉PTCA再狭窄模型,分别采用HE染色和免疫组化技术,
观察兔血管内膜增生情况及核因子κB（NF-κB）及单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达活性。结果HE染色图片结果显示：
A组（建模组生理盐水2 ml/kg·d）管腔面积减少、内膜面积增加,内膜增生百分比（%）增高;与A组比较,B组（复方丹参滴丸
300 mg/d）、C组（阿托伐他汀2.5 mg/kg·d）和D组（复方丹参滴丸300 mg/d+阿托伐他汀2.5 mg/kg·d）管腔面积增大,内膜面积
减小,内膜增生百分比降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。D组与B组、C组比较,管腔面积、内膜面积及内膜增生百分比变化
更显著,差异有统计学意义（P<0.05）。免疫组化染色显示：B组、C组和D组的NF-kB和MCP-1阳性表达与A组比较明显减少,
差异均有统计学意义（P<0.05）。D组与B组、C组比较,NF-kB和MCP-1阳性表达更少,差异有统计学意义（P<0.05）。结论复
方丹参滴丸联合阿托伐他汀抑制血管平滑肌增殖的作用优于单用复方丹参滴丸或阿托伐他汀,可能与抑制调节因子NF-κB来
降低MCP-1的表达有关。
     

Exendin-4 通过PI3K/Akt 信号通路促进脂肪干细胞旁分泌细胞因子

目的探讨Exendin-4 促进脂肪来源干细胞（ADSCs）旁分泌细胞因子的机制。方法混合酶消化法提取和培养SD大鼠
腹股沟处的脂肪干细胞,使用流式细胞学检测有或无Exendin-4 处理后的第4 代ADSCs表面标记物,MTT法绘制0、1、5、10、
20 nm/L不同浓度Exendin-4下的ADSCs生长曲线;qPCR法检测不同浓度Exendin-4处理12 h后bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的
表达变化。Western blotting和qPCR检测Exendin-4对于Akt通路的作用。同时添加通路阻断剂LY-294002,使用ELISA检测
Akt 通路阻断后Exendin-4 对于旁分泌蛋白的影响。结果分离培养的ADSCs 高表达CD29、CD90、CD105,低表达CD34、
CD45,并且能够多向分化为脂肪细胞、骨细胞,符合间充质干细胞的表型特点。Exendin-4处理后,不仅不会改变ADSCs的表
型,还能以浓度依赖方式促进ADSCs 在体外增殖（P<0.05）。不同浓度Exendin-4 处理ADSCs 12 h 后,旁分泌蛋白bFGF、
VEGF、HGF、IGF-1的表达量逐渐提高,其中10 nm/L Ex-4处理12 h可能为最佳处理浓度（P<0.05）。Western blotting和qPCR
提示Exendin-4 能够显著提高胞内Akt 的磷酸化水平,而给予LY-294002 后,磷酸化Akt 表达减弱,同时ADSCs培养液上清中
bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的含量也明显降低（P<0.05）。结论短暂Exendin-4处理不会改变ADSCs表型,但能加强细胞的增殖
能力,且以剂量依赖方式促进干细胞旁分泌细胞因子bFGF、VEGF、HGF、IGF-1。10 nm/L可能为Exendin-4 最适促旁分泌浓
度,其扩大干细胞旁分泌的机制部分是通过激活PI3K/Akt信号通路来介导。
     

TNF-α诱导人脐静脉血管内皮细胞凋亡和炎症机制研究

目的 观察肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factor alpha,TNF-α)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡及炎症反应的影响,并探讨其损伤血管内皮细胞的可能机制。 方法 常规培养的HUVECs至第三代,随机分为对照组和TNF-α组。对照组常规方法培养作为对照,TNF-α组应用200 ng/ml的TNF-α刺激HUVECs 6 h后,采用流式细胞法检测HUVECs的凋亡率,Western blot法检测ICAM-1、VCAM-1、E-selectin和eNOS的蛋白表达水平;流式细胞术和Western blot法进一步评价核因子-κB (NF-κB)、激活蛋白-1(AP-1)的表达激活情况。 结果 与对照组相比,200 ng/ml TNF-α能明显增加HUVECs的凋亡率(P<0.05),同时上调ICAM-1、VCAM-1、E-selectin炎症因子在HUVECs中的表达(P<0.05),TNF-α抑制eNOS的释放(P<0.05),并激活NF-κB、AP-1的表达(P<0.05)。 结论 TNF-α能显著增加HUVECs的凋亡和炎症因子表达,其损伤机制可能是通过激活NF-κB、AP-1途径,并抑制eNOS的释放有关。      

不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞（human skin fibroblasts,HSF）增殖、迁移、凋亡的影响。方法将体外HSF
分为腐胺组和对照组,以含腐胺浓度分别为0.5、1、5、10、50、100、500、1000 μg/ml完全培养基培养细胞设为腐胺组,不添加腐胺
设为对照组。经对照组及不同浓度腐胺组处理的HSF培养24 h后,再以四唑化合物电子耦联显色法（MTS法）测定细胞增殖能
力（用吸光度值表示）,Transwell迁移实验测定细胞的迁移能力,流式细胞技术（Flow Cytometry, FCM）Annexin V/PI标记法测
定细胞凋亡率。结果（1）细胞增殖能力（MTS）测定结果显示,0.5、1、5、10 μg/ml 腐胺组HSF的吸光度值较对照组升高（P<
0.01）,并且1 μg/ml时达峰值（0.754±0.024）;500、1000 μg/ml腐胺组HSF吸光度值较对照组降低（P<0.01）;50、100 μg/ml腐胺
组HSF的吸光度值与对照组无明显差异（P>0.05）;（2）Transwell迁移实验结果显示,1 μg/ml腐胺组穿过微孔膜的细胞数目较对
照组显著增加（P<0.01）,且达到峰值309±21;50 μg/ml及以上浓度腐胺组HSF穿过微孔膜的数目较对照组减少（P<0.05）;0.5、
5、10 μg/ml腐胺组HSF穿过微孔膜的细胞数目与对照组比较无明显差异（P>0.05）;（3）流式细胞凋亡结果显示,0.5、1、5、10 μg/ml
腐胺组HSF凋亡率较对照组显著降低（P<0.05）,而且在1 μg/ml时细胞凋亡率达最低值（11.10±0.79）%;100 μg/ml及以上浓度
腐胺组细胞凋亡率较对照组显著升高（P<0.01）,而且随着浓度增加凋亡率逐渐升高;50 μg/ml腐胺组与对照组比较细胞凋亡率
无明显差异（P>0.05）。结论微量腐胺可维持细胞正常的迁移能力,显著提高HSF的细胞增殖能力,而较高浓度的腐胺能显著
抑制HSF迁移与增殖,并诱导细胞发生凋亡,提示不同浓度的腐胺会对创面愈合起到完全不同的作用。
     

LXRs激动剂T0901317通过PI3K/Akt增强人脐静脉内皮细胞的增殖能力

目的观察肝X受体(liver X receptors,LXRs)激动剂T0901317对人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cell,HUVEC)增殖活性的影响。方法体外分离和培养原代HUVEC,不同浓度的T0901317(0、0.5、2、5μmol/L)干预HUVEC 48 h后,采用MTS法检测HUVEC增殖情况;Western blot检测磷酸化Akt(Ser473)及总Akt的表达。结果T0901317(0～5μmol/L)呈浓度依赖性的促进HUVEC的增殖(P<0.01)和上调HUVEC中p-Akt-Ser473的表达(P<0.01),PI3K抑制剂LY294002(10μmol/L)和基因转录抑制剂放线菌素-D(actinomycin D,Act-D,5μg/ml)可以阻断T0901317(5μmol/L)上调p-Akt-Ser473的作用(P<0.01),提示T0901317通过基因转录调节的方式激活PI3K/Akt信号,此外,PI3K抑制剂LY294002(10μmol/L)预处理可以逆转T0901317(5μmol/L)促HUVEC增殖作用(P<0.01)。结论 LXRs激动剂T0901317可通过激活PI3K/Akt信号通路增强HUVEC的增殖能力。