产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药型与基因分型

目的 分析肺炎克雷伯菌的耐药现状,探讨其耐药型与基因组型间的关系,检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)各基因型的流行状况.方法 用纸片扩散法检测117株肺炎克雷伯菌对20种抗生素的耐药情况.用PFGE实验探讨耐药表型与基因组型间的关系.用PCR扩增所有产酶株的TEM、SHV及CTX-M基因片段,分析ESBL各基因型的流行状况.结果 肺炎克雷伯菌耐药情况严重,产ESBL肺炎克雷伯菌检出率达到43.59%.PFGE将117株肺炎克雷伯菌分为3群,群间相似度为37.30%,没有发现特异的ESBL条带.PCR扩增检出SHV型15株,占29.40%;TEM型39株,占76.50%;CTX-M型9株,占17.60%.同时携带SHV、CTX-M基因者有19株,占37.30%.结论 该院肺炎克雷伯菌的耐药现象严重、多重耐药现象突出,ESBL检出率高.该次实验未发现由同一菌株所致的医院感染,肺炎克雷伯菌的耐药表型与PFGE基因分型结果 可以表现一致,也可以表现为不同.产ESBL肺炎克雷伯菌的基因型以TEM和SHV为主,同一菌株携带多个基因的现象较为普遍.     

双黄连冻干粉对大肠埃希菌直接抑制作用的实验研究

目的：探讨双黄连冻干粉对大肠埃希菌的直接抑制作用。方法：采用微量肉汤稀释法,依据不同浊度液体内细菌含量不同的原理,绘制时间-浊度曲线（生长曲线）,并对结果进行分析。结果：不同浓度双黄连作用下,细菌的生长曲线不同。双黄连浓度为12.5mg/mL时细菌生长最为特殊,浓度为50mg/mL时细菌不生长。结论：生长曲线可以反映药物的直接抑菌作用;一定浓度范围内的双黄连冻干粉对大肠埃希菌标准株ATCC25922的生长有促进作用。     

下呼吸道产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌的耐药性基因型分析

目的:观察下呼吸道产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrumβ-lactamases,ESBLs)肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌耐药菌株耐药基因分型,并探讨耐药菌株的流行状况及发生耐药的机制。方法:按常规方法进行细菌分离、培养和菌种鉴定。采用微量液体稀释与K-B法,分别对常用抗生素和头孢哌酮/舒巴坦的耐药性进行检测。采用纸片法确证产超广谱β-内酰胺酶菌株,并应用PCR技术进一步扩增TEM型、SHV型β-内酰胺酶的基因型。结果:产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对AMP、AMP/SB、PIP、CF、CFZ、CRM、CPD、CAX、CAZ、CTX、CPE和AZT的耐药率高达90%以上。产ESBLs肺炎克雷伯菌中产TEM型、SHV型、TEM和SHV型β-内酰胺酶基因的百分率分别为26.92%、30.76%、7.69%,大肠埃希菌百分率分别为46.15%、5.12%、10.25%。结论:产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对多种不同种类抗生素耐药,且具有多重耐药的特点。产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌携带TEM或SHV型β-内酰胺酶基因,其中肺炎克雷伯菌以产SHV型β-内酰胺酶为主,大肠埃希菌则以产TEM型β-内酰胺酶为主。     

124株肺炎克雷伯菌耐药性分析和产ESBLs株耐药基因分型研究

目的 探讨肺炎克雷伯菌耐药性以及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型的流行状况.方法 用K-B法检测肺炎克雷伯菌对24种常用抗生素的耐药情况;用PCR扩增所有产酶株的TEM、SHV及CTX-M基因片段,分析ESBLs各基因型的流行状况.结果 肺炎克雷伯菌除对碳青霉烯类药物敏感外,对其他抗生素耐药严重;产ESBLs肺炎克雷伯菌检出50株,检出率40.32％.ESBLs基因分型结果显示,多株同时携带2种或2种以上基因型,且多为CTX-M型与TEM型或SHV型基因共同存在.结论 常用抗菌药物耐药严重、呈多重耐药.ESBLs检出率较高,产ESBLs肺炎克雷伯菌的基因型以CTX-M为主.     

广州地区肺炎克雷伯菌产TEM型及SHV型β-内酰胺酶基因表型的研究

目的对广州地区产β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌TEM型和SHV型基因型及其分子流行病学进行研究。方法对57株产β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌进行blaTEM和blaSHV基因扩增,分别采用变性高效液相色谱技术和测序法对扩增产物进行分析,以明确基因类型。结果57株肺炎克雷伯菌均扩增出blaTEM和blaSHV基因。测序结果表明,TEM-116 ESBL32株,占54．2％;SHV型以SHV-12为主,占33．3％,其次为SHV-11和SHV-2a等,还发现5种新的SHV基因亚型。54株菌株同产TEM和SHV型β-内酰胺酶,占94．7％;其中13．0％同产TEM-116和SHV-12ESBL。结论TEM-116和SHV-12分别是广州地区产β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌TEM型及SHV型耐药质粒主要的基因亚型,blawTEM和blaSHV在肺炎克雷伯菌中同产的比例很高,这提示本地区即将或已经面临肺炎克雷伯菌新耐药机制的抵抗和流行,必须加强对产ESBL肺炎克雷伯菌的分子流行病学监测。     

肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究与药敏分析

目的 探讨广州地区部分医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的耐药性及基因分布规律.方法 用NCCLS推荐的表型确证试验确定临床标本中产ESBLs肺炎克雷伯菌62株,用Etest测定其最低抑菌浓度(MIC),分别用TEM,SHV,CTX-M-1,CTX-M-2,CTX-M-9组通用引物进行聚合酶链反应(PCR),并对结果进行分析.结果 产ESBLs肺炎克雷伯菌对多种抗生素耐药,对亚胺培南的敏感率最高(98.2%),其次是头孢吡肟(72.7%),头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/三唑巴坦分别为69.6%和63.6%.PCR扩增结果显示TEM,SHV和CTX-M基因的阳性率分别为16.1%,50%和61.3%,21%的菌株同时携带多个基因.结论 广州地区肺炎克雷伯菌对亚胺培南酌敏感率最高,产ESBLs最常见的基因型是CTX-M型,其次是SHV,TEM型.     

新生儿科病房产ESBLs分离株耐药基因初步分型

目的:了解新生儿科病房产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)分离株基因型分布情况.方法:用美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的表型确证方法,对我院新生儿科病房分离的非重复的34株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行ESBLs确证.分别用TEM、SHV和CTX-M通用引物对ESBLs阳性株进行聚合酶链反应(PCR),PCR扩增产物经1 %琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,用凝胶成像系统观察结果进行初步分型.结果:34株细菌中,检出ESBLs阳性菌17株,检出率为50 %.17株ESBLs菌中TEM基因阳性2株,SHV基因阳性15株,CTX-M基因阳性9株;其中,8株单SHV基因阳性,2株TEM、CTX-M基因同时阳性,7株SHV、CTX-M基因同时阳性.结论:SHV型ESBLs是新生儿科病房最常见的ESBLs,其中产ESBLs肺炎克雷伯菌SHV基因的携带率为100 %,CTX-M型也较为常见.     

产ESBLs肺炎克雷伯杆菌SHV型β-内酰胺酶临床研究

目的探讨产ESBLs肺炎克雷伯杆菌中SHV分型、耐药性及基因突变类型。方法收集肺炎克雷伯杆菌516株,其中168株产ESBEs,分析其基因类型;对产ESBLs肺炎克雷伯杆菌SHV型进行耐药试验及其基因突变类型检测。结果168例产ESBLs肺炎克雷伯杆菌株中,其中CTX—M基因型38株（22．6％）,SHV基因型105株（62．5％）,TEN基因型25株（14．9％）;SHV分型主要有SHV-1、SHV-6、SHV-8、SHV-10、SHV-12、SHV-18和SHV-71,其中SHV-6型例数最多,为42例;产ESBLs肺炎克雷伯杆菌株SHV型对抗生素广泛性耐药,仅亚胺培南／西司他丁对所有菌株均敏感;SHV基因突变类型主要为碱基置换和移码。结论探讨不同地区产ESBLs肺炎克雷伯杆菌基因突变分型及药敏试验对抗生素的选择具有重要的临床价值。     

产超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌基因型研究

目的：了解泸州地区临床分离产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌的ESBLs基因型的流行特征。方法：用聚合酶链反应法（PCR）对ESBLs菌株进行扩增,产物行琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下观察结果,明确ESBLs基因型。结果：97株产ESBLs菌株中基因分布数据为TEM基因型15株（15.5%）,SHV基因型17株（17.5%）,非TEM、非SHV基因型占67.0%。结论：本地区产ESBLs肺炎克雷伯菌基因型部分为TEM型和SHV型,较大部分为其他型ESBLs。     

南京地区产超广谱β-内酰胺酶菌的流行病学调查

目的:了解南京地区产ESBLs菌基因型的流行情况。方法:用TEM型、SHV型、CTX-M型、OXA型ESBLs的特定引物进行扩增并对扩增产物进行测序分析确定基因型。结果:30株产ESBLs大肠埃希菌和30株产ESBLs肺炎克雷伯菌未发现TEM型、SHV型、OXA型ESBLs,51株产CTX-M型ESBLs,主要为CTX-M-3、CTX-M-14。9株未扩增到ESBLs基因型。结论:南京地区产ESBLs菌基因型主要以CTX-M型为主。     

新生儿科病房产ESBLs分离株耐药基因初步分型

目的 :了解新生儿科病房产超广谱β-内酰胺酶 (ESBL s)分离株基因型分布情况。方法 :用美国国家临床实验室标准化委员会 (NCCL S)推荐的表型确证方法 ,对我院新生儿科病房分离的非重复的 34株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行 ESBL s确证。分别用 TEM、SHV和 CTX- M通用引物对 ESBL s阳性株进行聚合酶链反应 (PCR) ,PCR扩增产物经 1%琼脂糖凝胶电泳 ,溴化乙锭染色 ,用凝胶成像系统观察结果进行初步分型。结果 :34株细菌中 ,检出ESBL s阳性菌 17株 ,检出率为 5 0 %。 17株 ESBL s菌中 TEM基因阳性 2株 ,SHV基因阳性 15株 ,CTX- M基因阳性9株 ;其中 ,8株单 SHV基因阳性 ,2株 TEM、CTX- M基因同时阳性 ,7株 SHV、CTX- M基因同时阳性。结论 :SHV型ESBL s是新生儿科病房最常见的 ESBL s,其中产 ESBL s肺炎克雷伯菌 SHV基因的携带率为 10 0 % ,CTX- M型也较为常见。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药谱的连续监测

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌耐药谱的变化,为临床用药提供依据。方法用法国BioMerieux公司的VITEK-60全自动细菌鉴定仪鉴定细菌。采用K-B单片琼脂扩散法做药敏试验；用WHONET5．0分析软件对产ESBLs肺炎克雷伯菌的药敏结果进行统计。结果检出624株肺炎克雷伯菌,其中产ESBILs 269株,占43．1％。药敏结果显示除哌拉西林外,18种抗生素对不产ESBLs肺炎克雷伯菌有较高的抗菌活性。产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药率均明显高于不产ESBLs菌。结论本院检出的肺炎克雷伯菌产ESBLs株可能是头孢菌素型(CTX-M型)和SHV型酶介导。ESBLs尚未得到有效控制。3年间产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药谱变化不大,亚胺培南、美洛培南对产ESBLs株耐药率最低。     

肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的:了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的表型和基因分布及对常用抗生素的耐药情况. 方法:用1999年NCCLS推荐的初筛试验从77株肺炎克雷伯菌中筛选出可疑产ESBLs细菌,并用确证试验加以确认;用PCR的方法扩增其基因型;用微量液体稀释法做药敏实验. 结果:将初筛得到的可疑菌株用纸片扩散法确证,用头孢噻肟和头孢噻肟/克拉维酸测定,77株肺炎克雷伯菌中共检出45株产ESBLs (58.1%);而用头孢他啶和头孢他啶/克拉维酸检测ESBLs阳性菌为27株. PCR扩增基因型阳性结果为TEM型 19株、SHV型8株、CTX-M型36株、OXA型11株. 结论:近年来肺炎克雷伯菌产ESBLs率显著升高;基因型以CTX-M型为主,有些菌株同时携带多种耐药基因;亚胺培南仍为首选药物, 头孢哌酮/ 舒巴坦、哌拉西林/ 他唑巴坦为候选药物.     

产ESBLs分离株耐药基因初步分型

目的了解产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和克雷伯菌的主要基因型分布特点。方法用表型确证试验筛选出临床标本中产ESBLs的大肠埃希菌和克雷伯菌114株。应用PCR方法扩增产酶株的TEM、SHV和CTX-M基因。结果PCR结果显示TEM、SHV和CTX-M基因的总阳性率分别为40.4%、20.7%和83.3%,其中大肠埃希菌分别为48.1%、1.3%和93.5%,肺炎克雷伯菌分别为24.3%、81.1%和62.2%。46.8%的大肠埃希菌和51.4%的肺炎克雷伯菌同时携带多个基因。结论产ESBLs大肠埃希菌的主要基因型为CTX-M,肺炎克雷伯菌主要基因型为SHV。大多数菌株同时携带多个基因。     

重症监护病房耐亚胺培南肺炎克雷伯菌耐药基因检测

目的:对重症监护病房(ICU)出现的13株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌的分子流行病学及耐药机制进行研究。方法:从ICU分离到13株对亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌,采用琼脂稀释法检测包括亚胺培南在内的5种抗菌药物最低抑菌浓度(MIC);用聚合酶链反应(PCR)及耐药基因克隆测序方法研究细菌的耐药机制;用肠杆菌基因间重复性一致性序列-PCR分析菌株的分子流行病学。结果:13株肺炎克雷伯菌亚胺培南的MIC为16～1 024μg/ml;13株实验菌PCR产物克隆测序分析比对为blaKPC-2型和blaSHV型基因。结论:ICU连续出现13株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌,KPC-2是引起细菌对亚胺培南耐药的主要原因,SHV型β-内酰胺酶同时参与多重耐药机制。     

痰标本中肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因的检测及耐药分析

目的分析痰标本中肺炎克雷伯菌的耐药特点及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率、基因分型。方法收集安徽省内34家医院痰标本中分离到的114株肺炎克雷伯菌,用琼脂稀释法检测其耐药性,标准纸片扩散法及PCR法检测ESBLs基因并初步分型。结果114株肺炎克雷菌中产ESBLs58株(50.9%),其中CTX-M-1型12株,CTX-M-9型15株,TEM型42株,SHV型49株,OXA-1型2株;产ES-BLs肺炎克雷伯菌的耐药率明显高于非产ESBLs菌株。结论痰标本中产ESBLs肺炎克雷伯菌检出率高,且呈多重耐药。     

浙江省嘉兴地区多重耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶编码基因分子生物学研究

目的：确定浙江省嘉兴地区临床分离的多重耐药肺炎克雷伯菌E3株所产β－内酰胺酶编码基因序列及亚型。方法：肺炎克雷伯菌E3株经酶抑制剂增强的肉汤稀释法鉴定为ESBLs细菌，PCR扩增其β－内酰胺酶编码基因片段，克隆后双脱氧链终止法测定苷酸序列并确定亚型，重组细菌表型鉴定。结果：E3株同时产SHV和TEM型两种β－内酰胺酶，其中SHV基因片段含812个核苷酸，编码266个氨基酸，为SHV－11型β－内酰胺酶；TEM基因片段含973个核苷酸，编码288个氨基酸，为TEM－1型β－内酰胺酶。含TEM－1和SHV－11编码基因的重组细菌经酶抑制剂增强的肉汤稀释法鉴定为阴性。结论：E3株肺炎克雷伯菌同时产生SHV－11和TEM－1两种广谱β－内酰胺酶，广谱β－内酰胺酶的种类和数量可影响ESBLs的表型检测结果。     

产ESBLs大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的基因分型研究

目的了解广东省中医院产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的流行、耐药基因型分布。方法对广东省中医院2001年7月至2003年8月间临床分离保存的208株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，用Vitek-32细菌鉴定仪进行细菌鉴定，用双纸片法进行ESBLs初筛，用NCCLS 1999年推荐的确证方法进行ESBLs确证。并采用PCR扩增和PCR产物测序方法对产ESBLs菌株进行基因分型。结果分离到产ESBLs细菌76株，总检出率为36．5％，其中肺炎克雷伯菌阳性率为41．9％（39／93）、大肠埃希菌阳性率为32．2％（37／115），PCR初步分型结果表明：TEM型42株（55．3％），均为TEM-1型、CTX-M型27株（35．5％），SHV型33株（43．4％）。结论CTX-M型和SHV型是我院产ESBL大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中流行的基因型。     

新生儿医院感染肺炎克雷伯菌耐药性及β-内酰胺酶编码基因检测

目的 了解新生儿医院感染肺炎克雷伯菌的耐药性和耐药基因特点.方法 应用K-B法对17株肺炎克雷伯菌进行16种抗菌药物敏感性试验,检测β-内酰胺酶基因TEM、SHV、PER、VEB、GES、CARB、CTX-M-1群,碳青霉烯酶基因OXA-23群、OXA-24群、OXA-51群、OXA-58群,金属β-内酰胺酶基因IMP、VIM、SPM、GIM,AmlpC酶基因ADC、DHA.结果 17株肺炎克雷伯菌对氨苄西林、头孢曲松、头孢唑啉、头孢他啶高度耐药,而对氨基糖苷类和喹诺酮类药物敏感性较高,碳青霉烯类亚胺培南敏感率达100%;17株中β-内酰胺酶基因TEM阳性9株、SHV阳性1株:碳青霉烯酶基因、金属β-内酰胺酶基因均阴性;AmpC酶基因DHA阳性3株.结论 新生儿疑似肺炎克雷伯菌败血症时,亚胺培南可能是现阶段最好的选择.     

血液来源肺炎克雷伯菌耐药表型及基因型分析

目的 了解临床血液来源的肺炎克雷伯菌的耐药表型和基因型分布情况.方法 收集2014年10月至2015年10月四川省人民医院检验科临床分离的37株肺炎克雷伯菌进行耐药分析,采用双纸片扩散法检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),PCR扩增CTX-M、TEM和SHV耐药基因,PCR产物测序确定其基因型.结果 37株肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株的阳性率为27.03％(10/37).与不产ESBLs的菌株相比,产ESBLs的肺炎克雷伯菌对氨苄西林/舒巴坦、氨曲南、头孢曲松、头孢他啶、环丙沙星、庆大霉素、左氧氟沙星、头孢哌酮/他唑巴坦、妥布霉素和复方新诺明的敏感性明显下降,但对亚胺培南、厄他培南、阿米卡星、头孢吡肟和哌拉西林/他唑巴坦保持较好的敏感性;大部分产ESBLs的菌株表现出对青霉素类、头孢类和氨基糖甙类等药物的多重耐药.产ESBLs的菌株CTX-M基因阳性率为60.00％(6/10),3株为CTX-M-14型;TEM基因阳性率为80.00％(8/10),均为TEM-1型;SHV基因阳性率为90.00％(9/10),5株为SHV-11型.结论 临床血液来源的肺炎克雷伯菌产ESBLs的阳性率较高,耐药性明显高于非产ESBLs菌株,其基因型以TEM-1型和SHV-11型为主.